一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液及其制备方法，该含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，含有谷氨酰胺、泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛·HCl、核黄素、硫胺素·HCl、KCl、NaCl、NaH2PO4·2H2O、葡萄糖、右旋糖酐40、丙酮酸钠、维生素C、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、非动物源重组人血清白蛋白、硫酸庆大霉素、碳酸氢钠、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、苯酚红指示剂、注射用水。本发明专利技术的优点是通过加入非动物源重组人血清白蛋白，替代血清提高角膜内皮细胞存活率；再者采用非动物源重组人血清白蛋白协同硫酸软骨素钠、透明质酸钠和右旋糖酐40复配体系，极大程度确保角膜内皮细胞的存活。

【技术实现步骤摘要】
一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液及其制备方法
本专利技术涉及含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液领域，特别是涉及一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液及其制备方法。
技术介绍
人血清白蛋白(HSA)作为人血浆中含量最丰富的蛋白，其主要功能包括：(1)维持溶液胶体渗透压和pH值；(2)脂质、金属离子、氨基酸和其他因子等重要配体的结合和运输；(3)抗氧化功能。人血清白蛋白的X射线晶体结构揭示了其是一个心形的分子，有585个氨基酸以单链连接，含67％的α-螺旋。人血清白蛋白结构的显著待征是有三个同源区城(Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ)，每个区域由两个亚结构域组成(A扣B)，每个螺旋通过可变环连接，分子中共有35个半胱氨酸残基，17对二硫键，形成8对双二硫桥，并构成9个环，Cys34位于大约10°深的级缝中，在氧化还原反应中起着至关重要的作用。目前角膜中期保存液已批准的有K-Sol，CSM，Dexsol，Optisol液，Optisol-Gs，ChenMedium，CorneaCold，Eusol-C，LIFE4℃和Cornisol等产品，其中K-Sol，CSM，Dexsol，Optisol液，Optisol-Gs，ChenMedium，CorneaCold和LIFE4℃产品仅通过美国FDA认证，Eusol-C产品通过美国FDA和CE认证。以上国外批准上市的产品中均无血清成分，主要是因为动物源性血清在使用过程中存在风险，可能含有内毒素、病毒或者支原体等不容易检测及除去的外源污染，此外，血清在工业生产中存在问题如在下游工艺、产品纯化、原料易变、产品供给方面存在限制以及昂贵的成本。
技术实现思路
专利技术目的：针对上述问题，本专利技术的目的之一是提供一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，以解决动物源性血清带来的外源污染的技术问题。本专利技术的目的之二是提供一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液的制备方法。技术方案：一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，含有谷氨酰胺、泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛·HCl、核黄素、硫胺素·HCl、KCl、NaCl、NaH2PO4·2H2O、葡萄糖、右旋糖酐40、丙酮酸钠、维生素C、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、非动物源重组人血清白蛋白、硫酸庆大霉素、碳酸氢钠、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、苯酚红指示剂、注射用水，其中，注射用水为溶剂，其他各组分的浓度分别为：谷氨酰胺0.2～0.8g/L、泛酸钙0.001～0.005g/L、氯化胆碱0.001～0.008g/L、叶酸0.001～0.006g/L、肌醇0.002～0.01g/L、烟酰胺0.001～0.006g/L、吡哆醛·HCl0.001～0.008g/L、核黄素0.0001～0.001g/L、硫胺素·HCl0.001～0.008g/L、KCl0.05～0.8g/L、NaCl3.0～6.0g/L、NaH2PO4·2H2O0.01～0.5g/L、葡萄糖0.05～2.0g/L、右旋糖酐400.5～2g/L、丙酮酸钠0.001～0.5g/L、维生素C0.002～2g/L、硫酸软骨素钠15～25g/L、透明质酸钠0.1～2g/L、非动物源重组人血清白蛋白0.1～10g/L、硫酸庆大霉素0.05～0.7g/L、碳酸氢钠10～24mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸20～26mmol/L、苯酚红指示剂0.01～0.05g/L。在其中一个实施例中，还含有精氨酸·HCl、胱氨酸、组氨酸·HCl·H2O、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸·HCl、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸，其中，各组分的浓度分别为：精氨酸·HCl0.12～0.5g/L、胱氨酸0.01～0.1g/L、组氨酸·HCl·H2O0.02～0.2g/L、异亮氨酸0.03～0.28g/L、亮氨酸0.03～0.28g/L、赖氨酸·HCl0.05～0.26g/L、蛋氨酸0.01～0.06g/L、苯丙氨酸0.03～0.13g/L、苏氨酸0.02～0.2g/L、色氨酸0.005～0.05g/L、酪氨酸0.03～0.2g/L、缬氨酸0.04～0.3g/L。在其中一个实施例中，含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液的pH值为7.2～7.6。一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液的制备方法，包括以下步骤：1)按照配方量分别称取各原料；2)将配液罐内加入注射用水，温度控制至38～60℃，搅拌过程中投入谷氨酰胺、KCl、NaCl、NaH2PO4·2H2O、葡萄糖、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、右旋糖酐40、丙酮酸钠、碳酸氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸，补注射用水至总配制量的60～75％，并搅拌30～120min；3)将配液罐内料液温度控制至25～40℃，在搅拌过程中向配液罐内投入泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛·HCl、核黄素、硫胺素·HCl和维生素C，补注射用水至总配制量的80～85％，并搅拌20～80min，得到混合液一；4)将配液罐内料液温度控制至16～40℃，向混合液一内加入硫酸庆大霉素，补注射用水至总配制量的90～95％，并搅拌5～40min，得到混合液二；5)将配液罐内料液温度控制至16～40℃，向混合液二内加入苯酚红指示剂，补液定容并搅拌10～40min，用盐酸和/或氢氧化钠调节pH值至7.2～7.6，得到中间品配制液；6)将中间品配制液经过预过滤器进行预过滤处理，后再经PES过滤器进行除菌过滤，得到预料液；7)将非动物源重组人血清白蛋白添加到预料液中，混合均匀，得到含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液。在其中一个实施例中，步骤2)中，还包括在搅拌过程中，将精氨酸·HCl、胱氨酸、组氨酸·HCl·H2O、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸·HCl、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸加入到配液罐中。在其中一个实施例中，步骤5)中，还包括以下步骤：得到的中间品配制液，进行取样检测，检测pH值、渗透压及外观，检测合格的标准为：pH值为7.2～7.6、渗透压为270～340mOsmol/kg、外观颜色为淡玫瑰橙色，无悬浮物、无可见异物、无沉淀。在其中一个实施例中，步骤6)中，还包括以下步骤：中间品配制液在进行除菌过滤前后，将PES过滤器进行滤芯完整性检测，滤芯的合格标准为：气泡点值≥58.0psi。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点是1)上述含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，首先通过加入重组人血清白蛋白，其可替代血清为角膜组织及内皮细胞提供所需的活性因子和营养物质，维持角膜保存过程中角膜内皮细胞的存活，且不会带来任何外源性污染；再者采用了重组人血清白蛋白协同硫酸软骨素钠、透明质酸钠和右旋糖酐40的复配体系，具体机理为硫酸软骨素钠、透明质酸钠和右旋糖酐40含有大量的亲水性极性基团，可与水分子、聚合物分子形成氢键缔合，从而使角膜组织、高分子聚合物和水分子有机结合在一起；非动物源重组人血清白蛋白、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、右旋糖酐40的复配结合，通过相互之间的协同增效，能够有效维持角膜原有的胶原纤维结构和透明性，且保存时间较长，尽可能保护角膜内皮细胞的存活，提高角膜保存后进行角膜移植术的成功率，同时也为眼科植入技术的安全性提供有力保证。