一种副干酪乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种微生物菌类，副干酪乳杆菌，其特征在于：它是副干酪乳杆菌CG‑C1，保藏号：CGMCCNo.12941。保藏日期：2016年09月08日。保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏地点：中国，北京，中国科学院微生物研究所。本发明专利技术产品来源百岁健康老人肠道。经试验证明，副干酪乳杆菌CG‑C1用于益生菌发酵乳的生产，该方法安全风险低，简单易实现，可以保证菌株数量，成本较低，相对其他方法而言具有明显的优势。因此该发酵乳产品可以调节肠道菌群，维持肠道微生态系统平衡，可以加强肠道紧密连接蛋白表达，提高肠道上皮的屏障功能，可以降低胆固醇水平，可以改善便秘和腹泻问题。

A Lactobacillus paracasei and its application

The invention relates to a microbial fungus, Lactobacillus paracasei, which is characterized in that it is Lactobacillus paracasei CG C1, and its storage number is CGMCCNo. 12941. Date of preservation: 08 September 2016. Preservation Unit: General Microbial Center of China Microbial Species Preservation Management Committee. Location: Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing, China. The product of the invention originates from the intestinal tract of healthy centenarians. The experiment proves that Lactobacillus paracasei CG_C1 is used in the production of probiotic fermented milk. This method has the advantages of low safety risk, simple implementation, guaranteeing the number of strains and low cost, and has obvious advantages over other methods. Therefore, the fermented dairy products can regulate intestinal flora, maintain the balance of intestinal microecosystem, strengthen the expression of intestinal tight junction protein, improve the barrier function of intestinal epithelium, reduce cholesterol levels, and improve constipation and diarrhea.

