一种抗人CD47单克隆抗体的制备及其应用制造技术

本发明专利技术属于抗体领域，具体涉及一种抗人CD47单克隆抗体的制备方法和应用。本发明专利技术公开了该单克隆抗体的高度可变区序列。本发明专利技术提供的抗人CD47单克隆抗体具有良好的结合活性，能有效识别肿瘤细胞表面CD47表达，并且能在蛋白水平有效识别重组人CD47胞外区蛋白。同时该单克隆抗体的抗原表位鉴定较为明确，能有效运用于CD47靶标分子的诊断及抗人CD47单克隆抗体药物的制备开发中。

Preparation and application of a monoclonal antibody against human CD47

The invention belongs to the field of antibodies, in particular to the preparation method and application of a monoclonal antibody against human CD47. The invention discloses a highly variable region sequence of the monoclonal antibody. The anti-human CD47 monoclonal antibody provided by the invention has good binding activity, can effectively recognize the expression of CD47 on the surface of tumor cells, and can effectively recognize the recombinant human CD47 extracellular domain protein at the protein level. At the same time, the epitope identification of the monoclonal antibody is clear, which can be effectively used in the diagnosis of CD47 target molecule and the preparation and development of anti-human CD47 monoclonal antibody drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种抗人CD47单克隆抗体的制备及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种抗人CD47单克隆抗体的制备及其应用。
技术介绍
CD47(ClusterofDifferentiation47)又叫做整合素相关蛋白，广泛表达于正常细胞表面，是目前已知的免疫检查点之一。CD47作为受体与血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1)结合时能够影响包括细胞迁移，粘附，增殖及凋亡在内的细胞相关功能，同时还能调节血管生成与炎症反应。当它作为配体和巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(signal-regulatoryprotein-α,SIRPα)结合时，能够传递抑制性信号抑制巨噬细胞对相关细胞的吞噬。由于CD47表达的减少，血液循环中老化的红细胞更容易被巨噬细胞清除。研究表明，CD47不仅在各类组织中广泛表达，并且在肿瘤细胞表面高表达，临床报告显示CD47在肿瘤组织中的高表达与预后不良有关。肿瘤细胞表面高表达的CD47与SIRPα结合时产生的抑制性信号促使肿瘤细胞逃离巨噬细胞的吞噬，从而诱导了肿瘤的发生与发展，是肿瘤微环境中介导肿瘤细胞逃离免疫监视的主要分子之一。通过阻断肿瘤细胞表面CD47与SIRPα结合所传递的抑制性信号通路，恢复或者加强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬功能，能促进巨噬细胞介导的细胞免疫反应，从而为肿瘤免疫治疗提供新的理论和方法。人CD47(由基因CD47编码)是免疫球蛋白超家族的成员，目前已经明确了人CD47的胞外功能区结构和CD47与其配体SIRPα的晶体结构。CD47由五个跨膜区和一个细胞外N端的IgV结构域组成，胞外区包括139个氨基酸，根据胞内区长短具有四种剪接体形式分布在不同组织中，其中以最广泛表达的剪接体2的形式分布于循环细胞和免疫细胞中。SIRPα胞内区具有基于酪氨酸的免疫受体酪氨酸抑制作用模式体(ITIM)，当与CD47结合后，该模式体被磷酸化并且招募抑制性分子如SHP-1等进而阻止免疫细胞的激活。CD47在肿瘤免疫逃避机制中扮演了至关重要的角色。现有研究结果已经明确了CD47参与肿瘤的发生发展，并视其为肿瘤免疫治疗的重要靶点。通过流式细胞术和免疫组织化学分析，已经在人的血液瘤包括急慢性骨髓系白血病和非霍奇金淋巴瘤和实体肿瘤中发现了CD47的高表达，这些实体肿瘤包括肉瘤，结肠癌，肾癌，多发性骨髓瘤以及包括膀胱癌，肺癌等。由此可见，分析CD47在肿瘤疾病中的表达对肿瘤的预后评估具有极为重要的临床意义。近年来针对CD47与其配体SIRPα信号轴介导的肿瘤逃离机制进行的药物研发成为了继PD-1/PD-L1之外的肿瘤免疫治疗的热门，CD47的抗体开发目前也已经进入临床前期。然而，目前正在开发的抗人CD47单克隆抗体还存在亲和力较低，副作用较大，作用靶点如抗原表位不明确的缺点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的主要技术问题是目前抗CD47单克隆抗体存在的亲和力较低，作用靶点如抗原表位不明确的缺点，提供了一种抗人CD47单克隆抗体的制备及其应用。本专利技术的第一方面提供了一种抗人CD47单克隆抗体，所述抗人CD47抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述抗CD47抗体具有如下技术特征中的一项或多项：<1>重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的CDRH1；<2>重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.2所示的CDRH2；<3>重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的CDRH3；<4>轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的CDRL1；<5>轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的CDRL2；<6>轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.6所示的CDRL3。