本发明专利技术公开了一种用于改善新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液，包括0.05M Tris‑NaCl缓冲液，所述0.05M Tris‑NaCl缓冲液中，按照重量体积比，含有0.05%‑0.3%的肝素钠，1%‑20%的海藻糖和1‑10%的牛免疫球蛋白G。与现有技术相比，本发明专利技术提供了一种易于实施并且可以用于改善免疫测定中新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液，检测时可与其他试剂组分同时加入，便于进行自动化操作，同时该稀释液配方中各成分对环境和生物体危害较小。使用时，可作为标记抗体或抗原的稀释液、也可作为偶联包被抗原或抗体磁性小球的保存液加入反应体系中。
Diluent for improving matrix effect between fresh serum and third-party quality control
The present invention discloses a diluent for improving matrix effect between fresh serum and third-party quality control, including 0.05M Tris NaCl buffer, which contains 0.05%0.3% heparin sodium, 1%20% trehalose and 1 10% bovine immunoglobulin G according to the weight-volume ratio. Compared with the prior art, the present invention provides a diluent which is easy to implement and can be used to improve the matrix effect between fresh serum and third-party quality control in immunoassay. The diluent can be added with other reagent components at the same time for automatic operation, and the components in the diluent formula are less harmful to environment and organism. When used, it can be used as a diluent for labeling antibodies or antigens, or as a preservation solution for conjugating coated antigens or antibody magnetic spheres to join the reaction system.
【技术实现步骤摘要】
用于改善新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液
本专利技术涉及体外诊断技术，尤其是涉及一种用于改善免疫测定中新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液。
技术介绍
国际标准化组织对基质效应的定义是：样本中除分析物以外其他组份对检测结果的影响。临床实验室中的基质效应是指不同于新鲜血清的基质，其组分对系统测定结果引起的偏差。临床实验室经常采用新鲜血清去评估病人的生理状态或血清指标。但临床实验室常用第三方质控(伯乐质控、朗道质控等)来评估实验室的质量控制。第三方质控和医学上的血清样本的基质有着很大的不同。质控血清一般是采用经过处理过的混合血清、血浆或类似物(模拟人血清、血浆成分)，处理方式一般包含过滤、透析、冷冻、冻干、添加稳定剂等。这些处理会引起检测系统对其反应与新鲜血清、血浆样本反应性不一致，甚至引起很大的测定差异。近几年，不少学者在消除基质效应的方面进行了广泛的研究，应用较多的是基质稀释和采用一些特定的装置。但是，基质稀释一般操作复杂，费时费力。而降低基质效应的装置只能应用于特定的检测系统之中，不具有通用性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于改善免疫测定中新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液。为实现上述目的，本专利技术可采取下述技术方案：本专利技术所述的用于改善新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液，包括0.05MTris-NaCl缓冲液，所述0.05MTris-NaCl缓冲液中，按照重量体积比，含有0.05%-0.3%的肝素钠，1%-20%的海藻糖和1-10%的牛免疫球蛋白G。所述稀释液的pH值采用浓盐酸调整至7.0。按照重量体积比，在0.05MTris-NaCl缓冲液中含有0.15%的肝素钠，10%的海藻糖，3%的牛免疫球蛋白G时效果较好。本专利技术稀释液制备时，首先称取肝素钠，然后将其溶解于少量的0.05MTris-NaCl缓冲液中，再加入海藻糖和牛免疫球蛋白G，用Tris-NaCl缓冲液定容，最后用浓盐酸调整pH值至7.0即可。本专利技术制备的稀释液检测时可作为标记抗体或抗原的稀释液，也可作为偶联包被抗原或抗体磁性小球的保存液加入反应体系；或作为一个单独的稀释液加入反应体系中。与现有技术相比，本专利技术提供了一种易于实施并且可以用于改善免疫测定中新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液，检测时可与其他试剂组分同时加入，便于进行自动化操作，同时该稀释液配方中各成分对环境和生物体危害较小。使用时，可作为标记抗体或抗原的稀释液、也可作为偶联包被抗原或抗体磁性小球的保存液加入反应体系中。