Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用技术

本发明专利技术公开了Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。本发明专利技术从巴戟天内生真菌拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)A729发酵液中分离出2个Guanacastane类新化合物koninginol A和koninginol B。本发明专利技术通过抗菌活性测试发现，化合物koninginol A对枯草芽孢杆菌具有显著的抗菌活性，化合物koninginol B对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有显著的抗菌活性，可用于制备抗菌药物，具有良好的应用开发前景。因此，本发明专利技术为研究与开发新的抗菌药物提供了候选化合物，为开发利用植物内生真菌资源提供科学依据。

Guanacastane derivatives and their preparation methods and application in the preparation of antimicrobial agents

The invention discloses Guanacastane compounds, a preparation method thereof and application in the preparation of antimicrobial drugs. Two new Guanacastane compounds koninginol A and koninginol B are separated from the fermentation broth of Trichoderma koningiopsis A729, an endophytic fungus of Morinda officinalis. The antimicrobial activity test shows that compound koninginol A has significant antimicrobial activity against Bacillus subtilis, compound koninginol B has significant antimicrobial activity against Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis, and can be used to prepare antimicrobial drugs with good application and development prospects. Therefore, the present invention provides candidate compounds for the research and development of new antimicrobial agents, and provides scientific basis for the development and utilization of Endophytic Fungi Resources in plants.

【技术实现步骤摘要】
Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用
：本专利技术属于生物和医药领域，具体涉及Guanacastane类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。
技术介绍
：植物内生真菌(endophyticfungi)是指生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织内，但不对植物组织引起明显病害症状的真菌(TanRXandZouWX,2001)。内生真菌具有丰富的物种多样性和遗传多样性，迄今已从植物内生真菌中发现了不少新的或稀有的真菌物种，已成为国内外的研究热点。植物内生真菌生长于植物内部的特殊环境中，其产生活性化合物远远超出其植物代谢产物的范围，能够产生各种结构类型独特、具有潜在应用前景的活性物质，已成为发现新的天然活性物质的重要资源。巴戟天(Morindaofficinalis)为茜草科多年生木质藤本植物，是我国的四大南药之一，含有蒽醌类、有机酸类、甾醇类、环烯醚萜苷萜、糖类(林美珍等，2010)等，有强筋骨、祛风湿的作用。研究药理表明：巴戟天具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、消炎镇痛等药理作用。因此，从巴戟天内生真菌中发现具有抗菌作用的新化合物，可为新药研发提供化学实体。
技术实现思路
：本专利技术的第一个目的是提供一类具有抗菌活性的Guanacastane类新化合物。本专利技术的Guanacastane类新化合物，结构如式(I)所示：1为化合物koninginolA、2为化合物koninginolB。本专利技术的第二个目的是提供Guanacastane类化合物koninginolA和koninginolB的制备方法，所述的化合物koninginolA和koninginolB是从拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物中制备得到。优选，具体步骤如下：制备拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经大孔树脂柱用乙醇洗脱得到乙醇提取物，乙醇提取物经浓缩后得到浸膏；浸膏过硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从5:1,1:1v/v梯度洗脱，再用二氯甲烷:甲醇从5:1,2:1v/v梯度洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱，收集二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱下来的馏分，以此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10:1v:v作为展开剂，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E；馏分E以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶柱层析，以体积比正己烷：乙酸乙酯10:1,5:1,2:1,1:1,1:2,1:5梯度洗脱，再用纯乙酸乙酯洗脱，最后用纯甲醇洗脱，分别收集正己烷：乙酸乙酯＝1:2,1:5v/v洗脱下来的馏分E9和E10，以馏分E9进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:2v:v作为展开剂，收集Rf值是1.2/3.5的馏分E9-1，以馏分E10进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:5v:v作为展开剂，收集Rf值是1.4/3.5的馏分E10-1；馏分E9-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为11.4min的组分，然后以体积比为65％的乙腈/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为7.2min的组分，得到化合物koninginolA；馏分E10-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC，流速3mL/min，收集保留时间为21.2min的组分，得到化合物koninginolB。所述的制备拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物是将活化的拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729接入马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10％的接种量接入到马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，200rpm，振荡培养7d，而制得发酵培养物。本专利技术的第三个目的是提供拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729在制备所述的化合物koninginolA或koninginolB中的应用。本专利技术通过抗菌活性测试发现，在100μg/mL浓度作用下，化合物koninginolA对枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的抑制率为97.49％，化合物koninginolB对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的抑制率分别为96.56％、99.14％；选择80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1μg/mL7个作用浓度下对金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌进行最低抑制浓度测定，确定koninginolA对枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度为40μg/mL，化合物koninginolB对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑最低抑制浓度分别为10μg/mL、2μg/mL。结果表明：本专利技术的化合物koninginolA、koninginolB具有显著的抗菌活性，能用于制备抗菌药物。本专利技术的第四个目的是提供所述的化合物koninginolA或koninginolB在制备抗菌药物中的应用。优选，所述的化合物koninginolA在制备抗枯草芽孢杆菌药物中的应用；所述的化合物koninginolB在制备抗金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌药物中的应用。本专利技术的第五个目的是提供一种抗菌药物，含有所述的化合物koninginolA或koninginolB作为有效成分。当有效成分为化合物koninginolA时，所述的抗菌药物优选为抗枯草芽孢杆菌的药物；当有效成分为化合物koninginolB时，所述的抗菌药物优选为抗金黄色葡萄球菌或枯草芽孢杆菌的药物。与现有技术相比，本专利技术的优势在于：本专利技术通过拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养、发酵产物的分离纯化和结构鉴定，获得了2个具有抗菌活性的Guanacastane类新化合物，命名为koninginolA、koninginolB。化合物koninginolA对枯草芽孢杆菌具有良好的抑制活性，化合物koninginolB对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有良好的抑制活性，因此，本专利技术为抗细菌新药研发提供候选化合物，为开发利用植物内生真菌资源提供科学依据。所述的拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729是从药用植物巴戟天(Morindaofficinalis)根中分离得到。本专利技术的拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729于2018年11月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为：GDMCCNo：3.651(该菌种为公开保藏的，公开获取)。附图说明：图1是化合物1的1H-NMR谱；图2是化合物1的13C-NMR谱；图3是化合物1的质谱；图4是化合物2的1H-NMR谱；图5是化合物2的13C-NMR谱；图6是化合物2的质谱。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如式(I)所示任一Guanacastane类化合物：

