活性肽、重组载体、重组细胞、药物组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种活性肽、重组载体、重组细胞、药物组合物及其制备方法和应用。该活性肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。该活性肽能够抑制胃癌细胞增殖且安全性较高。

Active Peptides, Recombinant Vectors, Recombinant Cells, Pharmaceutical Compositions, Their Preparation and Application

The invention relates to an active peptide, a recombinant carrier, a recombinant cell, a pharmaceutical composition, a preparation method and application thereof. The amino acid sequence of the active peptide is shown in SEQ ID No.1. The bioactive peptide can inhibit the proliferation of gastric cancer cells and has high safety.

【技术实现步骤摘要】
活性肽、重组载体、重组细胞、药物组合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种活性肽、重组载体、重组细胞、药物组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
在医学上，癌(cancer)是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。导致癌症的因素有很多种，其中，过量的自由基会导致细胞组织受到肿瘤胁迫，肿瘤系统和抗肿瘤系统失衡，从而导致机体组织细胞、蛋白和核酸等生物大分子发生损伤，进而引发癌症的产生，对人体健康造成极大损害，因此，有效的抗肿瘤物质进行抗肿瘤对于维护机体健康具有极其重要的作用。目前，主要的抗肿瘤方式为肿瘤化疗，肿瘤化疗对白血病、恶性淋巴瘤等的治疗具有一定地效果。但是对危害人类生命健康最严重的、占恶性肿瘤90％以上的实体瘤的治疗未能达到满意的效果。胃癌是世界范围内癌症死亡的第二大原因，尽管存在许多地理性差异。预防和个性化治疗被认为是降低胃癌死亡率的最佳选择。传统的一些抗肿瘤药物在预防和个性化治疗胃癌方面具有一定的效果，但这些药物大多具有不同程度的副作用，不宜长期服用。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种能够抑制胃癌细胞增殖且安全性较高的活性肽。此外，提供一种重组载体、重组细胞、药物组合物及其制备方法和应用。一种活性肽，所述活性肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。上述活性肽的氨基酸序列为Phe-His-Gly-Glu-Gly-Tyr，使得该活性肽能够有效地抑制胃癌细胞增殖，且该活性肽无毒副作用，安全性较高。经试验验证，上述活性肽能够促进HGC(humangastriccarcinomacell，人胃癌细胞)内的ROS(活性氧簇，reactiveoxygenspecies)的大量分泌，以对HGC产生氧化性损伤，降低HGC的细胞膜电位并将HGC阻滞于G0/G1期，以抑制HGC的增殖，影响与细胞凋亡相关蛋白的表达，促进HGC凋亡，从而达到抗HGC的效果。一种重组载体，所述重组载体含有所述活性肽的编码序列。在其中一个实施例中，所述编码序列为如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；或所述编码序列为与SEQIDNo.2所示核苷酸序列具有92％同源性的核苷酸序列；或所述编码序列为由SEQIDNo.2所示核苷酸序列中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的核苷酸序列。一种重组载体，所述重组载体含有编码上述所述活性肽的核苷酸。一种重组细胞，所述重组细胞含有编码权上述所述活性肽的核苷酸；或者，所述重组细胞含有上述所述重组载体。一种药物组合物，所述药物组合物中的活性组分包括上述所述活性肽。一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中的活性组分包括上述所述活性肽。上述所述的活性肽、上述所述的重组载体、上述所述的重组细胞或上述所述的药物组合物在制备抑制胃癌细胞增殖的药物中的应用。上述所述的活性肽、上述所述的重组载体、上述所述的重组细胞或上述所述的药物组合物在制备预防或治疗胃癌的药物中的应用。上述所述的活性肽在制备食品或保健品中的应用。上述所述的活性肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：从石金钱龟中分离得到所述活性肽；或通过化学合成方法合成所述活性肽。在其中一个实施例中，所述从石金钱龟中分离得到所述活性肽包括如下步骤：将石金钱龟肉酶解，得到酶解物；及采用有机溶剂对所述酶解物进行萃取，得到所述活性肽。附图说明图1为实施例1的活性肽的质谱图；图2为实施例1的活性肽的高效液相色谱图；图3为I～IV组的细胞凋亡的FACS分析的散点图；图4为I～IV组的细胞凋亡的柱状统计图；图5为I～IV组的细胞周期影响的FACS分析对比图；图6为I～IV组的细胞周期影响的柱状统计图；图7为IV组的细胞内ROS的相对含量随培养时间的变化曲线图；图8为IV组的细胞中线粒体膜电位下降的细胞比例随培养时间的变化曲线图；图9为I～IV组的细胞中Caspase-3、Cleaved-caspase-3、Caspase-9、Cleaved-caspase-9、Cleaved-PARP蛋白相对表达量的电泳对比图；图10为I～IV组的细胞中Caspase-3、Cleaved-caspase-3、Caspase-9、Cleaved-caspase-9、Cleaved-PARP蛋白相对表达量的柱状对比图；图11为I～IV组的细胞中Trx、TrxR、ASK1、p-ASK1蛋白相对表达量的电泳对比图；图12为I～IV组的细胞中Trx、TrxR、ASK1、p-ASK1蛋白相对表达量的柱状对比图；图13为I～IV组的细胞中p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白相对表达量的电泳对比图；图14为I～IV组的细胞中p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白相对表达量的柱状对比图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳的实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本研究一实施方式提供了一种活性肽，其氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。具体地，SEQIDNo.1所示的氨基酸序列为Phe-His-Gly-Glu-Gly-Tyr。其中，Phe表示苯丙氨酸，缩写为F。His表示组氨酸，缩写为H。Gly表示甘氨酸，缩写为G。Glu表示谷氨酸，缩写为E。Tyr表示色氨酸，缩写为Y。由于蛋白编码序列的多态性及变异，天然存在的蛋白质会出现基因突变，编码序列中碱基被缺失、替代或增加，或氨基酸的缺失、插入、取代或其它变异，从而导致蛋白质的氨基酸序列出现一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加。因此，存在着一些生理和生物活性上基本等同于无变异蛋白质的蛋白。这些结构不同于相应的蛋白质，但与该蛋白质没有明显的功能差异的多肽或蛋白称为功能等同变异体。功能等同的变异体同样适用于通过缺失、插入和突变等人工手段改变一个或多个密码子，从而向一种蛋白质的氨基酸序列中导入这类变异而制成的短肽。尽管这样能获得更多不同形式的变异体，但所得的变异体作为功能等同变异体的前提是其生理活性基本等同于原始无变异蛋白质的活性。一般的，功能等同变异体的编码序列是同源的，因此，由至少一种改变(如蛋白质的编码序列中一个或多个碱基的缺失、插入或取代或者蛋白质的氨基酸序列中有一个或多个氨基酸缺失、插入或取代)所得的多肽或蛋白一般具有功能上等同于所述蛋白质的活性。因此，由上述氨基酸序列组成的短肽，如果其构成的活性肽没有明显的功能差异，也包括在本专利技术的范围内。在其中一个具体示例中，短肽具有如下结构式：上述活性肽的氨基酸序列为Phe-His-Gly-Glu-Gly-Tyr，使得该活性肽能够有效地抑制胃癌细胞增殖，且该活性肽无毒副作用，安全性较高。经试验验证，上述活性肽能够促进HGC内的ROS(活性氧簇，reactiveoxygenspecies)的大量分泌，以对HGC产生氧化性损伤，降低HGC的细胞膜电位并将HGC阻本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活性肽，其特征在于，所述活性肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种活性肽，其特征在于，所述活性肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体含有所述活性肽的编码序列。3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述编码序列为如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；或所述编码序列为与SEQIDNo.2所示核苷酸序列具有92％同源性的核苷酸序列；或所述编码序列为由SEQIDNo.2所示核苷酸序列中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的核苷酸序列。4.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有编码权利要求1所述活性肽的核苷酸；或，所述重组细胞含有权利要求2～3任一项所述重组载体。5.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中的活性组分包括权利要求1所述活性肽。6.权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：单凯，王怀玲，刘杰，
申请(专利权)人：深圳凯联健康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44