一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，属于基因组DNA提取领域，所述磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒包括：裂解液以及磁珠，裂解液组成成分为：20‑100mmol/L的盐酸胍、10‑50mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、50‑250mmol/L的KCl溶液、10‑100mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.1％‑1％SDS亲水基表面活性剂，所述的磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒解决了目前技术中采用酚氯仿、柱提法等方法从口腔拭子中提取DNA过程存在酚氯仿污染、DNA得率低、纯度差的问题，所述磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒提取口腔拭子样本中的基因组DNA，片段完整度高，产物浓度和纯度高，提取的DNA可用于PCR扩增以及荧光定量PCR等实验，值得推广。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒
本专利技术涉及基因组DNA提取领域，具体是一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒。
技术介绍
人口腔黏膜由多层细胞组成，具有代谢快、易脱落、DNA完整的特点，因此，运用口腔拭子采集口口腔脱落细胞DNA过程简单、无痛、无创。该方法适用于不同年龄段人群的DNA样本采集，也适用不便采血的人群采集DNA。传统方法中多采用酚氯仿、Chelex-100、柱提法等方法从口腔拭子中提取DNA，该过程存在酚氯仿污染、DNA得率低、纯度差或者操作繁琐，用时长等缺点，严重影响了医护人员了解患者病况的效率。针对上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术旨在提供一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的目前传统方法中采用酚氯仿、Chelex-100、柱提法等方法从口腔拭子中提取DNA过程存在酚氯仿污染、DNA得率低、纯度差或者操作繁琐，用时长的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，其包括：高效的裂解液以及独特的结合磁珠，其中：裂解液组成成分为：20-100mmol/L的盐酸胍、10-50mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、50-250mmol/L的KCl溶液、10-100mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.1％-1％SDS亲水基表面活性剂。所述磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒使用方法包括以下步骤：口腔拭子取样品、裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管、蛋白酶K消化、磁珠纯化、75％乙醇溶液洗涤以及含Nucleasefreewater低盐缓冲液洗脱。作为本专利技术进一步的方案：所述口腔拭子取样品实施方式为：将在口腔内擦拭过的拭子或者棉签转置于1.5mL的离心管中，将拭子剪下或者使其脱落；所述裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管实施方式为：往装有口腔拭子样品中的离心管中加入300uL裂解液，震荡混匀离心，将液体转移至新的1.5mL离心管中得混合液一。作为本专利技术再进一步的方案：所述蛋白酶K消化实施方式为：往混合液一中加入10uL蛋白酶K，吹打混匀，在56℃，800rpm的转速的条件下孵育30min得混合液二；所述磁珠纯化实施方式为：混合液二室温放置5min后，12000rpm离心2min，将200uL上清转移至含100uL结合磁珠的1.5mL离心管中，涡旋混匀，室温静置孵育5min，短离，将离心管置于磁力架上至溶液澄清。作为本专利技术更进一步的方案：所述75％乙醇溶液洗涤实施方式为：移除上清，向离心管中加入500uL75％乙醇溶液，剧烈Vortex，磁力架上30s，重复该步骤一次，即75％乙醇溶液洗涤步骤实施两次，短离，使用移液器移除底部残留乙醇溶液，室温静置2-5min，至磁珠不反光；所述含Nucleasefreewater低盐缓冲液洗脱方式为：加入20-50uL的低盐缓冲液，把离心管从磁力架取下，重悬磁珠，室温静置5min，将离心管置于磁力架上2min，用移液器吸取上清液，转移到新的1.5ml离心管中。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒设计合理，样本(口腔拭子)通过在高效的裂解液和蛋白酶K的作用下裂解消化，将DNA释放到裂解液中，加入独特的磁珠(已含特定的反应体系)使其与DNA特异性结合。在一定比例的乙醇溶液中，将该体系中的蛋白质和其余杂质去除，只留下磁珠上结合的DNA，最后DNA在水溶液或低盐缓冲液中进行洗脱，得到的DNA可用于后续实验。所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒实用性强，其适用于提取口腔拭子样本的基因组DNA，其A260/280大于1.8，片段完整度高；提取的整个过程不涉及有毒有害试剂，操作过程安全，全程仅需60分钟即可完成高质量DNA的提取，方便便捷快速稳定；高效的裂解液体系及独特的磁珠相匹配，操作用时短，产物浓度和纯度高，提取的DNA可用于高通量测序实验、酶切、PCR扩增、荧光定量PCR等实验。所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒值得在口腔拭子样本的基因组DNA提取领域推广与使用。