一种免疫佐剂、灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种免疫佐剂、灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制药领域。免疫佐剂包含1.0‑10mg/mL的阳离子瓜尔胶、1.0‑10mg/mL的泊洛沙姆、1.0‑10mg/mL的甘露聚糖肽、1.0‑10mg/mL的皂苷QS‑21、20‑100mg/mL甘油、5‑50mg/mL蔗糖。该免疫佐剂以泊洛沙姆和阳离子瓜尔胶为缓释剂，有利于疫苗粘附在家禽的呼吸道和消化道，起到缓释作用，提高抗原的贮存时间；甘露聚糖肽和皂苷QS‑21作为免疫增强剂能显著提高粘膜免疫水平；甘油和蔗糖能保护抗原在体温条件下的结构稳定性，从而提高抗原的作用时间。本疫苗采用喷雾免疫和口服免疫的方式，能够实现规模化养殖场的自动化免疫，大幅减少人工成本，降低人为因素的免疫失败的风险。

An immune adjuvant, inactivated vaccine and its preparation method

The invention provides an immune adjuvant, an inactivated vaccine and a preparation method thereof, belonging to the field of veterinary biopharmaceuticals. Immune adjuvants include cationic guar gum of 1.0 10mg/mL, poloxamer of 1.0 10mg/mL, mannan peptide of 1.0 10mg/mL, saponins QS_21, 20 100mg/mL glycerol and sucrose of 5 50mg/mL. The immune adjuvant with poloxamer and cationic guar gum as sustained-release agents is beneficial for the vaccine to adhere to the respiratory and digestive tracts of poultry, play a sustained-release role and improve the storage time of antigens; mannan peptide and saponin QS 21 as immune enhancers can significantly improve the mucosal immune level; glycerol and sucrose can protect the structural stability of antigens under body temperature, thereby improving the antigen. Time of action. The vaccine uses spray immunization and oral immunization to achieve automatic immunity in large-scale farms, greatly reduce labor costs and reduce the risk of immune failure due to human factors.

【技术实现步骤摘要】
一种免疫佐剂、灭活疫苗及其制备方法
本专利技术属于兽用生物制药领域，具体是一种免疫佐剂、灭活疫苗及其制备方法。
技术介绍
