炎症促进因子表达抑制剂、其有效成分的筛选方法、对该方法有用的表达盒、诊断药和诊断方法技术

本发明专利技术发现对炎症促进因子的表达量产生影响的新型因子，提供基于该发现的炎症促进因子表达抑制剂、其开发工具，以及提供免疫疾病、炎症性疾病、疼痛性疾病等的诊断药和诊断方法。含有选自由RBMS2表达抑制剂和RBMS2功能抑制剂组成的组中的至少1种的炎症促进因子表达抑制剂、以RBMS2的表达或功能为指标的筛选方法、和对该方法有用的表达盒、以及含有RBMS2基因表达产物检测剂的诊断药、和以RBMS2基因表达量为指标的疾病检测方法。

Inflammatory Promoting Factor Expression Inhibitor, Screening Method of Its Effective Components, Expression Box, Diagnostic Drugs and Diagnostic Method Useful for this Method

The invention discovers novel factors influencing the expression of inflammatory promoting factors, provides an inflammatory promoting factor expression inhibitor based on the discovery, its development tools, and provides diagnostic drugs and diagnostic methods for immune diseases, inflammatory diseases, pain diseases, etc. At least one of the group consisting of free RBMS2 expression inhibitors and RBMS2 function inhibitors, screening methods based on the expression or function of RBMS2, expression boxes useful for this method, diagnostic drugs containing RBMS2 gene expression product detectors, and disease detection methods based on the expression level of RBMS2 gene.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】炎症促进因子表达抑制剂、其有效成分的筛选方法、对该方法有用的表达盒、诊断药和诊断方法
本专利技术涉及：炎症促进因子表达抑制剂、其有效成分的筛选方法和对该方法有用的表达盒、以及免疫疾病、炎症性疾病、疼痛性疾病等的诊断药和诊断方法等。
技术介绍
因IL-6、COX-2等因炎症促进因子而出现其症状或者使症状恶化的疾病、例如免疫疾病、炎症性疾病、疼痛性疾病等疾病的患者数量非常多。例如，对于作为代表性的免疫疾病的类风湿性关节炎，被认为在日本国内约有70万人、在全世界约有7000万人的患者。另外，作为炎症性疾病之一的关节炎仅在日本就有约1560万人的患者，还可称之为关节炎代表性的膝关节骨性关节炎(osteoarthritisoftheknee)推测在日本有约1000万人的患者。进而，作为疼痛性疾病代表性的腰痛仅在日本国内就有2400万人的患者。此外，这些疾病的患者数量随着高龄化的发展有逐年增加的倾向。可认为：这样的现象不仅出现在高龄化率社会最高的日本，而且由于未来生活环境、饮食生活/营养状态的改善、医疗技术的进步等，在高龄化进展中的所有国家均同样会发生。通过更早期地发现这些疾病，开始进行适合的治疗，抑制疾病的加重，甚至能较高地保持患者的QOL。因此，有关这些疾病的治疗药、其开发工具的研究、进而开发出这些疾病的诊断药、诊断方法已成为社会上非常重要的需求。其中，近些年明确了炎症促进因子mRNA的转录后调节与上述疾病的相关性。启示出：炎症促进因子mRNA的降解控制成为确定炎症反应的持续时间的重要因素，与炎症促进因子的mRNA水平的降解、稳定化相关的因子被认为参与了免疫疾病、炎症性疾病、疼痛性疾病的发病、慢性化。例如，非专利文献1中记载了：三重四脯氨酸(Tristetraprolin：TTP)、Regnase-1有助于IL-6mRNA的降解。