本发明专利技术公开了香附薁酮用于制备抑制SIRT1基因表达治疗食管鳞状细胞癌的药物的用途。本发明专利技术发现，香附薁酮、香附子烯‑2,5,8‑三醇为有效的SIRT1基因表达抑制剂，香附薁酮、香附子烯‑2,5,8‑三醇通过抑制食管鳞状细胞癌中SIRT1基因表达有效抑制食管鳞状细胞癌的迁移和侵袭，可以开发成治疗食管鳞状细胞癌转移的药物。
Application of Cyperone in Preparing Drugs for Inhibiting SIRT1 Gene Expression and Treating Esophageal Squamous Cell Carcinoma
The invention discloses the use of acanthone for preparing drugs for inhibiting SIRT1 gene expression and treating esophageal squamous cell carcinoma. The invention discovers that cypermethrin, cypermethrin and cypermethrin are effective SIRT1 gene expression inhibitors. Cypermethrin, cypermethrin and cypermethrin can effectively inhibit the migration and invasion of esophageal squamous cell carcinoma by inhibiting the expression of SIRT1 gene in esophageal squamous cell carcinoma, and can be used to develop drugs for treating metastasis of esophageal squamous cell carcinoma.
【技术实现步骤摘要】
香附薁酮用于制备抑制SIRT1基因表达治疗食管鳞状细胞癌的药物的用途
本专利技术属于医药领域，涉及香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇用于制备抑制SIRT1基因表达治疗食管鳞状细胞癌的药物的用途。
技术介绍
食管鳞状细胞癌(esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC)是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，虽然近年来食管癌的诊疗水平不断提高，但其总生存期并没有显著改善，侵袭转移仍是食管癌预后差的重要原因之一。广藿香烯酮、香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇是存在于莎草中的化合物，化学结构如下。现有技术没有公开过广藿香烯酮、香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇与ESCC的关系。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇用于制备抑制SIRT1基因表达治疗食管鳞状细胞癌的药物的用途。本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：香附薁酮用于制备SIRT1基因表达抑制剂的医药用途。香附薁酮用于制备抑制食管鳞状细胞癌转移的药物的用途。香附薁酮用于制备治疗食管鳞状细胞癌的药物的医药用途。有益效果：本专利技术发现，香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇为有效的SIRT1基因表达抑制剂，香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇通过抑制食管鳞状细胞癌中SIRT1基因表达有效抑制食管鳞状细胞癌的迁移和侵袭，可以开发成治疗食管鳞状细胞癌转移的药物。附图说明图1为各组癌细胞中SIRT1mRNA/GAPDHmRNA比值；图2为各组癌细胞划痕愈合率；图3为各组癌细胞细胞侵袭穿膜数。具体实施方式下面结合实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。一、实验材料食管鳞状细胞癌TE-1细胞购自ATCC；胎牛血清、DMEM培养基购自Gibco公司广藿香烯酮、香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇自制，纯度在95％以上。二、实验方法1、食管鳞状细胞癌TE-1的培养常规复苏食管鳞状细胞癌TE-1，加入含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养，置于37℃、体积分数5％CO2培养箱中，观察细胞生长情况。培养48h后换液1次，以后每周换液2次，观察细胞生长至70％～80％融合后，以胰酶消化，以1:2传代。2、细胞分组及给药广藿香烯酮组：用含有5μM广藿香烯酮的完全培养基培养；香附薁酮组：用含有5μM香附薁酮的完全培养基培养；香附子烯-2,5,8-三醇组：用含有5μM香附子烯-2,5,8-三醇的完全培养基培养；空白对照组：使用完全培养基培养，不额外添加药物。