免疫佐剂，又称非特异性免疫增生剂，其本身不具有抗原性，但同抗原混合在一起注射到机体内后，能非特异性地改变机体对该抗原的特异性免疫应答。免疫佐剂包括：传统型铝盐佐剂、油乳佐剂、弗氏佐剂、细胞因子佐剂等，其中，铝佐剂和弗氏佐剂是目前广泛使用的免疫增强佐剂，其作用机理主要是在机体注射部位形成抗原储藏库，使抗原缓慢释放，刺激浆细胞产生抗体，但铝佐剂容易引起机体过敏反应且不宜冷冻，而弗氏佐剂中的矿物油不能被机体代谢，容易引起注射部位的炎症反应、肉芽肿、溃疡和发热等副反应。此外，随着规模化养殖水平越来越高，单栋养殖数量不断提高，目前已达到百万级别，人工免疫灭活疫苗难度越来越大，养殖企业迫切需要不依赖于人工免疫的疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种免疫佐剂、灭活疫苗及其制备方法。本专利技术的目的在于所提供的免疫佐剂，因其组分之间的复合协同效应，提高了机体的粘膜免疫水平，增强抗原的免疫效果。本专利技术的目的在于解决现有技术中需要人工免疫疫苗的问题，本疫苗可喷雾免疫，也可口服免疫，能够实现规模化养殖场的自动化免疫，大幅减少人工成本，降低人为因素的免疫失败的风险。为实现以上技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种新型的免疫佐剂，其特征在于包含：1-10mg/mL的阳离子瓜尔胶、1-10mg/mL的泊洛沙姆、1-10mg/mL的甘露聚糖肽、1-10mg/mL的皂苷QS-21、20-100mg/mL甘油、5-50mg/mL蔗糖。进一步的，该免疫佐剂包含：5mg/mL阳离子瓜尔胶、5mg/mL的泊洛沙姆、10mg/mL的甘露聚糖肽、10mg/mL的皂苷QS-21、60mg/mL甘油、25mg/mL蔗糖。进一步的，其制备方法为：在pH为4-6的溶液中依次加入阳离子瓜尔胶、泊洛沙姆、甘露聚糖肽、皂苷QS-21、甘油、蔗糖，并充分混合均匀。进一步的，其制备方法为：在pH为5的溶液中依次加入阳离子瓜尔胶、泊洛沙姆、甘露聚糖肽、皂苷QS-21、甘油、蔗糖，并充分混合均匀。进一步的，在pH为4-6的酸性条件下依次加入阳离子瓜尔胶，泊洛沙姆，充分混匀，有助于其形成温敏性凝胶，便于提升后续对抗原的吸附作用，然后再加入甘露聚糖肽、皂苷QS-21、甘油、蔗糖。一种新型的灭活疫苗，其特征在于：该疫根据苗添加了权利要求1中的新型免疫佐剂。进一步的，其制备方法是将权利要求1所述的新型免疫佐剂与灭活的抗原按体积比1:1-10混合，得到所述灭活疫苗。进一步的该疫苗的免疫途径为喷雾或饮水免疫。进一步的灭活疫苗是指正粘病毒的灭活疫苗、副黏病毒的灭活疫苗和腺病毒灭活疫苗。进一步的，正粘病毒疫苗是指禽流感病毒的灭活疫苗。进一步的，副粘病毒疫苗是指新城疫病毒灭活疫苗。进一步的，腺病毒疫苗是指禽腺病毒灭活疫苗。采用上述技术方案，本专利技术具有的有益效果为：1.免疫佐剂中泊洛沙姆和阳离子瓜尔胶能形成温敏性凝胶，包裹并保护灭活抗原，当采用饮水和喷雾免疫时，上述凝胶可有助于疫苗粘附在家禽的呼吸道和消化道，从而达到缓释作用，提高抗原的贮存时间。2.免疫佐剂中的皂苷QS-21具有抗病毒作用，在长链多糖的激发下可以抑制细胞增殖，甘露聚糖肽因可作为糖原用以增强皂苷QS-21的免疫活性，二者作为免疫增强剂能显著提高粘膜免疫水平，从而大大提高免疫效果。3.免疫佐剂中甘油和蔗糖能保护抗原在体温条件下的结构稳定性，从而提高抗原的作用时间。4.本疫苗采用喷雾免疫和口服免疫的方式，能够实现规模化养殖场的自动化免疫，大幅减少人工成本，降低人为因素的免疫失败的风险。具体实施方式以下具体说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。本领域的技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围的前提下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围。实施例1：不同免疫佐剂及浓度、I群4型禽腺病毒灭活疫苗及其制备和评价一、不同免疫佐剂的制备；1、在pH为5溶液中依次加入阳离子瓜尔胶1mg/mL、泊洛沙姆1mg/mL、甘露聚糖肽1mg/mL、皂苷QS-211mg/mL、甘油20mg/mL、蔗糖50mg/mL，并充分混合均匀，高温灭菌备用，记为Z1。2、在pH为5溶液中依次加入阳离子瓜尔胶5mg/mL、泊洛沙姆5mg/mL、甘露聚糖肽10mg/mL、皂苷QS-2110mg/mL、甘油60mg/mL、蔗糖25mg/mL，并充分混合均匀，高温灭菌备用，记为Z2。