另外，非专利文献2中公开了：Arid5a控制IL-6mRNA的稳定性。已经阐明了这些因子的异常通过炎症的促进等而在上述疾病的发病或恶化机理中发挥着重要作用。因此，对炎症促进因子的表达量产生影响的因子是上述疾病治疗药的靶标，期望获得这样的因子的新发现。另外，通过测定对患者的细胞、血液等中的炎症促进因子的表达量产生影响的物质的量，而能够诊断上述疾病的有无、进展程度的诊断药、诊断方法是非常有用的，期望获得这样的因子的新发现。RNA-结合基序(RNA-bindingmotif),单链相互作用蛋白2(single-stranded-interactingprotein2：RBMS2)是被称为在N末端侧具有2个RNA结合结构域的蛋白质，但实际上尚没有对其功能进行解析这样的报道，其功能至今尚不明确。现有技术文献非专利文献非专利文献1：InflammationandRegeneration,Vol.33,No.1,January2013,pp54-65.非专利文献2：PNAS,June4,2013,vol.110,no.23,pp9409-9414
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的课题在于：发现对炎症促进因子的表达量产生影响的新型因子，及提供基于该发现的炎症促进因子表达抑制剂、其开发工具，以及提供免疫疾病、炎症性疾病、疼痛性疾病等的诊断药和诊断方法。用于解决问题的方案本专利技术人等对上述课题进行了深入研究，结果发现RBMS2进行了各种炎症促进因子mRNA的转录后调节。进而，对于因炎症促进因子而出现其症状或使症状恶化的疾病，发现RBMS2的表达与炎症促进因子的表达正相关。基于这些见解，发现：可以通过抑制RBMS2的表达或功能来抑制炎症促进因子，甚至能够进行上述疾病的预防或治疗、以及可以通过将RBMS2的表达量作为指标来诊断这些疾病。基于以上内容进行了进一步研究，结果完成了本专利技术。即，本专利技术包括下述的方式：项1.一种表达盒，其包含：RBMS2基因表达调控区和以被该区域控制表达的方式配置的基因。项2.根据项1所述的表达盒，其中，前述基因为报道基因。项3.一种载体，其包含项1或2所述的表达盒。项4.一种细胞，其包含项3所述的载体。项5.一种炎症促进因子表达抑制剂的有效成分的筛选用试剂，其含有由以下组分组成的组中的至少一种：包含RBMS2基因表达调控区和以被该区域控制表达的方式配置的基因的表达盒；包含该表达盒的载体；以及包含该载体的细胞。项6.一种抑制RBMS2的表达或功能的物质的筛选方法，其以在被检物质的存在下的选自由下述(i)～(iii)组成的组中的至少1种作为指标：(i)被RBMS2基因表达调控区控制表达的基因表达量、(ii)RBMS2与包含AU富含元件的RNA的结合量、和(iii)RBMS2过量表达细胞中的、在3’-UTR中包含AU富含元件的mRNA量或源自前述mRNA的蛋白质量。项7.根据项6所述的筛选方法，其包括：在被检物质的存在下的前述指标的值低于在没有被检物质的存在下的前述指标的值时，选择该被检物质作为抑制RBMS2的表达或功能的物质。项8.根据项6或7所述的筛选方法，其中，前述AU富含元件为源自选自由IL-6mRNA、COX-2mRNA、IL-8mRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA、MMP1mRNA、IL-24mRNA和c-MycmRNA组成的组中的至少1种mRNA的AU富含元件。项9.根据项6～8中任一项所述的筛选方法，其选择前述抑制RBMS2的表达或功能的物质作为炎症促进因子表达抑制剂的有效成分或其候选物质。项10.根据项6～9中任一项所述的筛选方法，其包括下述工序(a1)～(c1)：(a1)使含有表达盒的表达系统与被检物质接触的工序，所述表达盒包含RBMS2基因表达调控区和以被该区域控制表达的方式配置的基因；(b1)测定将接触了被检物质的表达系统中的前述基因的表达量作为被检表达量，将该被检表达量、与作为对照表达量的未接触被检物质的表达系统中的前述基因的表达量进行比较的工序；以及(c1)被检表达量低于对照表达量时，选择该被检物质作为抑制RBMS2的表达的物质的工序。项11.根据项10所述的筛选方法，其中，前述表达系统为细胞。项12.根据项10或11所述的筛选方法，其中，前述基因为报道基因。项13.