CD70和CD3的抗体构建体制造技术

本公开涉及一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人CD70的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。此外，本公开提供了一种编码所述抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。此外，本公开提供了一种用于产生本公开的所述抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医疗用途和包含所述抗体构建体的试剂盒。

Antibody constructs of CD70 and CD3

The present disclosure relates to a bispecific antibody construct comprising a first binding domain of human CD70 bound to a target cell surface and a second binding domain of human CD3 bound to a T cell surface. In addition, the present disclosure provides a polynucleotide encoding the antibody construct, a carrier containing the polynucleotide, and a host cell transformed or transfected with the polynucleotide or carrier. In addition, the present disclosure provides a method for producing the antibody construct of the present disclosure, the medical use of the antibody construct and a kit containing the antibody construct.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD70和CD3的抗体构建体本专利技术涉及一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人CD70的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。此外，本专利技术提供一种编码所述抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。此外，本专利技术提供一种用于产生本专利技术的所述抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医疗用途和包含所述抗体构建体的试剂盒。CD70(CD27L，TNFSF7)是II型整合膜蛋白，其正常表达局限于活化的T和B细胞、成熟树突状细胞和胸腺髓质上皮细胞的亚组。CD70的生物学功能经由结合到在淋巴细胞和NK细胞上表达的CD27受体而介导。CD70相互作用调控B细胞成熟、T细胞共刺激和记忆T细胞功能。小鼠中CD27的基因切除(其消除CD70信号传导)不影响B和T细胞的发育，但干扰对病毒再攻击的记忆响应。除其高度受限的正常表达以外，已在60％的非霍奇金淋巴瘤(Non-HodgkinLymphoma，NHL)、70％的透明细胞肾细胞癌瘤(clearcellrenalcellcarcinoma，ccRCC)、40％的乳头状RCC和25％的胰腺癌瘤、22％的喉/咽癌瘤、15％的卵巢癌瘤和10％的肺腺癌瘤及胶质母细胞瘤中记录异常的CD70表达。在美国，每年有14,080人死于转移性RCC(AmericanCancerSociety：CancerFactsandFigures.2015)。虽然所有患者均用血管生成抑制剂(贝伐单抗、舒尼替尼、索拉非尼、阿西替尼)或mTOR抑制剂(坦罗莫司、依维莫司)加以治疗，但患有转移性RCC的患者的5年存活率却仍然低得令人沮丧(20％)(AmericanCancerSociety：CancerFactsandFigures2015)。此疾病仍存在远未满足的医学需求，在美国，每年高达10,000名具有表达CD70的转移性ccRCC的患者可能受益于CD70靶向疗法。弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)为最大的NHL亚型，其每年在美国出现28,740例新病例(AmericanCancerSociety：CancerFactsandFigures，2015)。71％的DLBCL肿瘤表达CD70，且虽然大多数患者最初对护理标准疗法(美罗华(Rituxan)加环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松)有响应，但许多复发或成为难治性的，且每年有19,790名患者死于此疾病(AmericanCancerSociety：CancerFactsandFigures2015)。因此，DLCBL仍存在明显未满足的医学需求，并且在美国，每年高达14,000名具有表达CD70的DLBCL的患者可能受益于CD70靶向疗法。基于在美国每年死于胰腺癌(40,560)、喉咽癌瘤(6,300)、卵巢癌瘤(14,180)和肺癌瘤(158,000)的患者的数量(AmericanCancerSociety：CancerFactsandFigures，2015)，且考虑到CD70表达在这些癌症类型中的普遍存在，在美国，每年高达30,000名具有表达CD70的实体肿瘤而医学需求未满足的其他患者可能受益于CD70靶向疗法。因为仍需要具有可供用于治疗与CD70过表达相关的癌症疾病的另外选项(诸如上文所论述的选项)，所以在此提供以双特异性CD70xCD3抗体构建体形式解决此问题的手段和方法。因此，在第一方面，本专利技术提供一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人CD70的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。