类风湿因子检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种类风湿因子检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和试剂R3；所述试剂R1中含有包被兔IgG的磁微粒；所述试剂R2中含有抗人IgM/IgG/IgA抗体、抗人IgM抗体、抗人IgG抗体或抗人IgA抗体的标记物；所述试剂R3是由缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、着色剂、非离子表面活性剂和防腐剂按一定比例混合组成。本发明专利技术的类风湿因子检测试剂盒灵敏度高、线性范围宽、抗干扰能力强，可安全快速的检测类风湿因子。

【技术实现步骤摘要】
类风湿因子检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种类风湿因子检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
类风湿因子(rheumatoidfactor，RF)是一种抗变性IgG的自身免疫性抗体，可与人及多种动物IgG分子的Fc段结合。RF有IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五种，其中以IgM为主，也可见IgG和IgA，而IgE、IgD少见。类风湿因子与人体内变性IgG形成免疫复合物，激活补体，引起组织损伤。RF可在大多数类风湿关节炎(RA)患者的血清中检测到，是临床上诊断RA的重要依据之一。虽然RF的检测并不能直接得出疾病诊断的结果，必须综合临床症状等多种指标才能得到疾病诊断的结论，但是RF的检测可作为一项重要的参考指标，对于后期RA确诊具有重要意义。目前，类风湿因子多采用胶乳凝集法和散射比浊法，但是这两种方法不能对RF进行分型检测且灵敏度不高。随着临床上对RF分型检测的认可，国内和国外都已有RF的ELISA产品上市，多采用间接法原理。化学发光平台目前产品较少，但相比操作繁琐的ELISA，化学发光法操作相对简单，且灵敏度高，检测范围宽。所以采用化学发光法进行类风湿因子检测是趋势所在。化学发光免疫分析是近年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。检测原理是以发光物质作为信号放大系统并借助其发光强度直接测定免疫结合。该方法灵敏度高、检测范围宽，是免疫学检测重要的发展方向。
技术实现思路
为解决上述现有技术问题，本专利技术提供一种类风湿因子检测试剂盒及其检测方法。一种类风湿因子检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和试剂R3；所述试剂R1中含有包被兔IgG的磁微粒；所述试剂R2中含有抗人IgM抗体、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体中一种或多种的标记物；所述试剂R3是由缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、着色剂、乙二胺四乙酸二钠、非离子表面活性剂和防腐剂按一定比例混合组成。在一种优选实施方式中，所述标记物上标记有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、吖啶酯或吖啶酯衍生物中的一种。在一种优选实施方式中，所述试剂R3是由以下浓度的组分组成：10～50mM、pH值为6～8的缓冲体系；5～50g/L的无机盐；5～200g/L的糖类物质；5～100g/L的蛋白类物质；0.05～0.5g/L的着色剂；8～50mM的乙二胺四乙酸二钠；0.01～10mL/L的非离子表面活性剂和0.1～10mL/L的防腐剂。在另一种优选实施方式中，所述试剂R1中的磁微粒为顺磁微粒，该磁微粒选自亲和素磁微粒、甲苯磺酰基磁微粒、羧基磁微粒中的一种；所述试剂R1还包括缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、非离子表面活性剂、多元醇和防腐剂；所述R2还包括缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、着色剂、非离子表面活性剂、多元醇和防腐剂。在另一种实施方式中，一种类风湿因子检测试剂盒，该试剂盒是包括试剂R1、试剂R2和试剂R3；所述试剂R1是由以下浓度的成分组成：0.2～2mg/mL的包被兔IgG的磁微粒；10～200mM、pH值为6～8.5的缓冲体系；4～50g/L的无机盐；2～300g/L的糖类物质；5～160g/L的蛋白类物质；0.01～10mL/L的非离子表面活性剂；5～50mL/L的多元醇和0.1～10mL/L的防腐剂；所述试剂R2是由以下浓度的成分组成：0.03～4μg/mL的抗人IgM抗体、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体混合物的标记物；10～200mM、pH值为5.5～8.5的缓冲体系；4～50g/L的无机盐；2～300g/L的糖类物质；5～160g/L的蛋白类物质；0.05～0.5g/L的着色剂；0.01～10mL/L的非离子表面活性剂；5～50mL/L的多元醇和0.1～10mL/L的防腐剂；所述试剂R3是由以下浓度的成分组成：10～50mM、pH值为6～8的缓冲体系；5～50g/L的无机盐；5～200g/L的糖类物质；5～100g/L的蛋白类物质；0.05～0.5g/L的着色剂；8～50mmol/L乙二胺四乙酸二钠；0.01～10mL/L的非离子表面活性剂和0.1～10mL/L的防腐剂。在一种优选实施方式中，所述缓冲体系为磷酸缓冲体系、Tris缓冲体系、Mes缓冲体系或Hepes缓冲体系；所述无机盐为氯化钠；所述糖类物质选自甘露醇、海藻糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖中的一种或多种；所述蛋白类物质选自酪蛋白、牛血清白蛋白中的一种或多种；所述着色剂为果绿色素、日落黄、苋菜红或柠檬黄；所述非离子表面剂为Tween-20、Tween-80、Span-60、TritonX-45、TritonX-100或TritonX-305；所述多元醇为丙三醇；所述防腐剂为KroVin系列防腐剂、ProClin系列防腐剂或叠氮钠。在另一种优选实施方式中，所述试剂盒还包括校准品；所述校准品是由以下浓度的组分组成：0.1～500AU的类风湿因子；0～50mM、pH值为6～8的缓冲体系；4～20g/L的无机盐；1～200g/L的糖类物质；5～150g/L的蛋白类物质；0.20g/L的着色剂；0.01～10mL/L的非离子表面活性剂；5～50mL/L的多元醇和0.1～10mL/L的防腐剂。一种利用上述的类风湿因子检测试剂盒进行类风湿因子的检测方法，该方法包括以下步骤：首先，将样本与试剂R1和试剂R3混合均匀，使其结合充分后，磁场作用下洗涤多次，然后，加入试剂R2，待结合充分后，将未结合的物质清洗去除后，加入发光底物，然后，测定发光反应后的吸光度。在一种优选实施方式中，所述样本、试剂R1、试剂R3的体积比为1:4～6:8～12。在更进一步地优选实施方式中，所述样本、试剂R1、试剂R3的体积比为1:5:10。下面将详细地解释本专利技术。本专利技术提供的一种检测类风湿因子试剂盒，检测类风湿因子采用全自动化学发光磁微粒免疫分析方法；本专利技术还采用了试剂R3。因在保存过程中，试剂R1和试剂R2极易变质或保存时间较短；因此往往需在试剂R1和试剂R2中加入稳定剂、防腐剂等可使试剂R1和试剂R2在检测时保持较好的测试活性的添加剂，但是添加剂加入过多影响检测结果的准确性；此外，由于试剂盒容量的限制，测试用试剂不能充分的尽可能多的放入试剂盒中；因此本专利技术增加了试剂R3，以解决上述问题。专利技术人发现，如果单独配置试剂R3，在测试时再按适当比例将样本、试剂R1和试剂R3混合，可以有效解决检测试剂保存时间较短的问题，同时还可以确保检测试剂在检测时具备最佳缓冲液体系，提高检测灵敏度和准确性。此外，专利技术人意外发现，单独配置的试剂R3还有效的降低了类风湿因子检测过程中的交叉反应——在使用常规类风湿检测试剂盒时，如果直接对样本进行检测，检测过程中容易受到样本中补体的干扰，影响检测准确性；为了避免样本中补体的干扰，往往需在检测前对样本进行热处理。而本专利技术的类风湿检测试剂盒由于增加了试剂R3，将其加入到样本后，样本无需热处理，直接测试就可避免补体的干扰。因此，本专利技术的试剂盒由于增加了试剂R3而提高了检测特异性，本专利技术试剂盒的抗干扰能力更强。本专利技术中，试剂R1中1mg磁微粒上包被的兔IgG优选为0.3～60μg。当试剂R2中含有抗人IgM抗体、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体混合物的标记物时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类风湿因子检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和试剂R3；所述试剂R1中含有包被兔IgG的磁微粒；所述试剂R2中含有抗人IgM抗体、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体中一种或多种的标记物；所述试剂R3是由缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、着色剂、乙二胺四乙酸二钠、非离子表面活性剂和防腐剂按一定比例混合组成。

