毛竹PeVQ28蛋白及其编码基因与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种毛竹PeVQ28蛋白及其编码基因与应用。所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因序列（CDS）如SEQID No.2所示，所述毛竹PeVQ28基因的cDNA序列全长如SEQID No.3所示。本发明专利技术提供的PeVQ28基因在不同程度的盐胁迫诱导下，均有高表达。通过农杆菌介导的花序浸染法将PeVQ28基因表达载体转入野生型拟南芥中，结果显示转基因野生型拟南芥的抗盐性得到了明显的提高，说明PeVQ28基因能够提高转基因拟南芥的抗盐性。利用毛竹PeVQ28基因表达载体获得的植物材料，对外界盐胁迫环境具有一定的适应性，具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
毛竹PeVQ28蛋白及其编码基因与应用
本专利技术涉及植物分子生物学领域，具体涉及一种毛竹PeVQ28蛋白及其编码基因与应用。
技术介绍
中国竹子的种类十分丰富，据统计约39属、500多种，无论是竹子的类别源、种植面积还是竹林的蓄积量和产量都是位于世界第一位，可以说中国是世界上最主要的生产竹材的国家。毛竹也是一种森林资源，在我国南方地区占据着着十分重要的地位，由于其生长速度快且达到可用标准的周期短，产量也十分可观，可以代替一些慢生森林资源类型，随着科学技术的发展，对毛竹使用范围更加地广泛。由于毛竹材性特质，在建筑上的使用逐渐吸引了风景区、农家乐经营者，造型独特，简朴大方且低能环保；竹制的扫把、椅子、汤勺、玩具等竹艺制品也逐渐走进人们的日常生活中；毛竹中纤维素含量高决定其可用作于造纸原材料。同时在食用方面，不仅是竹笋不可以作为绿色食材食用，而且一些工厂加工的绿色饮品或是保健品中组成成分是从竹叶中提取或从竹材加工废料中水解提炼。除经济价值外，毛竹林还具有重要的生态方面的价值，如涵养水源、保育土壤、净化环境等。。VQ-motif蛋白是一类植物特异性蛋白，由于与WRKY转录因子相互作用而逐渐引起关注。通过对VQ蛋白家族在拟南芥中的研究，VQ蛋白家族参与植物多方面的功能调控，主要参与植物的盐胁迫反应。在拟南芥中研究发现AtCaMBP25(AtVQ15)在拟南芥种子萌发和生长发育早期可负调渗透胁迫，在NaCl和渗透胁迫条件下，转基因株系在种子萌发和生长发育表现出高度敏感。同样地，经过研究发现AtVQ9过表达植株在NaCl处理下条件下，无论是种子的萌发还是拟南芥苗的生长状况都有受到抑制的表现。毛竹的生长环境对水分、气候及土壤的要求较高，适合生长在水分充足、气候温暖及微酸性或中性壤土环境中。近年来，随着全球气温的不断升高及气候的不断恶化，致使植物在生长过程中会受到来自环境的各种不利条件的伤害，土壤盐渍化是当今世界普遍关注的问题。盐胁迫是植物生长发育的主要限制因子之一。毛竹对盐胁迫是敏感的，它们在盐碱地生长时，由于受到盐碱的胁迫作用，生长缓慢，往往叶片变黄、死亡、脱落，严重影响光合作用，有时甚至整株植物枯萎死亡。盐胁迫对毛竹造成的负向效应主要表现在：钾、钙、磷、氮摄入不足造成的营养胁迫；钠离子、氯离子以及硫酸盐的累积造成的离子毒害效应；土壤中高浓度溶质造成的渗透胁迫；活性氧积累造成生物膜、蛋白和核酸的破坏，即氧化胁迫。高盐等环境胁迫已极大的限制了毛竹的生长状况，因此，认识植物对盐胁迫的反应机制，提高植物的抗盐性，培育出一批耐盐的毛竹新种质，对提高毛竹的产量，促进林产业稳定发展，增加国民的经济收入具有重要的意义。目前已公布的VQ基因及其同源基因，多来源于模式植物或者草本植物，这些植物多为一年生植物，而在毛竹中关于VQ基因的功能还尚未报道。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种毛竹PeVQ28蛋白及其编码基因与应用。为了实现本专利技术目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术的一种毛竹PeVQ28蛋白，所述的毛竹PeVQ28蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。本专利技术的一种编码所述的毛竹PeVQ28蛋白的编码基因序列，其特征在于：所述的毛竹PeVQ28蛋白的核酸序列如SEQIDNo.2所示。本专利技术的含有所述编码基因序列的载体。本专利技术的所述载体的构建方法，包括如下步骤:将两端包含酶切位点的毛竹PeVQ28蛋白编码基因序列构建到pEASYT1simpleCloningVector载体上，转入大肠杆菌感受态细胞TransT1内，得到T1-PeVQ28重组质粒，双酶切T1-PeVQ28重组质粒和pCAMBIA1301a质粒，连接后，转入大肠杆菌感受态细胞，提取质粒后，获得表达载体pCAMBIA1301a-PeVQ28。本专利技术的含有所述载体的工程菌。