使用CLEVER-1、TNF-α和HLA-DR结合剂的免疫活化的诊断制造技术

能够在个体中结合CLEVER‑1的试剂可用于活化巨噬细胞以将它们的表型从M2巨噬细胞转换成M1巨噬细胞。本发明专利技术涉及用于利用巨噬细胞转换其表型的能力的方法。在一个方面，本发明专利技术涉及通过当在患者中施用能够结合CLEVER‑1的试剂时监测M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节来估计抗CLEVER‑1疗法的效力的方法，其中TNF‑α分泌或HLA‑DR表达增加指示M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用CLEVER-1、TNF-α和HLA-DR结合剂的免疫活化的诊断专利
本专利技术涉及用于免疫活化中的能够结合CLEVER-1的试剂和基于其的方法。专利技术背景本文中用于说明本专利技术的背景的出版物和其他材料，并且特别是为实践提供额外细节的情况，通过引用并入本文。CLEVER-1是WO03/057130中公开的蛋白，常见淋巴内皮和血管内皮受体-1，也称为Stabilin-1或Feel-1。CLEVER-1也已经由KzhyshkowskaJ.(2010),TheScientificWorldJOURNAL10,2039-2053综述。CLEVER-1在淋巴内皮细胞、某些血管内皮细胞中表达，而且也在巨噬细胞亚群中表达。CLEVER-1是一种多功能分子，其为2型巨噬细胞和人单核细胞的亚群赋予清除能力。巨噬细胞在肿瘤的生长或消退中起重要作用。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的机制公开于例如NoyR.和PollardJ.W.的出版物,“Tumour-AssociatedMacrophages:FromMechanismstoTherapy”,出版于Immunity41,July17,2014,p.49-61。M2巨噬细胞在人类癌症中占主导地位并刺激肿瘤生长，但这些促进肿瘤的巨噬细胞可以被调节成抑制肿瘤生长的巨噬细胞，也被称为M1巨噬细胞或促炎性巨噬细胞，其旨在减缓或停止癌症生长。因此，巨噬细胞表型的调节是各种癌症的免疫疗法中的有前途的方法。然而，已经注意到，用目前可用的旨在靶向TAM的治疗剂治疗癌症的尝试伴随着不期望的副作用，例如，巨噬细胞治疗方法可能具有全身毒性或矛盾地促进肿瘤生长，因为它们靶向所有巨噬细胞。专利技术概述已经发现，能够结合人CLEVER-1的试剂可用于活化巨噬细胞以将它们的表型从M2巨噬细胞转换成M1巨噬细胞。特别地，能够结合TAM上的CLEVR-1的试剂，诸如抗体及其片段、肽或大分子，可用于实现促进肿瘤的巨噬细胞(M2)调节为促炎性巨噬细胞(M1)。本专利技术涉及用于利用巨噬细胞以转换其表型的能力的方法。现在，已经发现，可以通过测量巨噬细胞/单核细胞TNF-α分泌和/或HLA-DR表达来监测M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节。因此，本专利技术提供了用于监测和/或估计患者中抗CLEVER-1疗法的效力的方法。本专利技术涉及通过在患者中施用能够结合CLEVER-1的试剂后监测M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节的发展来估计抗CLEVER-1疗法的效力的方法，其包括以下步骤：(a)从抽取自所述患者的血液样品获得外周血单核细胞(PBL)，(b)测量所述PBL的TNF-α分泌，和/或(c)测量CD14阳性PBL上的HLA-DR表达，和(e)将步骤(b)和(c)中测量的TNF-α分泌和/或HLA-DR表达的值与对照值进行比较用于估计抗CLEVER-1治疗的效力，其中对照值是在患者中施用能够结合CLEVER-1的试剂之前测量的值或在同一患者中在不同时间点进行的一次或多次先前测量的值，且其中TNF-α分泌或HLA-DR表达增加指示M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节。在一个方面，能够在个体中结合CLEVER-1的试剂适合用于通过将M2巨噬细胞调节成M1巨噬细胞来去除肿瘤或抗原免疫抑制。优选地，本专利技术涉及能够结合CLEVER-1分子上的表位的试剂，诸如抗体或其片段、肽或大分子，其中所述表位是不连续的且包含以下序列：人CLEVER-1的PFTVLVPSVSSFSSR(SEQIDNO:1)，和QEITVTFNQFTK(SEQIDNO:2)。巨噬细胞表型的调节增加T细胞活化且最终导致例如去除癌症起源的免疫抑制。因此，本发现提供了用于影响个体中的免疫系统的方法，并且特别可用于治疗癌症或预防癌转移，但不限于该方法。因此，能够结合TAM上的CLEVER-1、优选结合CLEVER-1分子上的特定序列的试剂，诸如抗体或其片段、肽或大分子，适合用于在个体中治疗癌症或预防癌转移，其中通过将M2巨噬细胞调节成M1巨噬细胞来去除恶性生长周围的免疫抑制。能够结合CLEVER-1、优选结合CLEVER-1分子上的特定序列的试剂，诸如抗体或其片段、肽或大分子，也适合用于治疗个体中的慢性感染，其中通过将M2巨噬细胞调节成M1巨噬细胞来去除针对感染抗原的免疫抑制。