【技术实现步骤摘要】
一种副干酪乳杆菌及其应用
本专利技术属于食品科学
，具体属于微生物领域，主要涉及一种副干酪乳杆菌及其应用。
技术介绍
益生菌是一类活的微生物，当摄入足够数量时会对宿主产生有益的作用。有研究统计，益生菌产品的市场销售年增长率高达20％，仅以乳杆菌作为发酵剂的食品工业所创造的经济价值就占全球发酵类食品的20％。在欧洲，添加益生乳酸菌的食品产值占食品总产值的5％，其价值占所有功能食品的65％。益生菌已被证明具有很多生理功能：益生菌具有免疫调节作用，通过提高食物能量产出或改变新陈代谢等活动，来维持机体正常状态下的免疫功能水平；益生菌具有抑制有害菌的作用，因此可以调节肠道菌群，维持肠道微生态系统平衡；益生菌可以加强肠道紧密连接蛋白表达，提高肠道上皮的屏障功能；益生菌可以降低胆固醇水平；益生菌可以改善便秘和腹泻问题。食品工业的益生菌70％应用于乳制品中。其中发酵乳是是益生菌的优良载体，益生菌发酵乳收到消费者的追逐，成为市场主要增长点。然而益生菌发酵乳存在以下问题：第一，益生菌在发酵乳中存活率低。由于益生菌本身的生长特性，造成益生菌在发酵乳中生长缓慢或存活能力下降；第二，益生菌的添加会对发酵乳本身的特性产生负面影响。作为益生菌的菌株代谢能力特别是产酸能力很强，影响发酵乳的风味、质地，后酸化问题尤为突出。目前已有的抑制益生菌在发酵乳后酸化方法有：降低发酵乳中益生菌的数量，但会影响益生菌的益生功能；通过高压或高温处理弱化菌株防止后酸化，添加天然防腐剂Nisin控制发酵菌种的生长能力和产酸，添加葡萄糖氧化酶延缓酸奶后酸化等，但是添加其他物质或进行特殊处理时会引发发酵乳品质变化，使发酵乳体系更加复杂，增加产品成本；基因工程，通过物理、化学等方法进行诱变，改变菌株的遗传物质，得到弱酸化的突变型菌株，这种方法具有明显的不确定性，突变型目的菌株恰好具有弱后酸化特性的几率较低，较为困难，并且基因工程目前本身就存在较大的争议；筛选，从庞大的益生菌菌群中筛选出本身具有弱后酸化特征的菌株，用于益生菌发酵乳的生产，该方法安全风险低，简单易实现，可以保证菌株数量，成本较低，相对其他方法而言具有明显的优势。
技术实现思路
本专利技术的目的是获得一种来源健康人群肠道或传统发酵食品，经脱脂乳培养基筛选，得到弱后酸化菌株，称为副干酪乳杆菌。本专利技术的第一方面，提供了一种副干酪乳杆菌。它是副干酪乳杆菌Lactobacillusparacasei，保藏号：CGMCCNo.12941。保藏日期：2016年09月08日。保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏地点：中国，北京，中国科学院微生物研究所。本专利技术的第二方面，提供了本专利技术所述的副干酪乳杆菌的用途，它被用于制备发酵乳，用于调节人体肠道菌群、加强人体免疫力、预防肿瘤。发酵乳制作具体步骤如下：(1)提前活化菌株：对筛得的“弱酸化菌”,即一种副干酪乳杆菌CG-C1进行活化，在无菌环境下，吸取原始菌株保菌乳液于MRS液体培养基中，37℃恒温培养12h，进行活化，连续活化三代。对第三代工作用菌进行革兰氏染色并镜检，镜检合格用菌置于4℃冰箱，暂存待用，以2％的接种量进行活化，得到第三代工作用菌100ml，镜检合格后，置于4℃冰箱保存备用。(2)计算原料用量：按照蛋白质3％、脱脂乳粉32.9％、蔗糖7％的比例计算出所需原料用量。(3)原料预处理和混合：纯水预热至50℃，按比例加入脱脂乳粉和白砂糖，搅拌混合5～10min。(4)静置水合：混合乳液静置30min。(5)定容分装：量筒定容，分装于烧杯，封口膜封口。(6)杀菌：样品置于95℃水浴锅，待样品温度达到95℃，杀菌5min。(7)冷却：样品置于冷水浴，降温至43℃左右。(8)菌液离心：取活化好的第三代工作用菌，分装于已灭菌的50ml离心管，4500r速度离心10min，倒掉上层培养基，留下菌沉淀。(9)接种：将发酵剂以0.02％的接种量接种于脱脂乳，用适量生理盐水溶解实验菌的菌沉淀并摇匀，全部接种于500ml的脱脂乳中，以只接种发酵剂而未接种实验菌的样品作为空白对照。(10)分装：乳液分装于已灭菌的10ml离心管中，每管装7-8ml，不宜太满，太满容易导致发酵乳被污染。(11)发酵：43℃恒温发酵，观察凝乳情况，定时测定发酵乳pH值，待样品pH值下降到接近4.5时，置于4℃冰箱，降温终止发酵。(12)低温储藏：发酵乳产品置于4℃冰箱，储存待检测。该方法安全风险低，简单易实现，可以保证菌株数量，成本较低，相对其他方法而言具有明显的优势。因此该发酵乳产品可以调节肠道菌群，维持肠道微生态系统平衡，可以加强肠道紧密连接蛋白表达，提高肠道上皮的屏障功能，可以降低胆固醇水平，可以改善便秘和腹泻问题。附图说明图14℃条件下21d内发酵乳样品pH值的变化图24℃条件下21d内发酵乳样品酸度的变化图310℃条件下21d内发酵乳样品pH值的变化图410℃条件下21d内发酵乳样品酸度的变化图525℃条件下21d内发酵乳样品pH的变化图625℃条件下21d内发酵乳样品酸度的变化图7在4℃储藏条件下发酵乳样品中的活菌数变化图8在10℃储藏条件下发酵乳样品中的活菌数变化图9在25℃储藏条件下发酵乳样品中的活菌数变化具体实施方式本专利技术人经多次筛选和培育，从百岁老人粪便中分离得到1株副干酪乳杆菌CG-C1，该菌株具有明显弱酸化能力。经试验证明，该菌株的后酸化作用较其他实验菌明显弱(P<0.01)。副干酪乳杆菌CG-C1于2016年09月08日，申请中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏。保藏号：CGMCCNo.12941。文中所用“本专利技术副干酪乳杆菌”指副干酪乳杆菌CG-C1，保藏号：CGMCCNo.12941。应理解这些术语还包括衍生副干酪乳杆菌CG-C1菌株，尤其是弱酸化特性的衍生菌株。下面将结合具体实施例，进一步阐述本专利技术，应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1一、材料方法1.1菌株从自由菌种裤中随机挑选48株副干酪乳杆菌用于筛选，实验菌株分离自健康人体肠道或传统发酵食品，经过16SrDNA序列分析，全部为副干酪乳杆菌。1.2主要试剂表1主要试剂信息生理盐水：9.0g/L的NaCl溶液，121℃15min灭菌。酚酞乙醇溶液：0.5g酚酞/100ml无水乙醇，混匀备用。12％脱脂乳：称取12％脱脂乳粉，剩余88％用水补齐，混合均匀，121℃15min灭菌。MRS液体培养基：48gMRS肉汤粉/1L水，加热煮沸溶解，121℃15min灭菌。MRS固体培养基：63gMRS琼脂粉/1L水，加热煮沸溶解，121℃15min灭菌，冷却至55℃恒温暂存待用，或凝固后用微波炉加热溶解后冷却至55℃恒温暂存待用。pH＝5.4的MRS固体培养基：63gMRS琼脂粉/1L水，加热煮沸溶解，冷却至室温，用盐酸调节pH至5.4，分装，121℃15min灭菌，冷却至55℃恒温暂存待用，或凝固后用微波炉加热溶解后冷却至55℃恒温暂存待用。1.3主要仪器设备表2实验仪器及设备信息1.4实验方法1.4.1菌株活化和保存在无菌环境下，吸取原始菌株保菌乳液于MRS液体培养基中，37℃恒温培养12h，进行活化，连续活化三代。对第三代工作用菌进行革兰氏染色并镜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副干酪乳杆菌，其特征在于：它是副干酪乳杆菌CG‑C1，保藏号：CGMCCNo.12941,保藏日期：2016年09月08日,保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地点：中国，北京，中国科学院微生物研究所。

【技术特征摘要】
1.一种副干酪乳杆菌，其特征在于：它是副干酪乳杆菌CG-C1，保藏号：CGMCCNo.12941,保藏日期：2016年09月08日,保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地点：中国，北京，中国科学院微生物研究所。2.一种发酵乳的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提前活化菌株：对筛得的“弱酸化菌”,即一种副干酪乳杆菌CG-C1进行活化，在无菌环境下，吸取原始菌株保菌乳液于MRS液体培养基中，37℃恒温培养12h，进行活化，连续活化三代。对第三代工作用菌进行革兰氏染色并镜检，镜检合格用菌置于4℃冰箱，暂存待用，以2％的接种量进行活化，得到第三代工作用菌100ml，镜检合格后，置于4℃冰箱保存备用。(2)计算原料用量：按照蛋白质3％、脱脂乳粉32.9％、蔗糖7％的比例计算出所需原料用量。(3)原料预处理和混合：纯水预热至50℃，按比例加入脱脂乳粉和白砂糖，搅拌混合5～10min。(4)静置...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄特民，夏兵兵，卢智锋，徐文龙，何宗民，周凌华，蒙六妹，
申请(专利权)人：深圳市晨光乳业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44