一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法技术

本公开涉及一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法，包括：选择鸡白痢沙门氏菌CVCC533作为攻毒菌株，选择0日龄雏鸡开始预饲，预饲至3日龄；攻毒采用经口软管法，于3日龄、4日龄上午分别进行一次攻毒，2次攻毒在24h内完成，攻毒菌液浓度为4.0×10

Establishment of a Salmonella pullorum model in chickens

The present disclosure relates to a method for establishing a model of Salmonella pullorum in chickens, which includes: selecting Salmonella pullorum CVCC533 as a virus-attacking strain, starting pre-feeding at the age of 10 days and pre-feeding at the age of 3 days; using oral hose method to attack the virus once in the morning of 3 days and 4 days respectively, two times of attack being completed within 24 hours, and the concentration of the virus-attacking liquid being 4.0 x 10 days.

【技术实现步骤摘要】
一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法
本公开属于医药
，具体涉及一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。鸡白痢沙门氏菌病是由鸡白痢沙门氏菌引起的严重危害雏鸡和青年鸡的一种细菌性传染病，以经卵垂直传播和消化道感染的水平传播为主。患病雏鸡精神沉郁，羽毛蓬乱，离群半蹲，呈昏睡状，饮水、采食均下降，嗉囊空无饲料，有的有气体；呼吸困难，相互扎堆，造成少数弱雏压死，极少数后期跋行；病初排含泡沫稀便，后转为白色稀便并粘连泄殖腔周围绒毛，导致病雏排便困难，可见努责、呻吟，甚至发出尖叫。剖检病死鸡，最明显的变化是肝脏肿大、充血、质脆易碎，有粟粒或针尖大小的灰白色坏死灶；胆囊充盈肿大；脾脏肿胀、出血；肺脏有灰白色脓性坏死灶；心脏有白色隆起的坏死灶；胃肠道浆膜面和粘膜面有大小不等的白色坏死灶；盲肠肿胀，内有干酪样坏死物。该病一年四季均可发生，通常2周龄左右最易发病且呈流行性，3周龄以上的鸡发病后极少死亡，耐过鸡则发育不良，成为慢性患者或带菌者，给养鸡业带来巨大的经济损失。我国目前对该病的防治主要是通过检疫并淘汰阳性鸡等措施以净化种鸡场。大多数商品鸡饲养者，还是主要通过抗生素防治该病，但抗生素使用不当或滥用，往往达不到控制该病的目的，还常常导致药物残留和耐药菌株的出现，近年来，该病有扩大流行的趋势。研发防治鸡白痢的新型兽药，再次引发人们重视。疾病动物模型可以解析疾病发生的生理病理机制，服务于疾病预防和治疗的药物研发，是兽药研发及生产过程中不可或缺的支撑条件。目前，关于专利技术人所知晓的鸡白痢沙门氏菌病动物模型的建立方法存在着诸多问题，比如，攻毒方式采用注射或口服滴喂，注射攻毒直接引发血行感染，不符合临床鸡白痢的感染模式；滴喂会导致雏鸡呛咳，引发肺部感染，雏鸡死亡过快、操作中意外死亡较多；预饲不合理，影响造模效果；目前报道中，建模多采用SPF(无特定病原)雏鸡，对实验室环境的净化级别要求较高，且多采用对雏鸡症状的观察作为评价模型建立的标准，主观性强，以上存在的情况导致实际操作中重复性差，效果不稳定。
技术实现思路
针对以上
技术介绍
，本公开提供了一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法，该模型贴近临床鸡白痢沙门氏菌病的感染模式、操作简单、成功率高、重复性好、一致性好、动物发病症状典型，为相关药物研发提供了重要支撑。本公开采用以下技术方案：在本公开的一个或一些典型的实施方式中，提供一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法，该方法包括：选择鸡白痢沙门氏菌CVCC533作为攻毒菌株，选择0日龄雏鸡开始预饲，预饲至3日龄；攻毒采用经口软管法，于3日龄、4日龄分别进行一次攻毒，2次攻毒在24h内完成，攻毒菌液浓度为4.0×108CFU/mL～4.0×109CFU/mL；攻毒后观察雏鸡的精神状态、饮食饮水情况，对死亡雏鸡进行剖检。在本公开的另一个或一些典型的实施方式中，提供一种用于评价鸡白痢沙门氏菌病药物的方法，该方法包括使用上述鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法得到的动物模型。与本专利技术人知晓的相关技术相比，本公开其中的一个技术方案具有如下有益效果：本公开的建模方法贴近临床鸡白痢沙门氏菌病的感染模式、操作简单、成功率高、重复性好、一致性好、动物发病症状典型，模型能广泛应用于鸡白痢沙门氏菌病的相关研究。附图说明构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。图1：实施例2雏鸡平均体重/g。图2：实施例2雏鸡平均进食量/g。图3：实施例3雏鸡平均体重/g。图4：实施例3雏鸡平均进食量/g。图5：雏鸡肝脏病变，左为攻毒组鸡的部分肝脏，右为对照组鸡的部分肝脏。图6：雏鸡脾脏病变，左为攻毒组鸡脾脏，右为对照组鸡脾脏。图7：雏鸡肾脏病变，左为攻毒组鸡的部分肾脏，右为对照组鸡的部分肾脏。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。正如
技术介绍
所介绍的，专利技术人所知晓的鸡白痢沙门氏菌病动物模型的建立方法存在一定的不足，为了解决如上的技术问题，本公开提出了一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法，通过该方法制备得到的动物模型贴近临床鸡白痢沙门氏菌病的感染模式、操作简单、成功率高、重复性好、一致性好、动物发病症状典型，为相关药物研发提供了重要支撑。专利技术人研究发现该模型的建立与实验动物的品种、日龄、沙门氏菌的菌株、攻毒剂量、攻毒途径、次数等因素密切相关。为此在本公开的一个或一些典型的实施方式中，该方法包括：选择鸡白痢沙门氏菌CVCC533作为攻毒菌株，选择0日龄雏鸡开始预饲，预饲至3日龄；攻毒采用经口软管法，于3日龄、4日龄分别进行一次攻毒，2次攻毒在24h内完成，攻毒菌液浓度为4.0×108CFU/mL～4.0×109CFU/mL；攻毒后观察雏鸡的精神状态、饮食饮水情况，对死亡雏鸡进行剖检。在本公开的一个或一些实施方式中，选择的是购自中国兽医药品监察所的菌株CVCC533作为攻毒菌株，经试验验证，建立的动物模型成功率高、重复性好、一致性好等。在本公开的一个或一些实施方式中，雏鸡的种类为海兰褐雏鸡。不同品种的鸡由于免疫遗传因子的不同表达，导致免疫性状不同，进而表现出不同的对外界不良环境的抵抗能力。经试验对比发现，海兰褐雏鸡对鸡白痢沙门氏菌CVCC533较敏感，因此本公开中使用的是普通海兰褐雏鸡。在本公开的一个或一些实施方式中，攻毒时采用的细菌悬液的浓度为4.0×108～4.0×109cfu/mL；攻毒剂量0.5～1mL/只/次；进一步的，攻毒剂量0.5mL/只/次。试验研究过程中发现，采用不同浓度不同剂量进行攻毒对造模效果影响较大，经试验验证，选择该浓度的细菌悬液和攻毒剂量，能够获得较好评价药物效果的动物疾病模型。进一步的，攻毒用细菌悬液应为攻毒当日新鲜制取。在本公开的一个或一些实施方式中，选择0日龄雏鸡开始预饲，预饲至3日龄；预饲至3日龄的目的是获得一个较佳雏鸡状态(雏鸡体重30～40g)，此时雏鸡已对环境条件有了一定的适应能力，可避免由于应激过大而造成的大量死亡，而自身的免疫系统还未发育完全，专利技术人研究发现，该日龄的雏鸡容易感染鸡白痢沙门氏菌CVCC533，从而获得症状一致性较高的鸡白痢沙门氏菌病模型。在本公开的一个或一些实施方式中，为降低雏鸡由于其他原因的过快死亡和模拟自然发病模式，本公开采用经口软管法的攻毒方法，灌喂器具为1mL一次性使用无菌注射器、一次性使用静脉输液针(去针，保留软管约4cm)，灌喂时轻掰开雏鸡喙，将软管经口轻轻插入雏鸡嗉囊后，将攻毒菌液注射至雏鸡体内，因软管直接进入嗉囊，降低了液体呛入气管的可能性，可避免雏鸡呛咳而造成的急性死亡。优势在于可以更准确的控制进入消化道的攻毒剂量，降低操作失误带本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法，其特征是，该方法包括：选择鸡白痢沙门氏菌CVCC533作为攻毒菌株，选择0日龄雏鸡开始预饲，预饲至3日龄；攻毒采用经口软管法，于3日龄、4日龄分别进行一次攻毒，2次攻毒在24h内完成，攻毒菌液浓度为4.0×108CFU/mL～4.0×109CFU/mL；攻毒后观察雏鸡的精神状态和进食情况，对死亡雏鸡进行剖检。

