一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用，涉及基因工程抗体技术领域。本发明专利技术公开的纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该纳米抗体具有与葡萄球菌蛋白A特异性结合的活性，其具有广阔的应用前景：(1)用于检测蛋白A残留及纯化，(2)作为蛋白纯化、检测的通用标签，用于蛋白的纯化，(3)用于蛋白A的B亚单位标签蛋白的纯化与检测；此外该纳米抗体还具有分子量小、亲和力高、结构和性能稳定等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用
本专利技术涉及纳米抗体
，具体而言，涉及一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体及核酸分子和应用。
技术介绍
葡萄球菌蛋白A(StaphylococalProteinA，SPA)是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。SPA包括A、B、C、D、E等5个同源结构域，每个结构域都有与大多数哺乳动物IgG的Fc区独立结合的能力。目前的耐碱性SPA主要集中在Bdomain(B结构域或称B亚单位)。B亚单位是含有58个氨基酸的多肽，一级结构中不含有二硫键，重折叠时间仅为3μs，具有较强的复性能力；荧光素、生物素等报告基团可精确交联或融合B亚单位特定定位置而不影响其亲和能力，因此可以作为一种蛋白标签，方便蛋白相互作用的研究。然而市面上还未有针对葡萄球菌蛋白A的B亚单位的亲和配体，虽然大多数哺乳动物的IgGFC端可以作为B亚单位的亲和配体，但是两者亲和力低，Fc耐逆性弱。其次蛋白A存在于生物制药(如抗体、重组蛋白、疫苗等)的纯化过程中常用的一些填料中。尽管葡萄球菌蛋白A是以共价键的形式连接在填料里，但葡萄球菌蛋白A还是很容易通过色谱洗脱生物药的过程中被一起浸出。生物药中被葡萄球菌蛋白A污染了则会对药物产生很多的负面影响，为了减少葡萄球菌蛋白A对生物药的影响，因此，在生物制药纯化过程中，葡萄球菌蛋白A的含量是很关键的一个参数，需要建立快速灵敏的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体。本专利技术的另一目的在于提供一种分离的核酸分子。本专利技术的另一目的在于提供一种载体。本专利技术的另一目的在于提供一种宿主细胞。本专利技术的另一目的在于提供一种偶联物。本专利技术的另一目的在于提供一种制备上述纳米抗体的方法。本专利技术的另一目的在于提供一种检测葡萄球菌蛋白A的试剂。本专利技术的另一目的在于提供上述的纳米抗体的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种通用的蛋白纯化与检测的标签。本专利技术是这样实现的：羊驼血清中存在的一种天然缺失轻链的抗体，即重链抗体(heavy-chainantibody，hcAb)。单域重链抗体(singledomainantibody，sdAb)是指仅由重链抗体可变区(Variableregion)组成的基因工程抗体，又称为VHH抗体(variabledomainofheavychainofheavy-chainantibody，VHHantibody)或纳米抗体(Nanobody，Nb)。与传统抗体相比，单域抗体具有分子量小，稳定性高，水溶性好等优点，其次天然缺失轻链，洗脱时不会像传统抗体那样造成轻链脱落造成二次污染，因此可作为葡萄球菌蛋白A的新一代的亲和纯化配体，用于蛋白的纯化，蛋白A的检测等领域。抗B亚单位的纳米抗体具有高亲和力，高特异性，抗逆行强，非常适合Bdomin的亲和配体。但目前尚缺乏针对葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体。本专利技术提供了一种纳米抗体，其来源自羊驼血清，是一种单域抗体，具有分子量小，稳定性高，水溶性好等优点。该纳米抗体可结合葡萄球菌蛋白A的B亚单位，其可作为葡萄球菌蛋白A的新一代的亲和纯化配体，用于蛋白例如葡萄球菌蛋白A的纯化、检测等领域中。本专利技术的一方面涉及一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，本专利技术的纳米抗体的氨基酸序列并不限于SEQIDNO.1所示的序列，其还可以是在SEQIDNO.1所示的序列上经过一个或多个氨基酸残基的替换和/或删除得到的，且具有与SEQIDNO.1相同生物活性例如与葡萄球菌蛋白A特异性结合的活性或者是活性加强或者活性减弱的衍生序列。这类衍生序列也属于本专利技术的保护范围。本专利技术的另一方面涉及一种分离的核酸分子，该核酸分子编码上述的抗葡萄球菌蛋白A的纳米抗体。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。对本领域技术人员而言，根据密码子的简并性，容易在上述核苷酸序列的基础进行一个或多个核苷酸的替换，得到相应的衍生序列，以使编码出本专利技术提供的SEQIDNO.1所示的纳米抗体。因此，在上述核苷酸序列的基础进行一个或多个核苷酸的替换，得到相应的编码出本专利技术提供的纳米抗体的衍生的核苷酸序列也属于本专利技术的保护范围。本专利技术的另一方面涉及一种载体，其含有上述的分离的核酸分子。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述载体包括但不限于克隆载体和表达载体。本专利技术的另一方面涉及一种宿主细胞，其含有上述的载体。本专利技术的另一方面涉及一种偶联物，该偶联物含有上述的纳米抗体。本专利技术的另一方面涉及一种制备上述的纳米抗体的方法，其包括：培养上述的宿主细胞。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法还包括：从细胞培养物中纯化得到上述抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体。在本专利技术公开了抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体的氨基酸序列的前提下，本领域技术人员容易通过基因工程技术、化学合成等方法得到本专利技术的抗葡萄球菌蛋白A纳米抗体，其相应的制备方法均属于本专利技术的保护范围。本专利技术的另一方面涉及一种检测葡萄球菌蛋白A的试剂，其包括上述的纳米抗体，或者上述的偶联物。本专利技术的另一方面涉及上述的抗葡萄球菌蛋白A的纳米抗体在检测葡萄球菌中的应用。本专利技术的再一方面涉及上述的抗葡萄球菌蛋白A的纳米抗体在以葡萄球菌蛋白A的B亚单位为靶点检测葡萄球菌中的应用。本专利技术的再一方面涉及上述的抗葡萄球菌蛋白A的纳米抗体作为蛋白的通用标签，用于蛋白的纯化，免疫共沉淀或亲和力检测中的应用。本专利技术的再一方面涉及上述的抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体作为B亚单位的亲和纯化配体，用于B亚单位标签蛋白的纯化与检测中应用。本专利技术的再一方面涉及上述的纳米抗体作为亲和配体在纯化葡萄球菌蛋白A的B亚单位中应用。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供的抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体具有与葡萄球菌蛋白A特异性结合的活性，尤其是与葡萄球菌蛋白A的B亚单位结合的活性，其具有广阔的应用前景，例如：(1)用于检测蛋白A残留及纯化，(2)作为蛋白纯化、检测的通用标签，用于蛋白的纯化和检测，(3)用于蛋白A的B亚单位标签蛋白的纯化与检测；此外该纳米抗体还具有分子量小、亲和力高、结构和性能稳定等特点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1中的洗脱液的电泳结果。图2为本专利技术实施例4中的West-blot检测结果。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体的筛选1免疫：取健康成年羊驼，将葡萄球菌蛋白A的B亚单位与佐剂混合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种抗葡萄球菌蛋白A的B亚单位的纳米抗体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的的纳米抗体。3.根据权利要求2所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。4.一种载体，其特征在于，其含有权利要求2或3所述的分离的核酸分子。5.一种偶联物，其特征在于，其含有权利要求1所述的纳米抗体。6.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈波，罗紫豪，
申请(专利权)人：成都阿帕克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51