附图说明图1为一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法流程图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例请参阅图1，一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，其包括：高效的裂解液以及独特的结合磁珠，其中，裂解液组成成分为：20-100mmol/L的盐酸胍、10-50mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、50-250mmol/L的KCl溶液、10-100mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.1％-1％SDS亲水基表面活性剂。所述磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒使用方法包括以下步骤：口腔拭子取样品、裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管、蛋白酶K消化、磁珠纯化、75％乙醇溶液洗涤以及Nucleasefreewater/低盐缓冲液洗脱。所述口腔拭子取样品实施方式为：将在口腔内擦拭过的拭子或者棉签转置于1.5mL的离心管中，将拭子剪下或者使其脱落。所述裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管实施方式为：往装有口腔拭子样品中的离心管中加入300uL裂解液，震荡混匀离心，将液体转移至新的1.5mL离心管中(约200mL)得混合液一。所述蛋白酶K消化实施方式为：往混合液一中加入10uL蛋白酶K，吹打混匀，在56℃，800rpm的转速的条件下孵育30min得混合液二。所述磁珠纯化实施方式为：混合液二室温放置5min后，12000rpm离心2min，将200uL上清转移至含100uL结合磁珠的1.5mL离心管中，涡旋混匀，室温静置孵育5min，短离，将离心管置于磁力架上至溶液澄清。所述75％乙醇溶液洗涤实施方式为：移除上清，向离心管中加入500uL75％乙醇溶液，剧烈Vortex，磁力架上30s，重复该步骤一次，即75％乙醇溶液洗涤步骤实施两次，短离，使用移液器移除底部残留乙醇溶液，室温静置2-5min，至磁珠不反光。所述含Nucleasefreewater低盐缓冲液洗脱方式为：加入20-50uL的含Nucleasefreewater低盐缓冲液，把离心管从磁力架取下，重悬磁珠，室温静置5min，将离心管置于磁力架上2min，用移液器吸取上清液，转移到新的1.5ml离心管中。对比例使用商品化的柱提法提取口腔拭子基因组DNA，与实施例提供的磁珠法提取口腔拭子基因组DNA方法相比，所述商品化的柱提法提取口腔拭子基因组DNA操作相对复杂，且不便于自动化操作，而且提取的口腔拭子基因组DNA浓度不够，纯度较低。本专利技术的工作原理为：样本(口腔拭子)通过在高效的裂解液和蛋白酶K的作用下裂解消化，将DNA释放到裂解液中，加入独特的磁珠(已含特定的反应体系)使其与DNA特异性结合。在一定比例的乙醇溶液中，将该体系中的蛋白质和其余杂质去除，只留下磁珠上结合的DNA，最后DNA在水溶液或低盐缓冲液中进行洗脱，得到的DNA可用于后续实验。所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，其包括：裂解液以及磁珠，其特征在于：所述裂解液组成成分为：20‑100mmol/L的盐酸胍、10‑50mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、50‑250mmol/L的KCl溶液、10‑100mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.1％‑1％SDS亲水基表面活性剂。

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，其包括：裂解液以及磁珠，其特征在于：所述裂解液组成成分为：20-100mmol/L的盐酸胍、10-50mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、50-250mmol/L的KCl溶液、10-100mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.1％-1％SDS亲水基表面活性剂。2.根据权利要求1所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述裂解液组成成分为：30-90mmol/L的盐酸胍、20-40mmol/L的PH为8.0的Tris缓冲溶液、60-240mmol/L的KCl溶液、20-90mmol/L的PH为8.0的EDTA螯合剂以及体积含量为0.2％-0.9％SDS亲水基表面活性剂。3.一种如权利要求1-2任一所述的磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法，其特征在于包括以下步骤：口腔拭子取样品、裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管、蛋白酶K消化、磁珠纯化、75％乙醇溶液洗涤以及含Nucleasefreewater的低盐缓冲液洗脱。4.根据权利要求3所述的一种磁珠法口腔拭子基因组DNA提取试剂盒的使用方法，其特征在于：所述口腔拭子取样品实施方式为：将在口腔内擦拭过的拭子或者棉签转置于1.5mL的离心管中，将拭子剪下或者使其脱落；所述裂解液洗脱拭子上细胞并将含细胞液体转移至离心管实施方式为：往装有口腔拭子样品中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：金安娜，高伙妮，包文静，龚伟，
申请(专利权)人：上海睿璟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31