根据项6～9中任一项所述的筛选方法，其包括下述工序(a2)～(c2)：(a2)在被检物质的存在下使包含AU富含元件的RNA与RBMS2接触的工序；(b2)测定在被检物质的存在下接触时的前述RNA与前述RBMS2的结合量作为被检结合量，将该被检结合量与对照结合量进行比较的工序，所述对照结合量是在没有被检物质的存在下接触时的前述RNA与前述RBMS2的结合量；以及(c2)被检结合量低于对照结合量时，选择该被检物质作为抑制RBMS2功能的物质的工序。项14.根据项13所述的筛选方法，其中，前述结合量的测定方法为免疫沉淀法或凝胶迁移法。项15.根据项6～9中任一项所述的筛选方法，其包括下述工序(a3)～(c3)：(a3)使含有在3’-UTR中包含AU富含元件的mRNA且过量表达了RBMS2的细胞与被检物质接触的工序；(b3)测定与被检物质接触的细胞中的前述mRNA量或源自前述mRNA的蛋白质量作为被检量，将不与被检物质接触的细胞中的前述mRNA量或源自前述mRNA的蛋白质量作为对照量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种炎症促进因子表达抑制剂的有效成分的筛选用试剂，其含有由包含RBMS2基因表达调控区和以被该区域控制表达的方式配置的基因的表达盒、包含该表达盒的载体、以及包含该载体的细胞组成的组中的至少一种。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.10 JP 2016-094931;2016.08.22 JP 2016-162121.一种炎症促进因子表达抑制剂的有效成分的筛选用试剂，其含有由包含RBMS2基因表达调控区和以被该区域控制表达的方式配置的基因的表达盒、包含该表达盒的载体、以及包含该载体的细胞组成的组中的至少一种。2.一种炎症促进因子表达抑制剂的有效成分的筛选方法，其以在被检物质的存在下的选自由下述(i)～(iii)组成的组中的至少1种作为指标：(i)被RBMS2基因表达调控区控制表达的基因表达量、(ii)RBMS2与包含AU富含元件的RNA的结合量、和(iii)RBMS2过量表达细胞中的、在3’-UTR中包含AU富含元件的mRNA量或源自所述mRNA的蛋白质量。3.根据权利要求2所述的筛选方法，其包括：在被检物质的存在下的所述指标的值低于在没有被检物质的存在下的所述指标的值时，选择该被检物质作为炎症促进因子表达抑制剂的有效成分。4.根据权利要求2或3所述的筛选方法，其中，所述AU富含元件为源自选自由IL-6mRNA、COX-2mRNA、IL-8mRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA、MMP1mRNA、IL-24mRNA和c-MycmRNA组成的组中的至少1种mRNA的AU富含元件。5.根据权利要求2～4中任一项所述的筛选方法，其包括下述工序(a1)～(c1)：(a1)使含有表达盒的表达系统与被检物质接触的工序，所述表达盒包含RBMS2基因表达调控区和以被该区域控制表达的方式配置的基因；(b1)测定接触了被检物质的表达系统中的所述基因的表达量作为被检表达量，将该被检表达量、与作为对照表达量的未接触被检物质的表达系统中的所述基因的表达量进行比较的工序；以及(c1)被检表达量低于对照表达量时，选择该被检物质作为炎症促进因子表达抑制剂的有效成分的工序。6.根据权利要求5所述的筛选方法，其中，所述表达系统为细胞。7.根据权利要求5或6所述的筛选方法，其中，所述基因为报道基因。8.根据权利要求2～4中任一项所述的筛选方法，其包括下述工序(a2)～(c2)：(a2)在被检物质的存在下使包含AU富含元件的RNA与RBMS2接触的工序；(b2)测定在被检物质的存在下接触时的所述RNA与所述RBMS2的结合量作为被检结合量，将该被检结合量与对照结合量进行比较的工序，所述对照结合量是在没有被检物质的存在下接触时的所述RNA与所述RBMS2的结合量；以及(c2)被检结合量低于对照结合量时，选择该被检物质作为炎症促进因子表达抑制剂的有效成分的工序。9.根据权利要求2～4中任一项所述的筛选方法，其包括下述工序(a3)～(c3)：(a3)使含有在3’-UTR中包含AU富含元件的mRNA且过量表达了RBMS2的细胞与被检物质接触的工序；(b3)测定与被检物质接触的细胞中的所述mRNA量或源自所述mRNA的蛋白质量作为...

【专利技术属性】
技术研发人员：浅原弘嗣，千叶朋希，阿部健太郎，
申请(专利权)人：国立大学法人东京医科齿科大学，日本脏器制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP