N-琥珀酰壳聚糖固载乳酸链球菌素、紫苏油膜的制备方法技术

本发明专利技术公开了N‑琥珀酰壳聚糖固载乳酸链球菌素、紫苏油膜的制备方法。N‑琥珀壳聚糖通过EDC、NHS活化其羧基，然后与乳酸链球菌素、紫苏油进行共价结合，通过延流法制得薄膜。实验表明，该方法克服乳酸链球菌素中性条件下不稳定，紫苏油易分解的不足，制得的薄膜结构稳定、机械性能较好，无毒性，对金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠杆菌、托拉斯假单胞肝菌、肠炎沙门氏菌、单增李斯特菌有不同程度的抑制作用。

Preparation of N-succinyl Chitosan Immobilized Streptococcus lactis and perilla oil film

The invention discloses a preparation method of N succinyl Chitosan Immobilized Streptococcus lactis and perilla oil film. The carboxyl group of N succinyl chitosan was activated by EDC and NHS, then covalently combined with Streptococcus lactis and perilla oil, and the film was prepared by casting method. Experiments show that the method overcomes the instability of Streptococcus lactis in neutral conditions and the disadvantage of perilla oil decomposition. The prepared film has stable structure, good mechanical properties and non-toxicity. It can inhibit Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas trustees, Salmonella enteritidis and Listeria monocytogenes to varying degrees.

【技术实现步骤摘要】
N-琥珀酰壳聚糖固载乳酸链球菌素、紫苏油膜的制备方法
：本专利技术属于食品抑菌保鲜领域，具体涉及N-琥珀酰壳聚糖固载乳酸链球菌素、紫苏油抑菌膜的制备方法。
技术介绍
：N-琥珀酰壳聚糖(NSC)是壳聚糖在琥珀酸酐体系下形成的，是一种具备一定晶体结构的高分子材料。与壳聚糖(CS)相比，水溶性较好，因为N-琥珀酰壳聚糖是两亲化合物，当引入取代基后，壳聚糖原本规整的空间排列遭到破坏，形成非晶化结构。此外，N-琥珀酰壳聚糖的生物相容性较好、具有较好的吸湿保湿作用、毒性较低，即使在人体内长期滞留都不会影响身体健康。乳酸链球菌素(Nisin)是乳酸链球菌产生的一种多肽物质，由34个氨基酸残基组成，由于乳酸链球菌素可抑制大多数革兰氏阳性细菌，被作为食品防腐剂广泛应用于食品行业。食用后在人体的生理pH条件和α—胰凝乳蛋白酶作用下很快水解成氨基酸，不会改变人体肠道内正常菌群以及产生如其它抗菌素所出现的抗性问题，更不会与其它抗菌素出现交叉抗性，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品防腐剂。但是Nisin在pH值为2时耐热性好，pH值大于5，耐热性下降，很不稳定。紫苏油是紫苏植株中提取的含亚麻酸等多组分的混合物，是一种优质保健食用油，具有紫苏和琥珀香气。还含有18种氨基酸，具有很高的营养和药用价值。紫苏油具有显著的抑菌活性和广泛的抗菌谱范围，且与化学抑菌剂相比副作用残留毒性小，紫苏油的疏水性成分能够直接作用于微生物的细胞膜，导致细胞膜的流动性增加，随之细胞膜的结构破坏，细胞内重要的內溶物留出，导致细胞死亡。紫苏精油和其他抑菌剂结合起协同作用，在实际应用中，协同作用使得成本降低，保证安全，还赋予食品特殊的香味，但是紫苏油在使用的过程易分解给其使用带来了限制。基于N-琥珀酰壳聚糖具有-NH2和-COOH的活性基团，易于制备成多孔球状微粒、纳米粒、凝胶、膜状等多种状态，所以将乳酸链球菌素、紫苏油固载在上面制成抑菌膜。
技术实现思路
：本专利技术克服乳酸链球菌素中性条件下不稳定，紫苏油易分解的不足，将N-琥珀酰壳聚糖与Nisin、紫苏油共价结合制备出抑菌性能较强、绿色无污染的薄膜。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：N-琥珀酰壳聚糖固载乳酸链球菌素、紫苏油抑菌膜的制备包括以下步骤：N-琥珀酰壳聚糖(NSC)的制备参照CN10651927A。称取1-2gNSC溶解在pH4-9的磷酸柠檬酸盐缓冲溶液，加入EDC、NHS常温下搅拌3h，加入20-100mgNisin搅拌1h制得所需溶液NNSC，在NNSC溶液中加入0.5％-2％紫苏油搅拌均匀，将上述制的溶液采用延流法制膜，加入2-10％的甘油，在30-70℃的条件下干燥5-12h。本专利技术的优点：本专利技术克服乳酸链球菌素中性条件下不稳定，紫苏油易分解的不足，将N-琥珀酰壳聚糖与Nisin、紫苏油共价结合制备出的抑菌膜机械性能好，并对金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠杆菌、托拉斯假单胞肝菌、肠炎沙门氏菌、单增李斯特菌有较好的抑制作用。而且过程操作简单，所制备的薄膜绿色无毒害。下面结合实例对本专利技术进行描述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本专利技术，并不对其内容进行限定。附图说明图1为本专利技术制得的NNSC/紫苏油-NNSC的红外光谱图；图2为本专利技术制得的NSC/NNSC/紫苏油-NNSC的X射线衍射图；图3为本专利技术制得的NSC/NNSC/紫苏油-NNSC的热重分析图；图4为本专利技术制得的NSC/NNSC/紫苏油-NNSC的LDH细胞毒性分析图；图5为本专利技术制得的NSC的核磁共振图；图6为本专利技术制得的NNSC的核磁共振图；图7为本专利技术制得的紫苏油-NNSC的核磁共振图；图8为本专利技术制得的紫苏油-NNSC的膜的SEM图。具体实施方式实施例1：N-琥珀酰壳聚糖(NSC)的制备参照CN10651927A；称取1gNSC溶解在30mLpH为5的磷酸柠檬酸盐缓冲溶液，加入EDC20mg、NHS20mg常温搅拌3h，加入Nisin20mg搅拌1h制得所需溶液NNSC；在NNSC溶液中加入0.5％紫苏油搅拌均匀；将上述制的溶液采用延流法制膜，加入2％的甘油，在30℃的条件下干燥8h，即得到抑菌膜。实施例2：N-琥珀酰壳聚糖(NSC)的制备参照CN10651927A；称取2gNSC溶解在30mLpH为6的磷酸柠檬酸盐缓冲溶液，加入EDC20mg、NHS20mg常温搅拌3h，加入Nisin50mg搅拌1h制得所需溶液NNSC；在NNSC溶液中加入1.5％紫苏油搅拌均匀；将上述制的溶液采用延流法制膜，加入8％的甘油，在50℃的条件下干燥6h，即得到抑菌膜。实施例3：N-琥珀酰壳聚糖(NSC)的制备参照CN10651927A；称取2gNSC溶解在40mLpH为9的磷酸柠檬酸盐缓冲溶液，加入EDC20mg、NHS20mg常温搅拌3h；加入Nisin80mg搅拌1h制得所需溶液NNSC；在NNSC溶液中加入1％紫苏油搅拌均匀；将上述制的溶液采用延流法制膜，加入5％的甘油，在70℃的条件下干燥5h，即得到抑菌膜。实施例4：按照牛津杯法对实施例1、实施例2、实施例3进行抑菌性能的测定，按照GB/T228-2010进行机械性能检测，结果见表1。表1，抑菌性能和机械性能检测由表一可知，本专利技术提供的方法制备的薄膜不仅机械性能优良，抑菌性能也很好。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.N‑琥珀酰壳聚糖固载乳酸链球菌素、紫苏油膜的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)N‑琥珀壳聚糖(NSC)的制备参照CN 10651927A；(2)称取1‑2g NSC溶解在pH 4‑9的磷酸柠檬酸盐缓冲溶液，加入EDC、NHS常温搅拌3h，加入20‑100mg乳酸链球菌素(Nisin)搅拌1h制得固载乳酸链球菌素的N‑琥珀酰壳聚糖，NNSC；(3)在NNSC溶液中加入0.5％‑1.5％紫苏油搅拌均匀；(4)将上述制的溶液采用延流法制膜，加入2‑10％的甘油，在30‑70℃的条件下干燥5‑12h。

【技术特征摘要】
1.N-琥珀酰壳聚糖固载乳酸链球菌素、紫苏油膜的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)N-琥珀壳聚糖(NSC)的制备参照CN10651927A；(2)称取1-2gNSC溶解在pH4-9的磷酸柠檬酸盐缓冲溶液，加入EDC、NHS常温搅拌3h，加入20-100mg乳酸链球菌素(Nisin)搅拌1h制得固载乳酸链球菌素的N-琥珀酰壳聚糖，NNSC；(3)在NNSC溶液中加入0.5％-1.5％紫苏油搅拌均匀；(4)将上述制的溶液采用延流法制膜，加入2-10％的甘油，在30-70℃的条件下干燥5-12h。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王虹苏，郭玲，陈艳，牛效迪，朱丽，韩保庆，费付喜，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22