CDR(互补决定区，complementaritydeterminingregion)通常指抗体中在空间结构上可以与抗原决定簇形成互补的区域。抗体中的可变性通常并不均匀地分布在整个抗体的可变区中，单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区通常均具有3个超变区(hypervariableregion，HVR)，这些区域在空间结构上通常可以与抗原决定簇形成互补，所以超变区也被称为互补决定区(complementaritydeterminingregion，CDR)，即重链可变区通常包括三个互补决定区，即CDRH1、CDRH2和CDRH3，轻链可变区通常包括三个互补决定区，即CDRL1、CDRL2和CDRL3。在一种实施方式中，所述抗人CD47的单克隆抗体的重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQIDNo.2所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的CDRH3；和/或，所述抗人CD47的单克隆抗体的轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的CDRL1、氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的CDRL2和氨基酸序列如SEQIDNo.6所示的CDRL3。在一种实施方式中，所述抗人CD47的单克隆抗体的重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQIDNo.2所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的CDRH3。在一种实施方式中，所述抗人CD47的单克隆抗体的轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的CDRL1、氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的CDRL2和氨基酸序列如SEQIDNo.6所示的CDRL3。在一种实施方式中，所述抗人CD47的单克隆抗体的重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQIDNo.2所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的CDRH3，轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的CDRL1、氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的CDRL2和氨基酸序列如SEQIDNo.6所示的CDRL3。在一种实施方式中，所述抗人CD47的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区中还可以包括框架区，所述框架区可以位于互补决定区之间，也可以位于互补决定区的两端。在一种实施方式中，所述抗人CD47的单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。本专利技术的第二方面提供了一种核苷酸分子，编码如上所述的抗人CD47的单克隆抗体。在一种实施方式中，所述核苷酸分子编码抗人CD47单克隆抗体的重链的核苷酸序列如SEQIDNO:9所示，编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示。本专利技术的第三方面提供了一种表达载体，含有如上所述的核苷酸分子。本专利技术中的表达载体通常指本领域熟知的各种市售表达载体，例如可以是细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。本专利技术的第四方面提供了一种宿主细胞，含有如上所述的表达载体或或基因中整合有外源的所述核苷酸分子。任何适用于表达载体进行表达的细胞都可以作为宿主细胞，例如，所述宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗人CD47单克隆抗体，所述抗人CD47抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述抗CD47抗体具有如下技术特征中的一项或多项：

【技术特征摘要】
1.一种抗人CD47单克隆抗体，所述抗人CD47抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述抗CD47抗体具有如下技术特征中的一项或多项：<1>重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的CDRH1；<2>重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.2所示的CDRH2；<3>重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的CDRH3；<4>轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的CDRL1；<5>轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的CDRL2；<6>轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.6所示的CDRL3。2.如权利要求1所述的抗人CD47的单克隆抗体，其特征在于，所述抗人CD47的单克隆抗体的重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的CDRH1、氨基酸序列如SEQIDNo.2所示的CDRH2和氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的CDRH3；和/或，所述抗人CD47的单克隆抗体的轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的CDRL1、氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的CDRL2和氨基酸序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱峰，俞凯凯，孙树洋，吴穷，张志愿，孙磊，王军，顾子悦，胡玉冬，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海,31