必须注意，如本文所用，除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一个/种”和“该/所述”包括复数个提及物。因此，例如，对“一种试剂”的提及包括此类不同试剂中的一者或多者，且对“该方法”的提及包括本领域的普通技术人员已知的可针对本文所述的方法进行修改或代替的等效步骤和方法的提及。除非另外指示，否则在一系列要素之前的术语“至少”应理解为指该系列中的每一要素。本领域的技术人员将认识到或能够仅使用常规实验就能确定本文所述的本专利技术的特定实施方案的许多等效形式。本专利技术旨在涵盖此类等效形式。每当在本文中使用时，术语“和/或”包括“和”、“或”和“由所述术语连接的要素的所有或任何其他组合”的含义。如本文所用，术语“约”或“大致”意指在给定值或范围的±20％内，优选±15％内，更优选±10％内且最优选±5％内。在本说明书通篇和随后的权利要求中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”和诸如“包括(comprises)”和“含有(comprising)”的变化形式应理解为暗示包括所述整数或步骤或整数或步骤的组，但不排除任何其他整数或步骤或整数或步骤的组。在本文中使用时，术语“包含”可被术语“含有”或“包括”代替，或有时在本文中使用时，被术语“具有”代替。当在本文中使用时，“由......组成”排除所主张要素中未规定的任何要素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本上由......组成”不排除并不实质性影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。在本文中的各种情况下，术语“包含”、“基本上由......组成”和“由......组成”中的任一者可用其他两个术语中的任一者替换。术语“抗体构建体”是指其中结构和/或功能基于抗体(例如全长或完整免疫球蛋白分子)的结构和/或功能的分子。因此，抗体构建体能够结合到其特异性靶标或抗原。此外，根据本专利技术的抗体构建体包含抗体的允许靶标结合的最小结构需要。此最小需要可例如通过存在至少三个轻链CDR(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)，优选所有六个CDR来定义。根据本专利技术的构建体所基于的抗体包括例如单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、去免疫化(deimmunized)抗体、人源化抗体和人抗体。全长或完整抗体在根据本专利技术的“抗体构建体”的定义内，也包括骆驼抗体和通过生物技术或蛋白质工程改造方法或过程产生的其他免疫球蛋白抗体。这些全长抗体可为例如单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、去免疫化抗体、人源化抗体和人抗体。全长抗体的片段(诸如VH、VHH、VL、(s)dAb、Fv、Fd、Fab、Fab′、F(ab′)2或“rIgG”(“半抗体”))也在“抗体构建体”的定义内。根据本专利技术的抗体构建体也可为抗体的经修饰片段，也称为抗体变体，诸如scFv；di-scFv或bi(s)-scFv；scFv-Fc；scFv拉链(scFv-zipper)；scFab；Fab2；Fab3；双功能抗体(diabody)；单链双功能抗体；串联双功能抗体(Tandab)；串联di-scFv；串联tri-scFv；“微型抗体”，其由如下结构例示：(VH-VL-CH3)2、(scFv-CH3)2、((scFv)2-CH3+CH3)、((scFv)2-CH3)或(scFv-CH3-scFv)2；多功能抗体，诸如三功能抗体或四功能抗体；和单结构域抗体，诸如纳米抗体，或仅含一个可变结构域(其可为VHH、VH或VL)的独立于其他V区或结构域而特异性结合抗原或表位的单可变结构域抗体。根据本专利技术的抗体构建体的更优选形本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人CD70的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3和至少猕猴CD3的第二结合结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.31 US 62/199,935;2016.02.03 US 62/290,8861.一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人CD70的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3和至少猕猴CD3的第二结合结构域。2.根据权利要求1所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含含有CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区，其中·所述CDR-H1具有氨基酸序列X1YX2MX3(SEQIDNO：1869)，其中X1为S、T或V，X2为A或S，并且X3为S或N；·所述CDR-H2具有氨基酸序列X1ISX2SGGX3X4X5X6AESVX7G(SEQIDNO：1870)，其中X1为A、Y、V、L或T，X2为G或S，X3为R、Y、S、G或I，X4为T、I、P或A，X5为F、Y、N、Q或D，X6为Y或F，并且X7为E、K或Q；·所述CDR-H3具有氨基酸序列X1DYSNYX2X3FDY(SEQIDNO：1871)，其中X1为H、G或V，X2为P、A、L或F，并且X3为Y或F；·所述CDR-L1具有氨基酸序列RAX1QX2X3X4X5X6X7LX8(SEQIDNO：1872)，其中X1为S或G，X2为S或G，X3为I或V，X4为R、S或无氨基酸，X5为S或G，X6为S、N、T或D，X7为Y或无氨基酸，并且X8为A或G；·所述CDR-L2具有氨基酸序列X1X2SX3X4X5X6(SEQIDNO：1873)，其中X1为G或A，X2为A或S，X3为S、T、N或I，X4为R或L，X5为A或Q，并且X6为T或S；以及·所述CDR-L3具有氨基酸序列QQYX1X2X3PX4X5(SEQIDNO：1874)，其中X1为G、Y或F，X2为D、S、Y、I或A，X3为L、T、S或Y，X4为F、L、P或I，并且X5为T或P。