【技术特征摘要】
1.如式(I)所示任一Guanacastane类化合物：1为化合物koninginolA、2为化合物koninginolB。2.一种Guanacastane类化合物koninginolA和koninginolB的制备方法，其特征在于，所述的化合物koninginolA和koninginolB是从拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物中制备得到。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：制备拟康宁木霉(Trichodermakoningiopsis)A729的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液经大孔树脂柱用乙醇洗脱得到乙醇提取物，乙醇提取物经浓缩后得到浸膏；浸膏过硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从5:1,1:1v/v梯度洗脱，再用二氯甲烷:甲醇从5:1,2:1v/v梯度洗脱，最后用二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱，收集二氯甲烷:甲醇＝5:1v/v洗脱下来的馏分，以此馏分进行TLC薄层层析，以二氯甲烷：甲醇＝10:1v:v作为展开剂，收集Rf值是1.8/3.5的馏分E；馏分E以二氯甲烷:甲醇＝1:1v/v洗脱过SephadexLH-20，然后过正相硅胶柱层析，以体积比正己烷：乙酸乙酯10:1,5:1,2:1,1:1,1:2,1:5梯度洗脱，再用纯乙酸乙酯洗脱，最后用纯甲醇洗脱，分别收集正己烷：乙酸乙酯＝1:2,1:5v/v洗脱下来的馏分E9和E10，以馏分E9进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:2v:v作为展开剂，收集Rf值是1.2/3.5的馏分E9-1，以馏分E10进行TLC薄层层析，以正己烷：乙酸乙酯＝1:5v:v作为展开剂，收集Rf值是1.4/3.5的馏分E10-1；馏分E9-1以体积比为70％的甲醇/水洗脱过半制备型HPLC，流...

【专利技术属性】
技术研发人员：李浩华，陈闪冲，章卫民，刘洪新，李赛妮，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：广东,44