杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用。一种杂交瘤细胞，保藏号为CCTCC No：C201874。上述杂交瘤细胞能够稳定分泌多种抗体3F11。3F11能够特异性地结合人3型腺病毒、7型腺病毒、55型腺病毒及14型腺病毒。上述杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体可广泛应用在制备治疗感染人腺病毒的相关疾病的药物中，也可用于制备检测人腺病毒的检测试剂或检测设备中，具有高效、准确的优点。

Hybridoma cells, monoclonal antibodies and their preparation methods and Applications

The invention relates to a hybridoma cell, a monoclonal antibody and a preparation method and application thereof. A hybridoma cell, preservation number CCTCC No: C201874. These hybridoma cells can secrete multiple antibodies 3F11 stably. 3F11 can specifically bind human adenovirus type 3, adenovirus type 7, adenovirus type 55 and adenovirus type 14. These hybridoma cells and monoclonal antibodies secreted by them can be widely used in the preparation of drugs for the treatment of diseases related to human adenovirus infection, as well as in the preparation of detection reagents or detection equipment for human adenovirus detection. They have the advantages of high efficiency and accuracy.

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
至今已发现的人腺病毒(humanAdenovirus，HAdV)有7组50多种血清型，超过69种基因型。腺病毒是致病毒性肺炎的主要病原体之一，B组、C组、E组腺病毒都可以引起呼吸道感染。尤其是B组腺病毒的3型、7型、14型、55型和E组4型腺病毒是致急性呼吸道感染(ARI)和婴幼儿致死性肺炎的重要病原体。其中，在致成人急性呼吸道感染的腺病毒中，B组7型腺病毒(HAdV-B7)、14型腺病毒(HAdV-B14)和55型腺病毒(HAdV-B55)是最重要的几个型别。值得注意的是，55型腺病毒是一种基因组重组的腺病毒，其基因组的纤毛基因主要来自14型腺病毒，只有六邻体高变区来源于人11型腺病毒，这种重组变异导致其不能被HAdV-B14抗血清中和。根据现有技术研究发现，重组是腺病毒进化的主要方式，重组可能产生生物学特性改变的新型腺病毒，出现更强致病性或更强传染性的新毒株，将会严重威胁人类健康。但目前在世界范围内还没有针对腺病毒特异有效的治疗药物，尤其是能够同时对多种不同型别的腺病毒均有效的药物。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用。一种杂交瘤细胞，保藏号为CCTCCNo：C201874。在其中一个实施例中，上述杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体标记为3F11。在其中一个实施例中，所述单克隆抗体的轻链包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列，所述单克隆抗体的重链包括如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。在其中一个实施例中，编码所述单克隆抗体的轻链的基因包括如SEQIDNO.3所示的碱基序列，编码所述单克隆抗体的重链的基因包括如SEQIDNO.4所示的碱基序列。一种治疗腺病毒感染的药物，包括上述杂交瘤细胞或上述单克隆抗体。一种检测试剂，包括上述杂交瘤细胞或上述单克隆抗体。一种可分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，包括如下步骤：将Ad11FK抗原与弗氏完全佐剂按体积比1:1混合，得到乳化剂；将所述乳化剂以40μg/只～80μg/只的抗原剂量免疫BALB/c小鼠，饲养2周～3周后，得到初次免疫的小鼠；将所述Ad11FK抗原与弗氏不完全佐剂按体积比1:1混合后，以40μg/只～80μg/只的抗原剂量对所述初次免疫的小鼠进行加强免疫，饲养2周～3周后，得到加强免疫的小鼠；用所述Ad11FK抗原以20μg/只～50μg/只的抗原剂量对将所述加强免疫的小鼠进行尾脾内冲击免疫，饲养2天～4天后，得到冲击免疫的小鼠；采集所述冲击免疫的小鼠的脾细胞；将所述脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，得到融合细胞；及用所述Ad11FK抗原筛选所述融合细胞，得到阳性融合细胞，并将所述阳性融合细胞克隆，得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。在其中一个实施例中，所述将所述脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，得到融合细胞的步骤，包括：分别吸取所述脾细胞和所述小鼠骨髓瘤细胞于离心管中，加入不完全培养液后混匀，离心弃上清，得沉淀液，其中所述脾细胞与所述小鼠骨髓瘤细胞的个数比例为5～3：1；及在所述沉淀液中加PEG融合剂溶液，静置80s～100s后，加入不完全培养液终止融合，得到所述融合细胞，其中，所述PEG融合剂溶液与所述脾细胞的比例为1mL：108个。在其中一个实施例中，所述用所述Ad11FK抗原筛选所述融合细胞，得到阳性融合细胞，并将所述阳性融合细胞克隆，得到稳定单克隆抗体的杂交瘤细胞的步骤包括：培养所述融合细胞，用间接酶联免疫法筛选得到所述阳性融合细胞；及采用有限稀释法将所述阳性融合细胞单克隆化，得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。上述杂交瘤细胞的制备方法简单易行，按照上述杂交瘤细胞制备的杂交瘤细胞能够分泌单克隆抗体3F11。上述杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体具有高特异性、性能稳定等优点。经证实，3F11能够特异性地结合人3型腺病毒、7型腺病毒、55型腺病毒及14p腺病毒。上述单克隆抗体可广泛应用于制备治疗多种型别的人腺病毒感染的药物中，也可用于制备检测人腺病毒的检测试剂或检测设备中，可以实现准确、快速地检测出血液中的人腺病毒。附图说明图1为实施例1的Ad11FK抗原的SDS-PAGE电泳图；图2为anti-Ad11FK抗血清与Ad3、Ad4、Ad5、Ad7、Ad11、Ad14、Ad35、Ad55病毒的交叉反应结果图；图3为间接ELISA法检测anti-Ad11FK抗血清与Ad3FK、Ad7FK、Ad11FK、Ad14p1FK、Ad55FK进行交叉反应的结果图；图4为间接ELISA法检测anti-Ad11FK抗血清与Ad3、Ad7、Ad11、Ad14p1、Ad55进行交叉反应的结果图；图5为anti-Ad11FK抗血清对不同型别腺病毒的中和作用结果图；图6为间接ELISA法检测实施例3所制备的单克隆抗体的效价结果图；图7为实施例3制备的3F11与不同型别腺病毒的纤毛蛋白的头部结构域的交叉反应的结果图图8为实施例3制备的3F11与不同型别腺病毒颗粒的交叉反应的结果图；图9为实施例3制备的3F11与不同型别腺病毒颗粒的交叉中和作用结果图；图10为实施例3制备的3F11与不同型别腺病毒的反应的免疫印迹检测结果图；图11为不同腺病毒纤毛蛋白的头部结构域的氨基酸序列比对分析图；图12为不同腺病毒纤毛蛋白的头部结构域的结构图；图13为3F11的轻链可变区序列分析图；图14为3F11的重链可变区序列分析图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的部分实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本专利技术公开内容更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。一实施方式的杂交瘤细胞于2018年6月29日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏号为CCTCCNo：C201874，分类命名：杂交瘤细胞株3F11。该杂交瘤细胞可分泌出3F11。其中，3F11能同时中和腺病毒Ad7、Ad11、Ad55、Ad14p。3F11可以作为检测抗体，3F11应用于人腺病毒的检测试剂或人腺病毒的检测设备的制备领域中。也可以应用于制备治疗感染人腺病毒相关疾病的药物。一实施方式的可分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，包括如下步骤S110～S170。S110、制备Ad11FK抗原。具体地，制备Ad11FK抗原的操作包括S111～S117。S111、将人11型腺病毒的纤毛蛋白的头部结构域(fiberknob)的基因进行密码子优化，以适应大肠杆菌表达。进一步地，优化后的人11型腺病毒的纤毛蛋白的头部结构域(fiberknob)的基因的序列SEQIDNo.5所示，优化后的人11型腺病毒的纤毛蛋白的头部结构域的氨基酸序列如SEQIDNo.6所示。S113、人工合成优化后的人11型腺病毒的纤毛蛋白的头部结构域(fiberknob)的基因的序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂交瘤细胞，其特征在于，保藏号为CCTCC No：C201874。

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞，其特征在于，保藏号为CCTCCNo：C201874。2.如权利要求1所述的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体标记为3F11。3.如权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的轻链包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列，所述单克隆抗体的重链包括如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。4.如权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，编码所述单克隆抗体的轻链的基因包括如SEQIDNO.3所示的碱基序列，编码所述单克隆抗体的重链的基因包括如SEQIDNO.4所示的碱基序列。5.如权利要求1所述的杂交瘤细胞或如权利要求2～4任一项所述的单克隆抗体在制备治疗人腺病毒相关疾病的药物中的应用。6.一种治疗人腺病毒感染的药物，其特征在于，包括如权利要求1所述的杂交瘤细胞或权利要求2～4任一项所述的单克隆抗体。7.一种检测试剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的杂交瘤细胞或权利要求2～4任一项所述的单克隆抗体。8.一种可分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将Ad11FK抗原与弗氏完全佐剂按体积比1:1混合，得到乳化剂；将所述乳化剂以40μg/只～80μg/只的抗原剂量免疫BALB/c小鼠，饲养2周～3周后，得到初次免疫的小鼠；将所述Ad11FK抗原与弗氏不完全佐剂按体积比1:1混合后，以40μg/只～80μg/只的抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：田新贵，周荣，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东,44