细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物及其在制备肿瘤增效制剂中的用途制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及一种细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物及其在制备肿瘤增效制剂中的用途，本发明专利技术的组合药物,其通过阿法替尼显著抑制肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,以及诱导肿瘤细胞发生细胞自噬,在阿法替尼杀伤肿瘤细胞中细胞自噬起到保护肿瘤细胞的作用,使抑制细胞自噬达到明显増强阿法替尼对肿瘤细胞的杀伤的效果。本发明专利技术能降低阿法替尼治疗用量及用药产生的毒副作用并减少耐药的产生，同时降低治疗成本。本发明专利技术通过联合或序贯的使用方式用于干预治疗慢性髓系白血病、肝癌、乳腺癌和非小细胞肺癌，尤其是EGFR突变和HER2突变引发的肿瘤。

Composition of Cell Autophagy Inhibitor and Alfatinib and Its Application in the Preparation of Tumor Synergistic Agents

The invention belongs to the field of medical technology, and relates to a combination of cell autophagy inhibitor and alfatinib and its application in the preparation of tumor synergistic agents. The combined drug of the invention can significantly inhibit the proliferation of tumor cells and induce apoptosis of tumor cells through alfatinib, and induce autophagy of tumor cells, which kills tumor cells from autophagy by alfatinib. To protect the role of cancer cells, so as to inhibit autophagy of cells to achieve a strong effect of Afatinib on the killing of cancer cells. The invention can reduce the dosage of alfatinib and the toxic and side effects caused by medication, reduce the generation of drug resistance, and reduce the treatment cost. The invention is used to intervene in the treatment of chronic myeloid leukemia, liver cancer, breast cancer and non-small cell lung cancer, especially tumors caused by EGFR mutation and HER2 mutation, by combining or sequential use.

