一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，首先将家禽肺部脱脂后在乙酸溶液中浸提得到胶原蛋白浸提液，在上清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液中最终NaCl的浓度为0.8‑0.9mol/L，持续搅拌盐析得到粗胶原蛋白，最后经过复合蛋白酶液酶解，采用去离子水透析后冷冻干燥，最后得到胶原蛋白。本发明专利技术制备方法简单，步骤易于操作，能够将家禽肺部的胶原蛋白充分提取出来，能够用于食品、化妆品的原料，增强了家禽副产物的利用率。

【技术实现步骤摘要】
一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法
本专利技术涉及一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，属于胶原蛋白提取制备

技术介绍
胶原蛋白是人体组织结构的主要成分之一，它遍及全身的各个组织器官，如：皮肤、骨骼、软骨、韧带、角膜以及各种内膜筋膜等，是维持皮肤和组织器官形态、结构的主要成分，也是修复各损伤组织的重要物质。随着人们生活水平的逐渐提高，家禽的加工市场前景广阔，但对于家禽的一些内脏基本都是直接遗弃，但若能对这些进行二次利用，则能够充分利用资源，实现废物的再利用，符合当今绿色发展的时代要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有的家禽内脏资源利用不合理的现状，提供一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法。本专利技术采用如下技术方案：一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，包括如下步骤：（1）脱脂：取家禽肺部在异丙醇溶液中浸泡20-24h，冲洗干净后置于NaCl溶液中浸泡20-24h后冷藏保存；（2）浸提：将预处理好的脱脂家禽肺部置于0.4-0.5mol/L的乙酸溶液中，以1∶20~1∶50（m/V）的料液比在10~20℃条件下提取24~72h得到胶原蛋白浸提液；（3）对上述胶原蛋白浸提液离心分离，在上清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液中最终NaCl的浓度为0.8-0.9mol/L，持续搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃条件下静置6~12h后离心分离得到沉淀物，沉淀物为粗胶原蛋白；（4）将沉淀物用乙酸溶液溶解后置于透析袋中透析2~4天，直至透析外液中检测不到Cl-为止，然后用去离子水将滤渣进行清洗，水洗至滤渣水溶液pH值为6.6～7；（5）在滤渣中按1：0.6～1.0的质量比加入复合蛋白酶液，搅拌混匀，离心后得到酶促溶性胶原蛋白，采用去离子水透析后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，即可得到酸溶性胶原蛋白粉末。进一步的，所述步骤（1）中异丙醇溶液的质量分数为8-10%。进一步的，所述步骤（1）中NaCl溶液的质量分数为3-5%。进一步的，所述步骤（3）中离心3000~5000rpm下离心15~30min。进一步的，所述步骤（4）中的乙酸溶液的浓度为0.03-0.05mol/L。进一步的，所述步骤（4）和步骤（5）中的透析袋的截留分子量为1.0kD。进一步的，所述步骤（5）中是在真空冷冻干燥机中于真空度50-100Pa下预干燥10-30min，冷冻干燥于-45~-55℃干燥24-48h。本专利技术制备方法简单，步骤易于操作，能够将家禽肺部的胶原蛋白充分提取出来，能够用于食品、化妆品的原料，增强了家禽副产物的利用率。附图说明图1为本专利技术中实施例一的紫外吸收光谱图。图2为本专利技术中实施例一的凝胶电泳实验图。图3为本专利技术中实施例一的红外光谱图。图4为本专利技术中实施例一的X射线衍射光谱。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例一：一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，其特征是：包括如下步骤：（1）脱脂：将新鲜宰杀的鸡的肺部分离取出，于异丙醇溶液中浸泡20h，冲洗干净后置于NaCl溶液中浸泡24h后冷藏保存；（2）浸提：将预处理好的脱脂鸡肺部置于0.4mol/L的乙酸溶液中，以1∶50（m/V）的料液比在20℃条件下提取24h得到胶原蛋白浸提液；（3）对上述胶原蛋白浸提液离心分离，在上清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液中最终NaCl的浓度为0.9mol/L，持续搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃条件下静置6h后离心分离得到沉淀物，沉淀物为粗胶原蛋白；（4）将沉淀物用乙酸溶液溶解后置于透析袋中透析4天，直至透析外液中检测不到Cl-为止，然后用去离子水将滤渣进行清洗，水洗至滤渣水溶液pH值为6.6；（5）在滤渣中按1：1的质量比加入复合蛋白酶液，搅拌混匀，离心后得到酶促溶性胶原蛋白，采用去离子水透析后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，即可得到酸溶性胶原蛋白粉末。经测定胶原蛋白得率为33.2%（占干重），纯度为85.4%。实施例二：一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，其特征是：包括如下步骤：（1）脱脂：将新鲜宰杀的鸭的肺部分离取出，在异丙醇溶液中浸泡22h，冲洗干净后置于NaCl溶液中浸泡22h后冷藏保存；（2）浸提：将预处理好的脱脂鸭肺部置于0.45mol/L的乙酸溶液中，以1∶30（m/V）的料液比在15℃条件下提取36h得到胶原蛋白浸提液；（3）对上述胶原蛋白浸提液离心分离，在上清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液中最终NaCl的浓度为0.85mol/L，持续搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃条件下静置8h后离心分离得到沉淀物，沉淀物为粗胶原蛋白；（4）将沉淀物用乙酸溶液溶解后置于透析袋中透析3天，直至透析外液中检测不到Cl-为止，然后用去离子水将滤渣进行清洗，水洗至滤渣水溶液pH值为7；（5）在滤渣中按1：0.8的质量比加入复合蛋白酶液，搅拌混匀，离心后得到酶促溶性胶原蛋白，采用去离子水透析后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，即可得到酸溶性胶原蛋白粉末。经测定胶原蛋白得率为40.7%（占干重），纯度为75.4%。实施例三：一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，其特征是：包括如下步骤：（1）脱脂：将新鲜宰杀的鹅的肺部分离取出，在异丙醇溶液中浸泡24h，冲洗干净后置于NaCl溶液中浸泡20h后冷藏保存；（2）浸提：将预处理好的脱脂鹅肺部置于0.5mol/L的乙酸溶液中，以1∶20（m/V）的料液比在10℃条件下提取72h得到胶原蛋白浸提液；（3）对上述胶原蛋白浸提液离心分离，在上清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液中最终NaCl的浓度为0.8mol/L，持续搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃条件下静置12h后离心分离得到沉淀物，沉淀物为粗胶原蛋白；（4）将沉淀物用乙酸溶液溶解后置于透析袋中透析2天，直至透析外液中检测不到Cl-为止，然后用去离子水将滤渣进行清洗，水洗至滤渣水溶液pH值为7；（5）在滤渣中按1：0.6的质量比加入复合蛋白酶液，搅拌混匀，离心后得到酶促溶性胶原蛋白，采用去离子水透析后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，即可得到酸溶性胶原蛋白粉末。经测定胶原蛋白得率为42.7%（占干重），纯度为67.1%。取实施例一制备得到的酸溶性胶原蛋白粉末依次进行紫外吸收光谱、凝胶电泳实验、红外光谱和XRD分析，实验步骤和实验结果如下：（1）紫外吸收光谱：称取适量胶原蛋白样品溶于0.5mol/L乙酸溶液中，浓度为0.5mg/mL，在13400g下离心20min，保留上清液用于紫外吸收光谱（UV-6100，上海美普达仪器有限公司）的测定。扫描范围：190-400nm，光谱间隔1.0nm。结果如图1所示。由图1可知，鸡肺胶原蛋白的最大吸收值为235nm，这与崔凤霞等人从海参体壁中提取的酶促溶性胶原蛋白基本相似。除此，鸡肺胶原蛋白质中的色氨酸和酪氨酸含量较少，所以该样品在280nm附近有一个较小的吸光度。（2）凝胶电泳实验：称取1mg胶原蛋白样品溶于2mL0.5M乙酸溶液中，静置，5000g下离心10min，待用。制备12%的分离胶和5%的浓缩胶，进行电泳。将100μL样品与200μL上样缓冲液（pH8.8的0.06MTris-HCl缓冲液、2%SDS、5%β-巯基乙醇、25%甘油、0.1%溴酚蓝）混合，然后沸水浴10min，于10000g离心3m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，其特征是：包括如下步骤：（1）脱脂：取家禽肺部在异丙醇溶液中浸泡20‑24 h，冲洗干净后置于NaCl溶液中浸泡20‑24 h后冷藏保存；（2）浸提：将预处理好的脱脂家禽肺部置于0.4‑0.5 mol/L的乙酸溶液中，以1∶20~1∶50（m/V）的料液比在10~20℃条件下提取24~72 h得到胶原蛋白浸提液；（3）对上述胶原蛋白浸提液离心分离，在上清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液中最终NaCl的浓度为0.8‑0.9mol/L，持续搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃条件下静置6~12h后离心分离得到沉淀物，沉淀物为粗胶原蛋白；（4）将沉淀物用乙酸溶液溶解后置于透析袋中透析2~4天，直至透析外液中检测不到Cl‑为止，然后用去离子水将滤渣进行清洗，水洗至滤渣水溶液pH值为6.6～7；（5）在滤渣中按1：0.6～1.0的质量比加入复合蛋白酶液，搅拌混匀，离心后得到酶促溶性胶原蛋白，采用去离子水透析后将透析袋中的胶原蛋白冷冻干燥，即可得到酸溶性胶原蛋白粉末。

