一种治疗骨髓造血系统损伤后修复的药物技术方案

本发明专利技术提供了SphK2抑制剂ABC294640用于制备促进骨髓移植后造血系统和免疫系统重建的药物中的用途。ABC294640可以增加造血干数量和功能，同时增强其向多种血液细胞和血液免疫细胞分化能力，帮助病人快速渡过移植后的危险期。本发明专利技术为治疗骨髓移植病人的各种造血功能异常的并发症提供了新的药物来源。

A drug for repairing injured bone marrow hematopoietic system

The invention provides the use of SphK2 inhibitor ABC294640 for preparing drugs for promoting hematopoietic and immune system reconstruction after bone marrow transplantation. ABC294640 can increase the number and function of hematopoietic stem, and enhance its ability to differentiate into many kinds of blood cells and blood immune cells, so as to help patients quickly get through the dangerous period after transplantation. The invention provides a new drug source for treating various complications of hematopoietic dysfunction of bone marrow transplantation patients.

【技术实现步骤摘要】
一种治疗骨髓造血系统损伤后修复的药物
本专利技术属于医药领域，具体涉及ABC294640治疗骨髓移植病人造血和免疫系统功能恢复障碍疾病中的应用。
技术介绍
造血干细胞是存在于造血组织中的一群原始造血细胞，其主要作用是分化产生红细胞、血小板以及白细胞等各类血液免疫细胞，支持机体造血和免疫系统的更新。造血干细胞对于机体正常造血功能的维持和损伤修复有重要意义。原发性病变、环境中的射线、临床治疗中的化学药物和射线辐射均会对造血干细胞有严重的损伤，导致病人造血功能障碍、血象降低和白细胞下降免疫功能紊乱甚至生存率降低。因此，提高造血干细胞的造血功能对治疗造血功能障碍及其相关疾病至关重要，但是目前尚无有效针对造血干细胞功能增强的治疗干预手段。ABC294640，结构如式1所示，是鞘氨醇激酶2(SphK2)的抑制剂，可以抑制SphK2的功能减少鞘氨醇-1-磷酸(S1P)的产生。S1P是真核生物体的第二信使可以发挥多种重要生理功能，可促进癌组织生长和病理性炎症的发生。现在研究发现ABC294640对多种实体瘤包括胰腺肿瘤、肝癌、胆管癌和多发性骨肉瘤，有抑制肿瘤生长、减少免疫炎症反应的治疗作用，相关实验已经在美国开展临床二期实验，以色列生物制药公司RedHill报导药物YelivaTM(ABC294640)在一期临床实验中，证实该药物具有良好的安全性和耐受性，主要副作用是1-2级的疲惫感和恶心感。然而ABC294640对造血干细胞的作用还未见报道。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下问题和事实的发现而提出的：通常认为，SphK2基因(小鼠NCBI登录号:NP_001166032，人GenbankGeneID:56848)缺失会导致多种肿瘤细胞的生长缓慢、凋亡发生和成瘤能力减弱。专利技术人运用SphK2基因敲除小鼠模型首次发现，SphK2基因敲除小鼠造血干细胞在骨髓移植后造血重建速度加快，表现为骨髓移植后血小板和血液免疫细胞恢复加快。这说明SphK2基因是靶向造血干细胞治疗骨髓移植后造血功能障碍性疾病的有效治疗靶点。本专利技术还首次证明了SphK2抑制剂ABC294640在骨髓移植后造血功能障碍性疾病治疗中的应用。专利技术人发现，接受造血干细胞骨髓移植后小鼠腹腔注射ABC294640后可以使造血干细胞数量显著增加，并且血小板和血液免疫细胞恢复速度显著加快，对造血干细胞骨髓移植后的血象恢复有显著治疗作用。本专利技术将现有的SphK2抑制剂ABC294640这个小分子化合物发掘出新的药用价值，将其应用于造血干细胞骨髓移植后造血功能障碍的治疗。因此，本专利技术提供了：SphK2抑制剂在治疗造血干细胞骨髓移植后造血功能障碍中的应用，所述的疾病是由造血干细胞骨髓移植引发的。其中，SphK2抑制剂抑制SphK2基因的表达或者抑制SphK2蛋白的功能，所述的SphK2抑制剂优选是ABC294640。附图说明：图1.造血干细胞骨髓移植后，注射SphK2基因抑制剂ABC294640使得造血干细胞数量显著增加。图2.抑制剂ABC294640注射显著加快造血干细胞骨髓移植后血小板恢复速度。图3.抑制剂ABC294640注射显著加快造血干细胞骨髓移植后白细胞恢复速度。