橙黄决明素在制备消炎和预防光老化产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了橙黄决明素在制备消炎和预防光老化产品中的应用，本发明专利技术通过LPS诱导RAW264.7细胞释放NO和IL‑6为靶点，验证了橙黄决明素具有良好的消炎作用，证明橙黄决明素在制备消炎产品方面具有良好的应用前景；本发明专利技术通过UVB诱导HaCaT细胞分泌IL‑6和IL‑1α为靶点，验证了橙黄决明素具有预防光老化作用，证明橙黄决明素在制备预防光老化产品方面具有良好的应用前景。

Application of orange Cassia in the preparation of anti-inflammatory and anti-photoaging products

The invention discloses the application of orange casein in the preparation of anti-inflammatory and anti-photoaging products. The target of the invention is to induce RAW264.7 cells to release NO and IL_6 by LPS, which verifies that orange casein has good anti-inflammatory effect, and proves that orange casein has good application prospects in the preparation of anti-inflammatory products. The invention induces HaCaT cells to secrete IL_6 and IL_1a by UVB. Targets proved that orange Cassia has the effect of preventing photoaging, and it has a good application prospect in the preparation of products for preventing photoaging.

【技术实现步骤摘要】
橙黄决明素在制备消炎和预防光老化产品中的应用
本专利技术涉及橙黄决明素领域，具体是橙黄决明素在制备消炎和预防光老化产品中的应用。
技术介绍
决明子始载于《神农本草经》，为豆科植物决明(CassiaObtusifoliaL.)或小决明(CassiatoraL.)的干燥成熟种子，其味甘、苦、咸，性微寒，功效为清热明目，润肠通便。现代药理研究表明，决明子具有降脂、增强免疫力、抗氧化、保肝、利胆、平喘、抑菌、抗动脉粥样硬化等功效。橙黄决明素是决明子中专属的成分，其性状为黄色针晶葸醌类化合物，该化合物具有多种生物活性如降血糖、降血脂、抗雌激素以及抑制胶原诱导的血小板聚集等。目前，尚未有橙黄决明素对于消炎和预防光老化方面的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供橙黄决明素在制备消炎和预防光老化产品中的应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：橙黄决明素在制备消炎产品中的应用。作为本专利技术进一步的方案：所述橙黄决明素在制备消炎产品时，橙黄决明素的用量为5-20μmol/L。作为本专利技术进一步的方案：所述橙黄决明素在制备消炎产品时，橙黄决明素的用量为5μmol/L。作为本专利技术进一步的方案：所述橙黄决明素在制备消炎产品时，橙黄决明素的用量为20μmol/L。橙黄决明素在制备预防光老化产品中的应用。作为本专利技术进一步的方案：所述橙黄决明素在制备预防光老化产品时，橙黄决明素的用量为10-20μmol/L。作为本专利技术进一步的方案：所述橙黄决明素在制备预防光老化产品时，橙黄决明素的用量为10μmol/L。作为本专利技术进一步的方案：所述橙黄决明素在制备预防光老化产品时，橙黄决明素的用量为20μmol/L。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：第一，本专利技术通过LPS诱导RAW264.7细胞释放NO和IL-6为靶点，验证了橙黄决明素具有良好的消炎作用，证明橙黄决明素在制备消炎产品方面具有良好的应用前景；第二，本专利技术通过UVB诱导HaCaT细胞分泌IL-6和IL-1α为靶点，验证了橙黄决明素具有预防光老化作用，证明橙黄决明素在制备预防光老化产品方面具有良好的应用前景。附图说明图1为橙黄决明素对Raw264.7细胞活力的影响图。图2为橙黄决明素对LPS诱导Raw264.7细胞分泌NO的影响图。图3为橙黄决明素对LPS诱导Raw264.7细胞分泌IL-6的影响图。图4为橙黄决明素对HaCaT细胞分泌IL-6的影响图。图5为橙黄决明素对HaCaT细胞分泌IL-1α的影响图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞是常见研究炎症反应的模型。巨噬细胞在脂多糖LPS刺激下，可促使炎症因子如一氧化氮(nitricoxide，NO)和白介素-6(interleukin6)的分泌。本专利技术以LPS诱导RAW264.7细胞释放NO和IL-6为靶点，考察橙黄决明素的消炎作用。皮肤老化包括自然老化和光老化，其中光老化除造成皮肤的色泽、纹理、弹性、厚度等的变化外，甚至可能使皮肤出现各种良性或恶性肿瘤，影响严重。皮肤光老化与UV照射关系密切，中波紫外线UVB主要作用于皮肤表皮层中的角质形成细胞，使皮肤外观发生上述变化及相应的分子生物学改变，引起细胞的凋亡并分泌炎症因子IL-6等。HaCaT是常用的人表皮角质细胞系，本专利技术以UVB诱导HaCaT细胞分泌IL-6和IL-1α为靶点，考察橙黄决明素的预防光老化作用。材料和试剂：RAW264.7细胞株购自中国科学院上海细胞所；HaCaT购自中国科学院上海细胞所，橙黄决明素、地塞米松和DMSO(二甲基亚砜)购自Sigma公司，DMEM高糖培养基、胎牛血清FBS、胰酶等购自Gibco公司，CCK-8购自上海前尘生物科技有限公司；IL-6等细胞因子ELISA试剂盒购自美国eBiosience公司。药液配制：橙黄决明素用DMSO配制成10mmol/L的母液备用，加药时用DMEM培养基稀释成需要的浓度。细胞培养：RAW264.7细胞用含质量分数10％FBS的DMEM高糖培养基培养，置于质量分数5％CO2、37℃、饱和湿度的细胞培养箱中培养。待细胞生长至对数生长期进行传代，2～3d传代1次。取至少3代后的细胞用于实验。HaCaT细胞用含质量分数为10％FBS的DMEM高糖培养基培养，置于质量分数5％CO2、37℃、饱和湿度的细胞培养箱中培养。待细胞生长至对数生长期进行传代，2～3d传代1次。取至少3代后的细胞用于实验。药物及组合物对RAW264.7细胞生长的影响：取对数生长期的RAW264.7细胞用质量分数为0.25％胰酶和质量分数为0.02％EDTA消化2min后，弃胰酶，用质量分数10％FBS的DMEM高糖培养基中和胰酶作用，轻轻吹打成单细胞悬液，离心弃上清，用完全培养基重悬细胞并计数后，调整细胞悬液至8×105/mL，按每孔100μL接种至96孔培养板，37℃、质量分数5％CO2、饱和湿度条件下培养24h，吸尽每孔上清，每孔加入100μLDMEM高糖培养基，随机分为阴性对照组(含质量分数0.1％DMSO的DMEM高糖培养基)、毒性对照组(含质量分数5％DMSO的DMEM高糖培养基)、药物组；加入相应药物后，每组设4个复孔，质量分数5％CO2、37℃、饱和湿度条件下培养24h后，提前4h按每孔10μL加入CCK-8，4h后酶标仪检测450nm处吸光度值(A450)。图1中可以看出，与空白对照组相比，不同浓度橙黄决明素对RAW264.7细胞的生长无明显影响，即橙黄决明素在5-20μmol/L浓度无细胞毒作用。炎症因子检测：取对数生长期的RAW264.7细胞用质量分数为0.25％胰酶和质量分数为0.02％EDTA消化2min后，弃胰酶，用质量分数为10％FBSDMEM高糖培养基中和胰酶作用，轻轻吹打成单细胞悬液，离心弃上清液，用完全培养基重悬细胞并计数后，调整细胞悬液至8×105/mL，按每孔100μL接种至96孔培养板，37℃、质量分数5％CO2、饱和湿度条件下培养8h左右使细胞贴壁，吸尽每孔上清液，每孔加入100μL无血清DMEM高糖培养基，随机分为空白对照组、LPS(1μg/mL)组、LPS+阳性对照组(5μmol/LDex)、LPS(1μg/mL)+药物组，加入相应药物后，每组设4个复孔，质量分数为5％C02、37℃、饱和湿度条件下培养24h后，取上清液用于NO、白细胞介素-6(IL-6)等炎症因子的检测。图2中可以看出，不同浓度橙黄决明素可以显著抑制细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞的NO分泌，并呈剂量依赖效果。图3中可以看出，不同浓度橙黄决明素可以显著抑制细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞的IL-6分泌，其中20μM浓度的橙黄决明素抗炎效果最好。UVB光老化炎症因子检测：取对数生长期的Hacat细胞用质量分数为0.25％胰酶和质量分数为0.02％EDTA消化2min后，弃胰酶，用质量分数10％FBSDMEM高糖培养基中和胰酶作用，轻轻吹打成单细胞悬液，离心弃上清液，用完全培养基重悬细胞并计数后，调整细胞悬液至8×104/mL，按每孔400μL接种至2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.橙黄决明素在制备消炎产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.橙黄决明素在制备消炎产品中的应用。2.根据权利要求1所述的橙黄决明素在制备消炎产品中的应用，其特征在于，所述橙黄决明素的用量为5-20μmol/L。3.根据权利要求2所述的橙黄决明素在制备消炎产品中的应用，其特征在于，所述橙黄决明素的用量为20μmol/L。4.橙黄决...

【专利技术属性】
技术研发人员：周鲁先，李宁，王惠琇，
申请(专利权)人：上海艾济生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31