【技术特征摘要】
1.一种基于家禽肺部胶原蛋白的提取方法，其特征是：包括如下步骤：（1）脱脂：取家禽肺部在异丙醇溶液中浸泡20-24h，冲洗干净后置于NaCl溶液中浸泡20-24h后冷藏保存；（2）浸提：将预处理好的脱脂家禽肺部置于0.4-0.5mol/L的乙酸溶液中，以1∶20~1∶50（m/V）的料液比在10~20℃条件下提取24~72h得到胶原蛋白浸提液；（3）对上述胶原蛋白浸提液离心分离，在上清液中加入研磨成粉末的NaCl，使溶液中最终NaCl的浓度为0.8-0.9mol/L，持续搅拌盐析，析出絮状沉淀，在4℃条件下静置6~12h后离心分离得到沉淀物，沉淀物为粗胶原蛋白；（4）将沉淀物用乙酸溶液溶解后置于透析袋中透析2~4天，直至透析外液中检测不到Cl-为止，然后用去离子水将滤渣进行清洗，水洗至滤渣水溶液pH值为6.6～7；（5）在滤渣中按1：0.6～1.0的质量比加入复合蛋白酶液，搅拌混匀，离心后得到酶促溶性胶原蛋白，采用去离子水透析后将透析袋中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹烨，杨恒，王道营，张新笑，李鹏鹏，诸永志，徐为民，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32