本专利技术的用于克隆所述编码基因序列的引物对，其特征在于：所述引物对包括上游引物和下游引物，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示。本专利技术的一种毛竹PeVQ28基因，其特征在于：所述的毛竹PeVQ28基因cDNA全长的核酸序列如SEQIDNo.3所示。本专利技术所述的毛竹PeVQ28基因在改造植物抗盐中的应用。进一步地，通过农杆菌介导的花序浸染法将所述基因或所述的编码基因序列转入植物中。有益效果：本专利技术首次提供了毛竹抗盐相关的PeVQ28蛋白及其编码基因与应用。通过农杆菌介导的花序浸染法将PeVQ28基因表达载体转入野生型拟南芥中，结果显示过表达拟南芥植株的抗盐性明显增强，说明PeVQ28基因能够提高转基因拟南芥的抗盐性。利用毛竹PeVQ28基因表达载体获得的植物材料，对外界高盐环境具有一定的适应性，具有很好的应用前景。附图说明图1是本专利技术所述PeVQ28基因所编码的蛋白的氨基酸序列和结构域划分图；图2是本专利技术实施例2毛竹叶片总RNA的电泳图；M：Trans2KDNAMarker；1：毛竹叶片总RNA。图3本专利技术实施例4毛竹PeVQ28基因的植物转基因载体pCAMBI1301a-PeVQ28构建示意图；图4是本专利技术实施例5转基因拟南芥和野生型拟南芥在盐处理前后的表型图；A:转基因拟南芥和野生型拟南芥在盐处理前后的表型图；B：转基因拟南芥和野生型拟南芥在盐处理10天后的存活率；C-H：转基因拟南芥和野生型拟南芥在盐处理前后的PRO、RWC、SOD、POD、CAT以及MDA的含量。WT：野生型拟南芥；L1、L3、L10：转基因过表达株系。具体实施方式本专利技术结合附图和具体实施例作进一步说明。应该理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本专利技术范围。实施例中所使用的试剂主要包括分子生物学实验试剂和试剂盒等，均可通过商业途径获得，具体包括：RNA提取试剂盒购于Roche生物科技有限公司；反转录试剂盒(First-StrandcDNASynthesisKit)购于Promega公司；SYBRGreenMix购于美国ABI公司；Trizol购于上海英俊生物技术有限公司琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、质粒快速小提试剂盒购于Axygen；pEASYT1simpleCloningVector、Taq酶、TransT1感受态及相关的试剂盒购于北京全式金公司；限制性内切酶SmaI和SalI及DNAmarker均购于TaKaRa(宝生物工程(大连))有限公司；测序工作均由华大基因科技股份有限公司完成。本专利技术实施例中所提供的方法如果没有特殊说明均为常规方法。实施例1一个毛竹PeVQ28基因编码的蛋白序列使用primers软件，对毛竹PeVQ28基因的cDNA序列全长，进行蛋白序列翻译(SEQIDNo.1)(图1)。实施例2毛竹抗盐相关基因PeVQ28诱导表达模式分析(一)胁迫处理和总RNA提取用100mM氯化钠溶液，150mM氯化钠溶液和200mM氯化钠溶液分别浇灌一年生的毛竹幼苗，保持其他营养条件不变。分别用剪刀(事先用75％酒精擦净消毒)取各种处理后的0、1、3、6、12及24h的毛竹叶片，装入含有RNA保护液的2mL的dof管中保存备用，不同时间段及样品植株重复3次。Trizol法提取总RNA，详细步骤如下：(1)从RNA保本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毛竹PeVQ28蛋白，其特征在于：所述的毛竹PeVQ28蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种毛竹PeVQ28蛋白，其特征在于：所述的毛竹PeVQ28蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.一种编码权利要求1所述的毛竹PeVQ28蛋白的编码基因序列，其特征在于：所述的毛竹PeVQ28蛋白的核酸序列如SEQIDNo.2所示。3.含有权利要求2所述编码基因序列的载体。4.权利要求3所述载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤:将两端包含酶切位点的毛竹PeVQ28蛋白编码基因序列构建到pEASYT1simpleCloningVector载体上，转入大肠杆菌感受态细胞TransT1内，得到T1-PeVQ28重组质粒，双酶切T1-PeVQ28重组质粒和pCAMBIA1301a质粒，连接后，转入大肠杆菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：项艳，程欣然，王玉娇，熊瑞，吴敏，严涵薇，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34