3.根据权利要求1或2所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含含有CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区，其中·所述CDR-H1具有氨基酸序列SYSMN(SEQIDNO：1422)或X1YAMS(SEQIDNO：1875)，其中X1为S、T或V；·所述CDR-H2具有选自以下的氨基酸序列：YISSSGGYIYYAESVKG(SEQIDNO：1423)、VISGSGGITDFAESVKG(SEQIDNO：1367)和X1ISGSGGX2X3X4YAESVX5G(SEQIDNO：1876)，其中X1为A、V、L或T，X2为R、S或G，X3为T、P或A，X4为F、N、Y或Q，并且X5为E、K或Q；·所述CDR-H3具有选自以下的氨基酸序列：GDYSNYAYFDY(SEQIDNO：1424)、HDYSNYFFFDY(SEQIDNO：1368)和X1DYSNYX2X3FDY(SEQIDNO：1877)，其中X1为H或V，X2为P、L或A，并且X3为Y或F；·所述CDR-L1具有氨基酸序列RASQGISNYLA(SEQIDNO：1425)或RAX1QX2X3X4X5X6YLX7(SEQIDNO：1878)，其中X1为S或G，X2为S或G，X3为I或V，X4为R或S，X5为S或G，X6为S、T、N或D，并且X7为A或G；·所述CDR-L2具有氨基酸序列AASXLQS(SEQIDNO：1879)，其中X为T或I；或GX1SX2RAT(SEQIDNO：1880)，其中X1为A或S，并且X2为S或N；以及·所述CDR-L3具有选自以下的氨基酸序列：QQYYSTPLT(SEQIDNO：1427)、QQYFAYPIT(SEQIDNO：1371)和QQYGX1X2PX3X4(SEQIDNO：1881)，其中X1为D、Y、S或I，X2为L、S或T，X3为F或P，并且X4为T或P。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含含有CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区，其中·所述CDR-H1具有氨基酸序列X1YAMS(SEQIDNO：1875)，其中X1为S、T或V；·所述CDR-H2具有氨基酸序列X1ISGSGGX2X3X4YAESVX5G(SEQIDNO：1876)，其中X1为A、V、L或T，X2为R、S或G，X3为T、P或A，X4为F、N、Y或Q，并且X5为E、K或Q；·所述CDR-H3具有氨基酸序列X1DYSNYX2X3FDY(SEQIDNO：1877)，其中X1为H或V，X2为P、L或A，并且X3为Y或F；·所述CDR-L1具有氨基酸序列RAX1QX2X3X4X5X6YLX7(SEQIDNO：1878)，其中X1为S或G，X2为S或G，X3为I或V，X4为R或S，X5为S或G，X6为S、T、N或D，并且X7为A或G；·所述CDR-L2具有氨基酸序列GX1SX2RAT(SEQIDNO：1880)，其中X1为A或S，并且X2为S或N；以及·所述CDR-L3具有氨基酸序列QQYGX1X2PX3X4(SEQIDNO：1881)，其中X1为D、Y、S或I，X2为L、S或T，X3为F或P，并且X4为T或P。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含含有CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区，其中·所述CDR-H1具有选自以下的氨基酸序列：SYAMS(SEQIDNO：1044)、TYAMS(SEQIDNO：1142)、VYAMS(SEQIDNO：1436)和SYSMN(SEQIDNO：1422)；·所述CDR-H2具有选自以下的氨基酸序列：AISGSGGRTFYAESVEG(SEQIDNO：1087)、VISGSGGRPNYAESVKG(SEQIDNO：1045)、AISGSGGSTFYAESVKG(SEQIDNO：1171)、AISGSGGSTFYAESVQG(SEQIDNO：1213)、AISGSGGGTFYAESVKG(SEQIDNO：1227)、LISGSGGRTYYAESVKG(SEQIDNO：1241)、AISGSGGRAQYAESVQG(SEQIDNO：1255)、TISGSGGSTFYAESVKG(SEQIDNO：1437)、YISSSGGYIYYAESVKG(SEQIDNO：1423)和VISGSGGITDFAESVKG(SEQIDNO：1367)；·所述CDR-H3具有选自以下的氨基酸序列：HDYSNYPYFDY(SEQIDNO：1088)、VDYSNYLFFDY(SEQIDNO：1046)、HDYSNYAYFDY(SEQIDNO：1438)、GDYSNYAYFDY(SEQIDNO：1424)和HDYSNYFFFDY(SEQIDNO：1368)；·所述CDR-L1具有选自以下的氨基酸序列：RASQSIRSSYLA(SEQIDNO：1089)、RASQSVRSTYLA(SEQIDNO：1145)、RAGQSVRSSYLG(SEQIDNO：1047)、RASQSVRSSYLA(SEQIDNO：1173)、RASQSVRSNYLA(SEQIDNO：1187)、RASQSVRGNYLA(SEQIDNO：1215)、RASQSIRSNYLA(SEQIDNO：1229)、RASQSVSSNLA(SEQIDNO：1257)、RASQGVRSDYLA(SEQIDNO：1271)、RASQGVRSSYLA(SEQIDNO：1341)和RASQGISNYLA(SEQIDNO：1369)；·所述CDR-L2具有选自以下的氨基酸序列：GASSR...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·劳姆，W·戴斯汀，C·布鲁麦尔，M·潘泽，P·霍夫曼，E·纳赫沃尔德，O·诺兰史蒂沃克斯，R·路特布斯，
申请(专利权)人：安进研发慕尼黑股份有限公司，安进股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE