一种检测5型牛腺病毒的核酸组合、试剂盒及应用与检测方法技术

本发明专利技术提供了一种检测5型牛腺病毒的核酸组合、试剂盒及应用与检测方法，属于生物技术及分子生物技术领域。本发明专利技术提供的检测5型牛腺病毒的核酸组合，针对5型腺病毒设计，针对性强，特异性强，灵敏度高；将上述核酸组合用于检测的试剂盒中，能方便检测，提高检测的稳定性；通过利用该核酸组合进行检测，提高检测结果的可信度，具有较好的实际应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种检测5型牛腺病毒的核酸组合、试剂盒及应用与检测方法
本专利技术涉及生物技术及分子生物
，具体而言，涉及一种检测5型牛腺病毒的核酸组合、试剂盒及应用与检测方法。
技术介绍
牛腺病毒(Bovineadenovirus，BAV)，为腺病毒科哺乳动物腺病毒属的成员。目前已报道牛腺病毒总共有10个血清型，BAV-1、-2、-3、-9、-10型牛腺病毒属于哺乳动物腺病毒属，而BAV-4、-5、-6、-7和-8型属于腺胸腺病毒属。牛腺病毒5型的基因组是双链的DNA分子，感染牛的临床症状主要包括结膜炎、肺炎、腹泻和多发性关节炎，被感染犊牛出现发热和食欲不振等症状及肺脏实变的肉眼病变。近年来，我国许多地区牛群中爆发了牛呼吸道传染病，死亡率达10％-50％，造成严重的经济损失。对该疫情进行流行病学调查和分析，表明牛腺病毒在其中起了很重要的作用。牛腺病毒的快速检测是控制和消灭该病的前提，但腺病毒的常规检测方法一般分为免疫学方法、生物学试验、分子生物学诊断技术等方法，但是都存在难以早期诊断、敏感度第等缺点。
技术实现思路
一方面，本申请实施例提供了一种检测5型牛腺病毒的核酸组合，该核酸组合能较为灵敏的识别5型牛腺病毒，特异性较强；还提供一种检测5型牛腺病毒的试剂盒，方便检测；将试剂盒应用于检测，能提高检测效率，检测精度和准确性和稳定性都能得到提高。为了实现本专利技术的上述目的，采用以下技术方案：一种检测5型牛腺病毒的核酸组合，核酸组合包括检测引物对和检测探针；检测引物对的碱基序列如SEQIDNo.1-2所示；检测探针的碱基序列如SEQIDNo.3所示；检测探针5’端包括荧光报告基团，检测探针3’端包括荧光淬灭基团。一种检测5型牛腺病毒的试剂盒，试剂盒包括上述的检测5型牛腺病毒的核酸组合。上述的检测5型牛腺病毒的试剂盒在检测5型牛腺病毒中的应用。一种5型牛腺病毒的检测方法，包括以下步骤：构建5型牛腺病毒的阳性模板，并梯度稀释后利用上述的检测5型牛腺病毒的核酸组合分别进行扩增，建立标准曲线；提取待检样本的基因组，利用上述的检测5型牛腺病毒的核酸组合进行扩增，根据扩增结果结合标准曲线，结算得到待检样品Ct值，根据Ct值判断检测结果。与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：本专利技术提供的检测5型牛腺病毒的核酸组合，针对5型腺病毒设计，针对性强，特异性强，灵敏度高；将上述核酸组合用于检测的试剂盒中，能方便检测，提高检测的稳定性；通过利用该核酸组合进行检测，提高检测结果的可信度，具有较好的实际应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定。对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实验例提供阳性模板验证结果图；图2为本专利技术实验例提供的标准曲线示意图；图3为本专利技术实验例提供的特异性实验结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的一种检测5型牛腺病毒的核酸组合、试剂盒及应用与检测方法进行具体说明。本专利技术一方面一种检测5型牛腺病毒的核酸组合，核酸组合包括检测引物对和检测探针；检测引物对的碱基序列如SEQIDNo.1-2所示；检测探针的碱基序列如SEQIDNo.3所示；检测探针5’端包括荧光报告基团，检测探针3’端包括荧光淬灭基团。通过针对5型牛腺病毒设计的检测引物和探针，通过引物的扩增以及探针的识别，并且通过探针的荧光基团的配合，提高检测精度和准确性。检测引物的上游引物如SEQIDNo.1所示：BAV-5-F：5’-CATCACTGCCACACAAAGCTTT-3’；检测引物的下游引物如SEQIDNo.2所示：BAV-5-R：5’-TGTATCGGCACAATACGAAGTTGTA-3’；探针的碱基序列如SEQIDNo.3所示：BAV-5-P：5’-TCCAACATCTGGAGTAACTACCGACCGCT-3’。目的片段的长度为123bp。在本专利技术的一些可选的实施例中，核酸组合还包括阳性模板，阳性模板的碱基序列如SEQIDNo.4所示。阳性模板的碱基序列如SEQIDNo.4所示：ccccagcgggagttttttcacattgcgggtagaaatgcgagggaatatctgtctgaaaatctggtgcagttcatcactgccacacaaagcttttttaatcttggagagaaatttagagatccttttgtagctccaacatctggagtaactaccgaccgctctcaaaaactacaacttcgtattgtgccgatacaagtagaagataatgaaaacttttataaagctaggtttatactaaatgttggagataatcgaatagctgacctaggaagtgctttttttgacatagaaggatttgtt本专利技术实施例中，选用牛腺病毒5型Hexon基因保守序列的300bp片段作为阳性模板序列，具有较好的特异性。通过设计阳性模板，能方便进行定量检测，并且方便进行对比实验，避免污染。在本专利技术的一些可选的实施例中，荧光报告基团为MGB、VIC、TET、JOE、HEX、ROX、RED610、TEXASRED、RED670、NED、FAM、CY3、CY5、TAMRA、BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。通过在探针的5’端设置荧光基团，通过荧光基团的发光等，可以方便的检测。在本专利技术的一些可选的实施例中，荧光淬灭基团为MGB、VIC、TET、JOE、HEX、ROX、RED610、TEXASRED、RED670、NED、FAM、CY3、CY5、TAMRA、BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种；荧光报告基团不同于荧光淬灭基团。同理，通过在探针的3’端设置淬灭基团，方便在扩增的时候，进行检测；同时在5’端和3’端分别设置不同的基团，避免相互的干扰，提高识别度，提高检测的精度。本专利技术一方面体用一种检测5型牛腺病毒的试剂盒，试剂盒包括上述的检测5型牛腺病毒的核酸组合。由于检测的核酸组合针对性较强，试剂盒也具有较高的特异性；通过试剂盒，方便检测。在本专利技术的一些可选的实施例中，试剂盒还包括基因组提取试剂、PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶、dNTPs或Mg2+中的至少一种。试剂盒中提供基因组提取试剂，方便进行检测的时候，直接提取基因组，省去准备相关试剂的麻烦，提高检测效率。通过基因组提取试剂提取基因组后，通过PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶、dNTPs和Mg2+可以进行PCR扩增反应，方便快捷；适于批量的进行试验。Mg2+可以是MgSO4或MgCl2。在本专利技术的一些可选的实施例中，基因组提取试剂包括蛋白酶K。基因组提取试剂加入蛋白酶K，通过蛋白酶K的消化，可以消除一些蛋白的影响，提高提取的基因组的纯度。上述的检测5型牛腺病毒的试剂盒在检测5型牛腺病毒中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测5型牛腺病毒的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合包括检测引物对和检测探针；所述检测引物对的碱基序列如SEQ ID No.1‑2所示；所述检测探针的碱基序列如SEQ ID No.3所示；所述检测探针5’端包括荧光报告基团，所述检测探针3’端包括荧光淬灭基团。

【技术特征摘要】
1.一种检测5型牛腺病毒的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合包括检测引物对和检测探针；所述检测引物对的碱基序列如SEQIDNo.1-2所示；所述检测探针的碱基序列如SEQIDNo.3所示；所述检测探针5’端包括荧光报告基团，所述检测探针3’端包括荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述的检测5型牛腺病毒的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合还包括阳性模板，所述阳性模板的碱基序列如SEQIDNo.4所示。3.根据权利要求2所述的检测5型牛腺病毒的核酸组合，其特征在于，所述荧光报告基团为MGB、VIC、TET、JOE、HEX、ROX、RED610、TEXASRED、RED670、NED、FAM、CY3、CY5、TAMRA、BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。4.根据权利要求3所述的检测5型牛腺病毒的核酸组合，其特征在于，所述荧光淬灭基团为MGB、VIC、TET、JOE、HEX、ROX、RED610、TEXASRED、RED670、NED、FAM、CY3、CY5、TAMRA、BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种；所述荧光报告基团不同于所述荧光淬灭基团。5.一种检测5型牛腺病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：安微，陈世界，李丹丹，林华，车颖欣，张婧，杨苗，
申请(专利权)人：四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：四川,51