具体实施方式结合实施例对本专利技术的技术方案做进一步的说明。实施例1造血干细胞骨髓移植后，注射SphK2基因抑制剂ABC294640使得造血干细胞数量显著增加。实验用小鼠选用25只8周大C57小鼠(中山大学实验动物中心购买)，在无特定病原体的洁净(SPF)环境中饲养。取其中5只C57小鼠，将其脱颈处死，取其股骨与胫骨，用1毫升注射器冲出骨髓腔中骨髓，吹散为单细胞悬液，红细胞裂解液裂解2分钟去除红细胞，70um滤网过滤，得到骨髓单细胞悬液。将另外20只C57小鼠进行X射线辐射损伤，剂量为900cGy，随后每只辐射小鼠尾静脉注射40万骨髓单细胞悬液。接下来将已进行骨髓移植小鼠分为两组，每组各10只，每两天进行一次ABC294640的腹腔注射，对照组注射溶剂对照(1：1的生理盐水：PEG400)溶液。SphK2抑制剂ABC294640购置于Selleck公司，溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，最终用聚乙二醇400(PEG400)与生理盐水的混合液(1：1)稀释为终浓度10mg/kg。用药方案是第一天进行小鼠辐射损伤，第二天开始注射抑制剂与溶剂对照，随后每两天进行一次给药注射，共观察5周。第5周提取对照组与ABC294640处理组小鼠骨髓细胞，为计算小鼠中造血干细胞的数量，通过造血干细胞研究领域公认的分子标记物系统Lin-Sca-1+c-Kit+CD150+CD48-，结合流式细胞仪对造血干细胞数量进行统计定量。具体方法为取出200万骨髓细胞，加入1ulLin、Sca-1、c-Kit、CD150、CD48抗体组合，冰上孵育1h。随后加入1毫升PBS清洗细胞，500g离心5min，弃掉上清，加入300ulPBS，进行流式细胞仪计数分析，得到小鼠骨髓中造血干细胞数目。我们应用Graphpad6.0进行t检验分析，用P＜0.05标示差异的显著性。结果显示，造血干细胞骨髓移植后，ABC294640治疗组中造血干细胞数量显著增加，说明ABC294640可有效增强造血干细胞骨移植后的自我更新能力，帮助病人快速渡过移植后的危险期。(图1)。**P＜0.01。实施例2抑制剂ABC294640注射显著加快造血干细胞骨髓移植后血小板恢复速度。SphK2抑制剂的配制与实施例1一致，选用中山大学动物中心购买的20只8周大C57小鼠，分为两组，每组各10只，小鼠的骨髓移植与随后的给药处理都与实施例1相同，抑制剂ABC294640与溶剂对照的注射与实施例1相同，也是辐射后第二天开始注射，随后每两天注射一次，剂量为10mg/kg，一直注射到该实验结束。分别在第一周，第二周，第三周，第四周和第五周(第7、14、21、28、35天)小鼠尾静脉取血于抗凝管中，采用血常规检测外周血血小板数目。我们应用Graphpad6.0进行t检验分析，用P＜0.05标示差异的显著性。结果显示，ABC294640治疗组较溶剂对照组，外周血中血小板数量显著增加，说明ABC294640可有效增强造血干细胞骨移植后的分化能力，帮助病人快速渡过移植后的危险期。(图2)。*P＜0.05，***P＜0.001。实施例3抑制剂ABC294640注射显著加快造血干细胞骨髓移植后白细胞恢复速度。SphK2抑制剂的配制与实施例1一致，选用中山大学动物中心购买的20只8周大C57小鼠，分为两组，每组各10只，小鼠的骨髓移植与随后的给药处理都与实施例1相同，抑制剂ABC294640与溶剂对照的注射与实施例1相同，也是辐射后第二天开始注射，随后每两天注射一次，剂量为10mg/kg，一直注射到该实验结束。分别在第一周，第二周，第三周，第四周和第五周(第7、14、21、28、35天)小鼠尾静脉取血于抗凝管中，采用血常规检测外周血白细胞数目。我们应用Graphpad6.0进行t检验分析，用P＜0.05标示差异的显著性。结果显示，ABC294640治疗组较溶剂对照组，外周血中白细胞数量显著增加，说明ABC294640可有效增强造血干细胞骨移植后的分化能力，帮助病人快速渡过移植后的危险期。(图3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.SphK2抑制剂在制备骨髓移植后康复的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.SphK2抑制剂在制备骨髓移植后康复的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物用于治疗骨髓移植后造血功能障碍。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物用于提高造血干细胞自我更新和造血功能。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物用于增强造血干细胞骨移植后的分化能力。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵萌，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44