2)上述含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液的制备方法，由于采用分批投料的方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，其特征在于，含有谷氨酰胺、泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛·HCl、核黄素、硫胺素·HCl、KCl、NaCl、NaH2PO4·2H2O、葡萄糖、右旋糖酐40、丙酮酸钠、维生素C、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、非动物源重组人血清白蛋白、硫酸庆大霉素、碳酸氢钠、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、苯酚红指示剂、注射用水，其中，注射用水为溶剂，其他各组分的浓度分别为：谷氨酰胺0.2～0.8g/L、泛酸钙0.001～0.005g/L、氯化胆碱0.001～0.008g/L、叶酸0.001～0.006g/L、肌醇0.002～0.01g/L、烟酰胺0.001～0.006g/L、吡哆醛·HCl 0.001～0.008g/L、核黄素0.0001～0.001g/L、硫胺素·HCl 0.001～0.008g/L、KCl 0.05～0.8g/L、NaCl 3.0～6.0g/L、NaH2PO4·2H2O 0.01～0.5g/L、葡萄糖0.05～2.0g/L、右旋糖酐40 0.5～2g/L、丙酮酸钠0.001～0.5g/L、维生素C 0.002～2g/L、硫酸软骨素钠15～25g/L、透明质酸钠0.1～2g/L、非动物源重组人血清白蛋白0.1～10g/L、硫酸庆大霉素0.05～0.7g/L、碳酸氢钠10～24mmol/L、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸20～26mmol/L、苯酚红指示剂0.01～0.05g/L。...

【技术特征摘要】
1.一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，其特征在于，含有谷氨酰胺、泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛·HCl、核黄素、硫胺素·HCl、KCl、NaCl、NaH2PO4·2H2O、葡萄糖、右旋糖酐40、丙酮酸钠、维生素C、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、非动物源重组人血清白蛋白、硫酸庆大霉素、碳酸氢钠、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、苯酚红指示剂、注射用水，其中，注射用水为溶剂，其他各组分的浓度分别为：谷氨酰胺0.2～0.8g/L、泛酸钙0.001～0.005g/L、氯化胆碱0.001～0.008g/L、叶酸0.001～0.006g/L、肌醇0.002～0.01g/L、烟酰胺0.001～0.006g/L、吡哆醛·HCl0.001～0.008g/L、核黄素0.0001～0.001g/L、硫胺素·HCl0.001～0.008g/L、KCl0.05～0.8g/L、NaCl3.0～6.0g/L、NaH2PO4·2H2O0.01～0.5g/L、葡萄糖0.05～2.0g/L、右旋糖酐400.5～2g/L、丙酮酸钠0.001～0.5g/L、维生素C0.002～2g/L、硫酸软骨素钠15～25g/L、透明质酸钠0.1～2g/L、非动物源重组人血清白蛋白0.1～10g/L、硫酸庆大霉素0.05～0.7g/L、碳酸氢钠10～24mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸20～26mmol/L、苯酚红指示剂0.01～0.05g/L。2.根据权利要求1所述的一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，其特征在于，还含有精氨酸·HCl、胱氨酸、组氨酸·HCl·H2O、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸·HCl、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸，其中，各组分的浓度分别为：精氨酸·HCl0.12～0.5g/L、胱氨酸0.01～0.1g/L、组氨酸·HCl·H2O0.02～0.2g/L、异亮氨酸0.03～0.28g/L、亮氨酸0.03～0.28g/L、赖氨酸·HCl0.05～0.26g/L、蛋氨酸0.01～0.06g/L、苯丙氨酸0.03～0.13g/L、苏氨酸0.02～0.2g/L、色氨酸0.005～0.05g/L、酪氨酸0.03～0.2g/L、缬氨酸0.04～0.3g/L。3.根据权利要求1所述的一种含重组人血清白蛋白的角膜中期保存液，其特征在于，含重组人血清白蛋白的角膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏萍，童剑萍，许伟，吴佳宇，肖丹，
申请(专利权)人：镇江雷音再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32