本专利技术的主要创新之处在于：a)首次将肝素钠应用于免疫检测反应过程，能显著的改善免疫测定中新鲜血清和第三方质控之间基质效应，当免疫检测系统同时测定质控、不同类型的血清或血浆时，可减弱不同基质来源的样本对免疫试剂的干扰，以保障试剂的稳定性、重现性和可靠性；b)稀释液中的所有组分均是该体系下的最优配方，能很好改善质控和新鲜血清的基质效应；c)将本专利技术制备的以肝素钠为主要成分的稀释液用于血清样品中游离三碘甲状腺原氨酸的检测，测定新鲜血清和第三方质控（伯乐质控、朗道质控等），最终检测结果与进口对比试剂盒的检测结果相比，有较好的一致性。附图说明图1是将本专利技术制备等稀释液应用于游离三碘甲状腺原氨酸检测校准品反应曲线。图2为本专利技术制备的稀释液应用于游离三碘甲状腺原氨酸检测新鲜血清和第三方质控，与进口对比试剂盒检测结果对比。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术做更加详细的说明，以利于本领域技术人员的理解。实施例1配制用于改善新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液本专利技术稀释液是在0.05MTris-NaCl缓冲液中按重量体积比，添加0.15%肝素钠、10%海藻糖和3%牛免疫球蛋白G，然后用浓盐酸调整至pH7.0即可。本专利技术稀释液制备时，首先称取肝素钠，然后将其溶解于少量的0.05MTris-NaCl缓冲液中，再加入海藻糖和牛免疫球蛋白G，用Tris-NaCl缓冲液定容，最后用浓盐酸调整pH值至7.0，得到缓冲液成品。实施例2本专利技术配制的稀释液用于游离三碘甲状腺原氨酸检测新鲜血清和第三方质控第一步，游离三碘甲状腺原氨酸检测相关试剂准备a)包被有抗游离三碘甲状腺原氨酸抗体的磁微粒混悬液的制备：根据使用量取适量的羧基磁微粒，用过量的EDC和NHS在酸性条件下（pH4.5-pH5.5）进行活化，活化缓冲液为0.05M-0.1M的MES（2-（N-吗啉代）乙磺酸）缓冲液，活化时间为30min，活化完成后，加磁场，静置5min使磁微粒与液体分开，弃去上清，用pH为7.6的0.01M的PBS缓冲液洗涤两遍以洗去多余的活化剂；加入适量的游离三碘甲状腺原氨酸抗体，使其浓度为2.5μg/mg，在0.05M-0.1M的MES缓冲液中（pH4.5-pH5.5）震荡反应1h；反应结束后加磁场，静置5min使磁微粒与液体分开，弃去上清，用含有1%牛免疫球蛋白G的0.01M的PBS缓冲液（pH7.6）进行封闭，反复封闭5次，每次10min；封闭结束后，加入适量的封闭液以保存磁微粒，使磁微粒的最终浓度为0.5mg/ml；将该磁微粒混悬液置于2-8℃保存，以备使用；b)游离三碘甲状腺原氨酸系列校准品的制备：用含有1%-3%BSA和0.1-0.3%PC300的Tris-NaCl缓冲液将游离三碘甲状腺原氨酸纯品配制成标示浓度为0pmol/L、2pmol/L、5pmol/L、10pmol/L、25pmol/L、50pmol/L的一系列校准品，瓶盖颜色依次为白、黄、绿、蓝、红、紫、黑；c)辣根过氧化物酶标记的游离三碘甲状腺原氨酸的制备：将游离三碘甲状腺原氨酸上的羧基与辣根过氧化物酶（HRP）分子的氨基经EDC的作用缩合为酰胺化合物，透析后即得酶标游离三碘甲状腺原氨酸；在标记好的溶液中，等比加入甘油-20℃保存备用；d）改善免疫测定中新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液的配制：称取肝素钠，然后将其溶解于少量0.05MTris-NaCl缓冲液中，再加入一定比例的海藻糖和牛免疫球蛋白G，加入0.05MTris-NaCl缓冲液定容，用浓盐酸调整pH值至7.0；e)向稀释液中添加1/20000-1/50000的酶标游离三碘甲状腺原氨酸抗原，即为游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒的酶结合物；f）发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液的配制：发光底物A液由0.2MTris-Hcl、0.15mMLuminol、0.59mM羟基香豆素、0.35mM没食子酸配制而成；发光底物B液由0.85mM氨基酸氧化酶、0.8%Tween20、0.5mMDTPA、0.12mM维生素C配制而成；浓缩洗液由NaH2PO4•2H2O4.06g,Na2HPO4•12H2O62.32g,Tween202-10ml,蒸馏水1000ml配制而成。第二步，人血清样品中游离三碘甲状腺原氨酸检测的应用a)取出一定量的反应容器编号。根据实验要求加入50μl校准/质控品/临床血清；b)摇匀磁微粒混悬液，每孔分别加入20μl；c)每孔分别加入酶标记物50μ；d)将反应容器内溶液混合均匀，37℃温育30分钟；e)使用磁分离及洗涤设备，将反应容器中磁微粒用洗液洗涤5次；f)将洗涤后的反应容器充分振荡使磁微粒散开；g)每孔加入发光底物A和发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于改善新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液，其特征在于：包括0.05M Tris‑NaCl缓冲液，所述0.05M Tris‑NaCl缓冲液中含有0.05%‑0.3%的肝素钠，1%‑20%的海藻糖和1‑10%的牛免疫球蛋白G。
【技术特征摘要】
1.一种用于改善新鲜血清和第三方质控之间基质效应的稀释液，其特征在于：包括0.05MTris-NaCl缓冲液，所述0.05MTris-NaCl缓冲液中含有0.05%-0.3%的肝素钠，1%-20%的海藻糖和1-10%的牛免疫球蛋白G。2.根据权利要求1所述的用于改善新...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋书杰，高远鹰，佟欢，任永茂，靳增明，付光宇，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41
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