因此，当在患者中施用能够结合CLEVER-1的试剂用于治疗癌症或预防癌转移或治疗慢性感染时，可以特别应用根据本专利技术的用于估计抗CLEVER-1疗法的效力的方法。此外，能够结合CLEVER-1、优选结合CLEVER-1分子上的特定序列的试剂也适合用作疫苗的佐剂，其中通过将M2巨噬细胞调节成M1巨噬细胞来去除针对疫苗抗原的免疫抑制。在另一个方面，本专利技术涉及用于将M2巨噬细胞调节成M1巨噬细胞的方法，其包括向有需要的受试者施用本申请中公开的能够结合CLEVER-1、优选结合CLEVER-1分子上的特定序列的试剂。此外，本专利技术涉及所述用于将M2巨噬细胞调节成M1巨噬细胞的方法用于在个体中治疗癌症或预防癌转移或在个体中治疗慢性感染的用途。附图简述图1A显示测定来自CD14阳性细胞的HLA-DR表达的结果。用人IgG或靶向CLEVER-1的人源化抗体VH3/VK5处理细胞。用于测定来自CD14阳性细胞的HLA-DR表达的方法在实验部分中详细呈现。图1B显示使用TNF-αELISA试剂盒(Invitrogen)从培养基测量的可溶性TNF-α的结果。图2A显示在施用结合CLEVER-1的抗体后，同系E0771乳腺癌中的TAM再极化。通过流式细胞术，通过表达MHCII(在人HLA-DR中)的巨噬细胞群体的增加来测量TAM再极化。每个点代表一只小鼠中MHCII高CD11b+F4/80+TAM的百分比。图2B显示在施用结合CLEVER-1的抗体后，来自E0771同系乳腺癌的TAM上TNF-α的分泌增加。每个点代表从一只小鼠分离的TAM。专利技术的定义和详述术语“CLEVER-1”用于表示WO03/057130中公开的蛋白，常见淋巴内皮和血管内皮受体-1。术语“能够结合人CLEVER-1的试剂”是指能够结合人CLEVER-1的试剂，包括抗体及其片段或肽等。该试剂也可以是具有足够亲和力以结合本申请中定义的人CLEVER-1的特定表位的任何其他大分子。术语“抗体或其片段”以最广泛的含义使用，以覆盖能够在个体中结合CLEVER-1分子的抗体或其片段。特别地，应理解为包括嵌合、人源化或灵长类化的抗体以及抗体片段和单链抗体(例如Fab、Fv)，只要它们表现出期望的生物活性。WO03/057130中公开了特别优选的CLEVER-1拮抗剂单克隆抗体3-266(DSMACC2519)和3-372(DSMACC2520)，两者均在国际承认用于专利程序的目的的微生物保藏的布达佩斯条约的条款下，在2001年8月21日保藏在DSMZ-DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH,MascheroderWeg1b,D-38124Braunschweig。术语“患者”或“个体”是指人。术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”应理解为包括疾病的完全治愈以及所述疾病的改善或缓解。术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.通过当在患者中施用能够结合CLEVER‑1的试剂时监测M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节，来估计抗CLEVER‑1疗法的效力的方法，其包括以下步骤：(a) 从抽取自所述患者的血液样品获得外周血单核细胞(PBL)，(b) 测量所述PBL的TNF‑α分泌，和/或(c) 测量CD14阳性PBL上的HLA‑DR表达，和(e) 将步骤(b)和(c)中测量的TNF‑α分泌和/或HLA‑DR表达的值与对照值进行比较，用于估计抗CLEVER‑1治疗的效力，其中所述对照值是在患者中施用能够结合CLEVER‑1的试剂之前测量的值或在同一患者中在不同时间点进行的一次或多次先前测量的值，且其中TNF‑α分泌或HLA‑DR表达增加指示M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.18 FI 201653361.通过当在患者中施用能够结合CLEVER-1的试剂时监测M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节，来估计抗CLEVER-1疗法的效力的方法，其包括以下步骤：(a)从抽取自所述患者的血液样品获得外周血单核细胞(PBL)，(b)测量所述PBL的TNF-α分泌，和/或(c)测量CD14阳性PBL上的HLA-DR表达，和(e)将步骤(b)和(c)中测量的TNF-α分泌和/或HLA-DR表达的值与对照值进行比较，用于估计抗CLEVER-1治疗的效力，其中所述对照值是在患者中施用能够结合CLEVER-1的试剂之前测量的值或在同一患者中在不同时间点进行的一次或多次先前测量的值，且其中TNF-α分泌或HLA-DR表达增加指示M2巨噬细胞向M1巨噬细胞的调节。2.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：ML霍门，M维塔拉，M雅克恩，M马克西莫，
申请(专利权)人：法龙药品公司，
类型：发明
国别省市：芬兰,FI