3、在pH为5溶液中依次加入阳离子瓜尔胶10mg/mL、泊洛沙姆10mg/mL、甘露聚糖肽5mg/mL、皂苷QS-215mg/mL、甘油100mg/mL、蔗糖50mg/mL，并充分混合均匀，高温灭菌备用，记为Z3。4、在pH为5溶液中依次加入泊洛沙姆5mg/mL、甘露聚糖肽5mg/mL、皂苷QS-215mg/mL、甘油60mg/mL、蔗糖25mg/mL，并充分混合均匀，高温灭菌备用，记为Z4。5、在pH为5溶液中依次加入阳离子瓜尔胶5mg/mL、甘露聚糖肽5mg/mL、皂苷QS-215mg/mL、甘油60mg/mL、蔗糖25mg/mL，并充分混合均匀，高温灭菌备用，记为Z5。二、不同免疫佐剂、I群4型禽腺病毒灭活疫苗及其制备和评价1、I群4型禽腺病毒灭活疫苗制备将上述标记为Z1～Z5的免疫佐剂分别与灭活后效价琼脂双相扩散抗体(AGP)为1:16的灭活抗原按体积比1:5混匀，即为Y1～Y5的I群4型禽腺病毒灭活疫苗。2、I群4型禽腺病毒灭活疫苗的安全检测用7日龄SPF鸡10羽，每只饮水1ml(标记为Y1的疫苗)，观察14日，观察是否免疫引起的任何局部和全身不良反应。结果显示，所制备的I群4型禽腺病毒灭活疫苗免疫后所有试验鸡精神、采食及饮水均未见异常。3、I群4型禽腺病毒灭活疫苗的免疫效力试验取7日龄SPF鸡60羽，随机分为六组，暂养一日后，分别进行如下操作：第一～五组设为灭活疫苗组，每组分别免疫Y1～Y5的I群4型禽腺病毒灭活疫苗，14天后再次饮水免疫0.5mL所制备疫苗。第六组设为空白对照组。上述各组受试鸡在二免后14天，每羽鸡用1ml的FAVRP-8株强毒饮水攻毒0.5mL。结果：第一组9只保护，第二组全部保护，第三组9只保护，第四组3只保护，第五组4只保护，第六组全部发病，结果表明所制备的Y1～Y3I群4型禽腺病毒灭活疫苗能够提供充分的保护；此外，同时含有阳离子瓜尔胶和泊洛沙姆的佐剂制备的灭活疫苗能提供更高的保护，而只含有阳离子瓜尔胶或只含有泊洛沙姆的佐剂制备的疫苗不能提供充分的保护。实施例2：不同pH环境对免疫佐剂、I群4型禽腺病毒灭活疫苗效力的影响一、不同pH值的免疫佐剂的制备1.在pH为3溶液中依次加入阳离子瓜尔胶5mg/mL、泊洛沙姆5mg/mL、甘露聚糖肽5mg/mL、皂苷QS-215mg/mL、甘油60mg/mL、蔗糖25mg/mL，并充分混合均匀，高温灭菌备用，记为P1。2.在pH分别为4、5、6、7的溶液中、依次加入上述处方浓度的试剂，并记为P2、P3、P4、P5；二、不同pH环境对免疫佐剂、I群4型禽腺病毒灭活疫苗评价的影响1、I群4型禽腺病毒灭活疫苗制备将上述标记为P1～本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型的免疫佐剂，其特征在于包含：1‑10mg/mL的阳离子瓜尔胶、1‑10mg/mL的泊洛沙姆、1‑10mg/mL的甘露聚糖肽、1‑10mg/mL的皂苷QS‑21、20‑100mg/mL甘油、5‑50mg/mL蔗糖。

【技术特征摘要】
1.一种新型的免疫佐剂，其特征在于包含：1-10mg/mL的阳离子瓜尔胶、1-10mg/mL的泊洛沙姆、1-10mg/mL的甘露聚糖肽、1-10mg/mL的皂苷QS-21、20-100mg/mL甘油、5-50mg/mL蔗糖。2.根据权利要求1所述的新型免疫佐剂，其特征在于包含：5mg/mL阳离子瓜尔胶、5mg/mL的泊洛沙姆、10mg/mL的甘露聚糖肽、10mg/mL的皂苷QS-21、60mg/mL甘油、25mg/mL蔗糖。3.一种新型免疫佐剂的制备方法，其特征在于：在pH4-6的溶液中依次加入处方浓度的阳离子瓜尔胶、泊洛沙姆、甘露聚糖肽、皂苷QS-21、甘油、蔗糖，并充分混合均匀。4.根据权利要求3所述的新型免疫佐剂的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李守军，唐荣宏，郁宏伟，郭明丽，范莉莉，陈冰，康亚男，张立霞，厚华艳，郭慧娟，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12