【技术特征摘要】
1.一种类风湿因子检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和试剂R3；所述试剂R1中含有包被兔IgG的磁微粒；所述试剂R2中含有抗人IgM抗体、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体中一种或多种的标记物；所述试剂R3是由缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、着色剂、乙二胺四乙酸二钠、非离子表面活性剂和防腐剂按一定比例混合组成。2.根据权利要求1所述的类风湿因子检测试剂盒，其特征在于：所述标记物上标记有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、吖啶酯或吖啶酯衍生物中的一种。3.根据权利要求1或2所述的类风湿因子检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R3是由以下浓度的组分组成：10～50mM、pH值为6～8的缓冲体系；5～50g/L的无机盐；5～200g/L的糖类物质；5～100g/L的蛋白类物质；0.05～0.5g/L的着色剂；8～50mM的乙二胺四乙酸二钠；0.01～10mL/L的非离子表面活性剂和0.1～10mL/L的防腐剂。4.根据权利要求1～3任一项所述的类风湿因子检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的磁微粒为顺磁微粒，该磁微粒选自亲和素磁微粒、甲苯磺酰基磁微粒、羧基磁微粒中的一种；所述试剂R1还包括缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、非离子表面活性剂、多元醇和防腐剂；所述R2还包括缓冲体系、无机盐、糖类物质、蛋白类物质、着色剂、非离子表面活性剂、多元醇和防腐剂。5.一种类风湿因子检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒是包括试剂R1、试剂R2和试剂R3；所述试剂R1是由以下浓度的成分组成：0.2～2mg/mL的包被兔IgG的磁微粒；10～200mM、pH值为6～8.5的缓冲体系；4～50g/L的无机盐；2～300g/L的糖类物质；5～160g/L的蛋白类物质；0.01～10mL/L的非离子表面活性剂；5～50mL/L的多元醇和0.1～10mL/L的防腐剂；所述试剂R2是由以下浓度的成分组成：0.03～4μg/mL的抗人IgM抗体、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体混合物的标记物；10～200mM、pH值为5.5～8.5的缓冲体系；4～50g/L的无机盐；2～300g/L的糖类物质；5～160g/L的蛋白类物质；0....

【专利技术属性】
技术研发人员：王沙莉，张凌燕，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51