The invention discloses a method for establishing a rapid propagation system of in vitro leaf cuttings of Qinling stone butterfly, which includes three steps: disinfection and inoculation of explant leaves, propagation and culture of leaf cuttings, and rooting and strong seedling culture. In the process of culture, basic medium and specific medium supplemented with MS nutrient solution and hormone are used. First, the leaves used as explants are wiped, washed, washed and rinsed. After washing with sterilized deionized water, the leaf Bingtai was inserted downward obliquely into the basic medium. Adventitious bud formation was induced by adding multiplication medium to the base of petiole. Finally, adventitious bud clusters were divided into individual plants and transferred to the basic medium. Rooting and seedling culture medium was added to the root of single bud for rooting and seedling growth. The invention realizes rapid propagation and cultivation of leaf cuttings of Qinling stone butterfly by tissue culture technology, has high multiplication coefficient, overcomes the characteristics of slow natural reproduction mode, obtains a large number of high-quality seedlings with stable genetic characteristics in a short time, and has positive significance for rapid propagation of Qinling stone butterfly and protection of germplasm resources.
【技术实现步骤摘要】
一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法
本专利技术涉及植物组织培养
,具体为一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法。
技术介绍
秦岭石蝴蝶(PetrocosmeaqinlingensisW.T.Wang)为苦苣苔科(Gesneriaceae)石蝴蝶属(Petrocosmea)植物,是秦岭地区特有的多年生草本植物,花期8-9月,生于山地岩石上,海拔650米,被列为国家Ⅱ级重点保护野生植物,并被定为濒危种。秦岭石蝴蝶是石蝴蝶属分布最北端的种类,自然居群数量极少,多次野外调查并未发现其野生居群,研究者曾认为该种已灭绝。2015年陕西省野生植物资源调查重新发现了该种,其分布区域非常狭窄,仅限于陕西省勉县茶店镇附近,多生于阴湿、苔藓积聚多的石灰石崖壁上。自然条件下秦岭石蝴蝶种子不育,无性繁殖速度又很慢。生境独特且繁殖方式限制是该种致濒的重要原因。利用植物组织培养技术进行秦岭石蝴蝶的快速繁殖,可以在短时间内获得大量与母株遗传背景一致的优质种苗,克服自然繁殖方式较慢的特点,但是,在此之前还没有建立秦岭石蝴蝶试管内快速繁殖的报道,更没有成功的实例。所以实现秦岭石蝴蝶的快速繁殖对于秦岭石蝴蝶的野外回归与种质资源保护具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以带柄叶片为外植体材料,经过叶片消毒、接种、叶插增殖以及生根壮苗等步骤成功实现秦岭石蝴蝶的叶插快繁培养,能够克服自然繁殖方式较慢的特点,在短时间内获得大量遗传性状稳定一致的优质种苗,技术易掌握,增殖系数极高的秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系。为实现上述目的,本专利技术提供的技术方案是:一种秦岭石蝴蝶 ...
【技术保护点】
1.一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)叶片的消毒及接种:从秦岭石蝴蝶母株上摘取健康的带柄叶片为外植体材料,对外植体材料进行清洗和消毒,然后将外植体材料无菌操作下叶柄端朝下斜插入基础培养基中,所述基础培养基由一定体积比的珍珠岩、蛭石和泥炭加水混均后于121.3℃下灭菌60min制得;(2)叶插增殖培养:从步骤(1)中斜插入基础培养基的外植体材料的叶柄基部向培养基中添加增殖培养液,诱导不定芽的形成,所述增殖培养液为MS营养液+IBA,所述IBA浓度为100~600mg/L,pH值为5.8;(3)生根壮苗培养:将步骤(2)中得到的不定芽丛分为单株,挑选芽体大于2cm且带有3~5片叶的单株转入基础培养基,从单芽基部向基础培养基中加入生根壮苗培养液进行生根壮苗,所述生根壮苗培养液为MS营养液+IBA,所述IBA浓度为200mg/L,pH值为5.8。
【技术特征摘要】
1.一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)叶片的消毒及接种:从秦岭石蝴蝶母株上摘取健康的带柄叶片为外植体材料,对外植体材料进行清洗和消毒,然后将外植体材料无菌操作下叶柄端朝下斜插入基础培养基中,所述基础培养基由一定体积比的珍珠岩、蛭石和泥炭加水混均后于121.3℃下灭菌60min制得;(2)叶插增殖培养:从步骤(1)中斜插入基础培养基的外植体材料的叶柄基部向培养基中添加增殖培养液,诱导不定芽的形成,所述增殖培养液为MS营养液+IBA,所述IBA浓度为100~600mg/L,pH值为5.8;(3)生根壮苗培养:将步骤(2)中得到的不定芽丛分为单株,挑选芽体大于2cm且带有3~5片叶的单株转入基础培养基,从单芽基部向基础培养基中加入生根壮苗培养液进行生根壮苗,所述生根壮苗培养液为MS营养液+IBA,所述IBA浓度为200mg/L,pH值为5.8。2.根据权利要求1所述的一种秦岭石蝴蝶试管内叶插快繁体系的建立方法,其特征在于,所述步骤(1)和(3)中基础培养基的制备过程为:首先按照2:1:1的体积比量取珍珠岩、蛭石和泥炭并加水混均,待吸水饱和后分别装入240mL的培养瓶中,装入体积为培养瓶体积的1/3,然后盖上透气盖,最后将培养瓶于121.3℃下灭菌60min,得到基础...
【专利技术属性】
技术研发人员:胡选萍,蒋景龙,王琦,李耘,秦公伟,胡凤成,赵新峰,
申请(专利权)人:陕西理工大学,汉中市林业局,略阳县苗圃,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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