【技术实现步骤摘要】
细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物及其在制备肿瘤增效制剂中的用途
本专利技术属医药
，涉及新的治疗肿瘤的药物组合物；具体涉及一种自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物及其在制备肿瘤增效制剂中的用途，尤其涉及该组合药物通过联合给药或序贯给药在制备治疗含有EGFR突变的非小细胞肺癌、乳腺癌、肝癌和慢性髓系白血病的增效药物中用途。
技术介绍
现有技术公开了阿法替尼(Afatinib)是第二代TKI类药物，为多环类药物，其能够强效不可逆的结合到EGFR和Her2蛋白质上，从而阻断其相应的信号通路，抑制了细胞的生长，对含有EGFR突变的肿瘤细胞具有明显的疗效。据资料显示，肺癌是中国发病率最高的肿瘤疾病，研究报道了肺癌肿瘤细胞在镜下形态分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，在非小细胞肺癌中，又分为肺腺癌、肺鳞癌、肺大细胞癌，其中，肺腺癌的发病率最高，而肺腺癌的发病原因与吸烟、空气污染、放射、生活习惯均相关；据统计，约有40％的肺腺癌患者出现EGFR基因突变，EGFR基因的突变通过RAS/RAF以及PI3K等通路促使细胞疯狂增长以及细胞发生癌变，并促进肿瘤血管的形成。临床实践中，可以采用TKI类药物治疗干预此类疾病，TKI类药物能够结合到EGFR分子上，阻断其信号通路的传导，抑制肿瘤的生长、增殖。研究显示，第一代TKI药物吉非替尼能够明显延长患者的生存期，但是随着长时间的使用，肿瘤会发生耐药导致疗效降低，随后第二代TKI药物afatinib被研发出来，其对耐吉非替尼的肿瘤细胞具有很好的疗效，然而，长时间使用后，肿瘤细胞依然会对afatinib产生耐药。细胞自噬(autophagy)又称II型程序性死亡(typeIIprogrammedcelldeath),是真核生物体内常见的“白我消化”(cellulardegradation)的现象,其中，能分解细胞内受损或多余的细胞器和蛋白产生核甘酸,氨基酸等小分子物质供细胞合成新的蛋白质,并能维持细胞内微环境的稳定。近年来随着分子生物学及基因技术的发展和对细胞自噬的深入研究,发现其与多种疾病,尤其是肿瘤的发展关系密切。目前，关于细胞自噬在肿瘤的发生过程中的作用尚不甚明确,因此在肿瘤治疗中的作用呈现出“双刃剑”的复杂性,其既有可能抑制肿瘤细胞的生长,又有可能促进肿瘤细胞的增值。研究显示，细胞自噬能在氨基酸缺乏、缺氧、药物等逆条件下为肿瘤细胞提供必要的营养成分,维持肿瘤细胞的存活；研究还发现,曲拓珠和西妥音等单克降抗体类药物可诱导肿瘤细胞产生细胞自噬保护肿瘤细胞免于药物杀伤；5氟尿尿嘧啶作用于肝癌细胞可诱导细胞自噬；白黎芦西享作用于神经胶质瘤细胞可诱导细胞自噬的产生,抑制细胞自噬可增强上述化疗药物对月中瘤细胞的杀伤效果；而三氧化二砷作用于恶性神经胶质瘤细胞可引起肿瘤细胞发生自噬性死亡，等等；这表明不同药物作用于不同肿瘤细胞诱导的细胞自噬不同；近年来研究表明自噬的发生与肿瘤细胞的耐药性产生有密切关系,因此,探究药物作用于肿瘤细胞引发的细胞自噬作用及调控机制,对肿瘤的治疗具有重要意义。经文献检索等,迄今为止,尚未见有关细胞自噬抑制剂与阿法替尼制成组合药物及用于治疗肺腺癌的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的现状，提供一种新的治疗肿瘤的组合药物,具体涉及一种含自噬抑制剂和阿法替尼的组合药物及其用途,尤其涉及该组合药物通过联合给药或序贯使用在制备治疗EGFR突变的非小细胞肺癌、乳腺癌、肝癌和慢性髓系白血病等肿瘤增效药物中的用途。本专利技术公开的一种新的治疗肿瘤的组合药物,其由一种或多种安全剂量的细胞自噬抑制剂和式I结构的阿法替尼组成,其特点在于,药物自身无明显细胞毒性或对肿瘤有辅助杀伤作用，但能通过抑制细胞自噬增强阿法替尼对肿瘤细胞的杀伤作用,增强其疗效。本专利技术中,细胞自噬抑制剂选自3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine，3-MA)，氯喹(Chloroquine)，LY294002，巴伐洛霉素A1，氯化铵，羟基氯喹(hydroxychloroquine)；其中优选氯喹(Chloroquine)和3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine，3-MA)。本专利技术中，阿法替尼其化学结构如式(I)所示，属于第二代TKI类药物，也可以是第二代TKI其他药物。本专利技术中,所述的组合药物可用于治疗的肿瘤包括但不限于肺腺癌,本专利技术的组合药物还可以应用于临床干预肝癌、结肠癌、乳腺癌等。本专利技术提供的治疗肿瘤的组合药物,其通过阿法替尼显著抑制肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,以及诱导肿瘤细胞发生细胞自噬,在阿法替尼杀伤肿瘤细胞中细胞自噬起到保护肿瘤细胞的作用,使抑制细胞自噬达到明显増强阿法替尼对肿瘤细胞的杀伤的效果。本专利技术进行了体外干预实验：选取2株EFGFR突变的肺腺癌细胞株H1975和H1650细胞,设置不同浓度梯度和时间梯度给予阿法替尼诱导肿瘤细胞,MTT法测细胞活性,结果显示,阿法替尼能够显著抑制肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,20μM的阿法替尼对肿瘤细胞作用48h的抑制率达到60％-80％左右；然后激光共聚焦显微镜下观察经阿法替尼作用48h的肿瘤细胞,cyto-ID染色后,显示肿瘤细胞的自噬囊泡数量明显高于对照组,表明阿法替尼能诱导肿瘤细胞发生细胞自噬；为了进一步证明上述结果,采用Western-b1ot法检测白噬标志性蛋白LC3II/LC3-I的表达水平,结果显示,经阿法替尼干预的细胞LC3-II/LC3-I比率上调,进而表明阿法替尼能够诱导肿瘤细胞发生细胞自噬；最后选用两种自噬抑制剂3-MA、氯喹抑制细胞自噬,MTT法、Western-b1ot检测细胞自噬在阿法替尼杀伤肿瘤细胞中的作用,结果表明,细胞自噬在阿法替尼杀伤肿瘤细胞中起到保护肿瘤细胞的作用,通过抑制细胞自噬能产生明显增强阿法替尼对肿瘤细胞的杀伤效果；本专利技术同时利用裸鼠动物模型进一步验证了抑制自噬提高afatinib的疗效。本专利技术的由一种或几种安全剂量的自噬抑制剂与阿法替尼组成组合药物,通过联合或序贯使用方式用于治疗肿瘤,能明显增强阿法替尼杀伤肿瘤细胞的能力,进一部可用于辅助治疗对阿法替尼耐药的肿瘤患者；釆用本专利技术组合药物可以減少药物的用量,逆转肿瘤细胞的耐药性,降低对人体的毒副作用。本专利技术的由一种或几种安全剂量的自噬抑制剂与阿法替尼组成组合药物可进一步制成复方药物用于治疗非小细胞肺癌、乳腺癌、肝癌和慢性髓系白血病等肿瘤患者。附图说明图1，图2显示了不同浓度阿法替尼作用H1975和H1650细胞不同时间后细胞活力。图3显示了不同浓度阿法替尼作用细胞不同时间后细胞相关凋亡蛋白含量的变化。图4显示了激光共聚焦显微镜下的阿法替尼诱导肿瘤细胞H975和H1650自噬小体的产生结果。图5显示了Western-blot检测自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I表达水平。图6显示了抑制细胞自噬增强阿法替尼杀伤肿瘤细胞作用。图7显示了western-blot检测抑制细胞自噬后自噬相关蛋白Lc3的表达水平。图8显示了联合自噬抑制剂CQ比单用afatinib更能抑制肿瘤的发展。具体实施方式:实施例1阿法替尼诱导肿瘤细胞凋亡实验肺腺癌H1975和H1650细胞生长至对数生期后,以5*105cells/mL的浓度转入细胞培养板内培养,给予0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物，其特征在于，由一种或多种细胞自噬抑制剂和式I结构的阿法替尼组成，

【技术特征摘要】
1.细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物，其特征在于，由一种或多种细胞自噬抑制剂和式I结构的阿法替尼组成，2.按权利要求1所述的细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物，其特征在于，所述的细胞自噬抑制剂选自3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine，3-MA)，氯喹(Chloroquine)，LY294002，巴伐洛霉素A1，氯化铵或羟基氯喹(hydroxychloroquine)。3.按权利要求1所述的细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物，其特征在于，所述的细胞自噬抑制剂是氯喹(Chloroquine)或3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine，3-MA)。4.按权利要求1所述的细胞自噬抑制剂与阿法替尼药物组合物，其特征在于，所述的阿法替尼(afa...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯美卿，胡祥祥，施思，于晓晨，王欢，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31