3、Real-timeRT-PCR方法测定药物对癌细胞中SIRT1mRNA含量的影响取对数生长期的食管鳞状细胞癌TE-1细胞，PBS洗涤3遍，加入0.25％胰蛋白酶消化并离心，弃上清，采用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞，制成单细胞悬液，将细胞以2×105/孔的浓度接种于6孔板中，培养于37℃、体积分数5％CO2饱和湿度培养箱中，观察细胞融合达70％左右时弃去培养液，按照上述分组及给药方法继续培养48h。48h后，用0.25％胰酶消化、收集细胞，按RNeasyMiniKit说明书提取总RNA，凝胶电泳鉴定其完整性，分光光度法测定其纯度和量。根据RealtimePCR试剂盒说明书中的方法配置好各个样品的反应体系，在PCR仪上设置好反应程序进行PCR反应。以GAPDH为内参基因，用实时定量PCR相对定量法测定TE-1细胞中SIRT1mRNA的相对含量。RT-PCR引物序列委托上海生工设计合成，序列如下(5’→3’)：SIRT1上游引物：CCTGAGAATGGACCCCATCAGASIRT1下游引物：CACGTCCATACGACGTACACGGAPDH上游引物：TGGGGAAGGTGAAGGTCGGGAPDH下游引物：CTGGAAGATGGTGATGGGA4、划痕实验检测细胞迁移能力取对数生长期的食管鳞状细胞癌TE-1细胞，PBS洗涤3遍，加入0.25％胰蛋白酶消化并离心，弃上清，采用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞，制成单细胞悬液，按照上述分组及给药方法于37℃、体积分数5％CO2饱和湿度培养箱中培养48h。培养48h后，以0.25％胰蛋白酶消化并收集细胞，采用无血清DMEM培养基制备细胞悬液，以2×104个/孔的密度接种于6孔板，当细胞呈单层贴壁且接近100％融合时，使用10μl无菌移液器头在6孔板中划痕，清洗悬浮脱落细胞后，用无血清培养液，放置于37℃、5％CO2培养箱内，分别于划痕后0和48h在倒置光学显微镜下拍照，计算其划痕愈合率，实验重复3次。划痕愈合率＝(0h划痕距离－48h后划痕距离)÷0h划痕距离×100％。5、Transwell小室实验检测细胞侵袭能力取对数生长期的食管鳞状细胞癌TE-1细胞，PBS洗涤3遍，加入0.25％胰蛋白酶消化并离心，弃上清，采用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞，制成单细胞悬液，按照上述分组及给药方法于37℃、体积分数5％CO2饱和湿度培养箱中培养48h。培养48h后，以0.25％胰蛋白酶消化并收集细胞，采用无血清DMEM培养基制备细胞悬液，以2×105/孔的密度铺于Transwell小室上层腔室。然后，将含体积分数20％胎牛血清的DMEM培养基加入Transwell小室下层腔室。培养24h后，用棉签从Transwell小室上层腔室移走非侵袭的细胞，取Transwell小室，以PBS洗涤3遍，甲醇固定30min，采用0.1％结晶紫染色30min，于倒置光学显微镜观察计数。随机选取5个视野，实验重复3次。6、统计学分析采用SPSS16.0统计学软件，所有实验均重复3次，数据资料用均值±标准差表示，样本均数比较采用组间t检验。P<0.05为差异有显著性意义。三、实验结果1、药物干预对癌细胞中SIRT1基因表达的影响结果如表1和图1所示，与空白对照组相比，香附薁酮组、香附子烯-2,5,8-三醇组食管鳞状细胞癌TE-1细胞中SIRT1基因表达显著降低，而广藿香烯酮组与空白对照组相比无显著差异。该结果表明，香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇可以有效抑制食管鳞状细胞癌TE-1细胞中SIRT1基因的表达，广藿香烯酮则不具有这种抑制作用。表1各组癌细胞中SIRT1mRNA/GAPDHmRNA比值2、药物干预对癌细胞迁移能力的影响结果如表2和图2所示，与空白对照组相比，香附薁酮组、香附子烯-2,5,8-三醇组食管鳞状细胞癌TE-1细胞的迁移能力显著降低，而广藿香烯酮组与空白对照组相比无显著差异。该结果表明，香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇可以有效抑制食管鳞状细胞癌TE-1细胞的迁移，广藿香烯酮则不具有这种抑制作用。表2各组癌细胞划痕愈合率划痕愈合率(％)空白对照组83.96±5.23广藿香烯酮组81.49±4.85香附薁酮组56.75±4.47香附子烯-2,5,8-三醇组55.83±4.563、药物干预对癌细胞侵袭能力的影响结果如表3和图3所示，与空白对照组相比，香附薁酮组、香附子烯-2,5,8-三醇组食管鳞状细胞癌TE-1细胞的侵袭能力显著降低，而广藿香烯酮组与空白对照组相比无显著差异。该结果表明，香附薁酮、香附子烯-2,5,8-三醇可以有效抑制食管本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.香附薁酮用于制备SIRT1基因表达抑制剂的医药用途。
【技术特征摘要】
1.香附薁酮用于制备SIRT1基因表达抑制剂的医药用途。2.香附薁酮用于制备抑制食管...
【专利技术属性】
技术研发人员：张长林，杨佳，
申请(专利权)人：淮安培元基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。