【技术特征摘要】
1.一种鸡白痢沙门氏菌病模型的建立方法，其特征是，该方法包括：选择鸡白痢沙门氏菌CVCC533作为攻毒菌株，选择0日龄雏鸡开始预饲，预饲至3日龄；攻毒采用经口软管法，于3日龄、4日龄分别进行一次攻毒，2次攻毒在24h内完成，攻毒菌液浓度为4.0×108CFU/mL～4.0×109CFU/mL；攻毒后观察雏鸡的精神状态和进食情况，对死亡雏鸡进行剖检。2.如权利要求1所述的建立方法，其特征是：雏鸡的种类为海兰褐雏鸡。3.如权利要求1所述的建立方法，其特征是：攻毒时，攻毒剂量0.5～1mL/只/次；进一步的，攻毒剂量0.5mL/只/次。4.如权利要求1所述的建立方法，其特征是：攻毒时，雏鸡体重为30～40g。5.如权利要求1所述的建立方法，其特征是：灌喂器具为1mL一次性使用无菌注射器、一次性使用静脉输液针，去针，保留软管4cm。6.如权利要求1所述的建立方法，其特征是：灌喂时轻掰开雏鸡喙，将软管经口插入雏鸡...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雷，单宝龙，王春凤，谷巍，鹿瑶，姜延龙，张甜甜，王红，吕文亮，林显华，徐海燕，刘辉，
申请(专利权)人：山东宝来利来生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37