一种类胡萝卜素降解酶制造技术

本发明专利技术涉及一种类胡萝卜素降解酶，属于微生物发酵技术领域。所述类胡萝卜素降解酶的制备方法包括在液体培养基接种2％库特氏杆菌种子液，30℃‑35℃，pH＝3.0‑3.5，140r/min发酵8‑10h得发酵液；将发酵液于4℃，10000r/min离心100‑150min，取上清液，得类胡萝卜素降解酶粗酶液。所述库特氏杆菌为(Kurthia sp)NXUGQ15，保藏编号为CCTCC NO：M2017524。本发明专利技术的保藏菌种所产类胡萝卜素降解酶，粗酶液的酶活8.87U/mL，用其处理枸杞渣或枸杞浆，能够增加枸杞酒的挥发香气成分，改善枸杞酒的品质。

【技术实现步骤摘要】
一种类胡萝卜素降解酶
本专利技术涉及一种类胡萝卜素降解酶，属于微生物发酵

技术介绍
众所周知，枸杞具有滋补肝肾，益精明目，治疗腰膝酸痛，眩晕耳鸣，内热消渴，血虚萎黄的功效，因此，人们将枸杞制成枸杞酒做为保健酒。目前枸杞酒制法有浸泡法和发酵法两种。浸泡法一般将整粒枸杞用白酒或黄酒泡制而成，酒度较高，且营养成分并不能充分溶出。发酵法枸杞酒因为不涉及高温加热过程，也较少有氧气参与，不但基本保持了枸杞中的天然营养的成分，而且经过发酵更加有利于人体吸收，是一种非常好的营养保健型果酒。但是，发酵型枸杞酒由于受到原料和加工工艺等因素的影响，质量参差不齐，产品的口感香气普遍不足，还有待于提高。公开号:101323823的专利技术《枸杞酒的酿造方法》公开了一种枸杞酒的酿造方法，将破碎去籽的枸杞及熟化后的淀粉质原料中加入糖化发酵酒曲和酒母，在发酵罐中进行发酵；然后将发酵好的醪液进行压榨，酒汁经澄清、杀菌、陈酿、勾兑和过滤后装瓶。采用了淀粉质原料作为发酵的碳源，酿制纯发酵枸杞酒，主要解决的问题为：最大限度地降低生产成本。公开号:1513970的专利技术《一种发酵枸杞葡萄酒及酿制方法》公开了一种发酵枸杞酒和发酵葡萄酒勾兑配制方法，这种方法以枸杞和葡萄为原料分开发酵，然后进行配制调配的工艺方法。是以鲜枸杞或干枸杞破碎制成果浆(果汁)发酵制成发酵枸杞酒；白葡萄或红葡萄经破碎制成果汁(果浆)发酵酿制成发酵葡萄酒。发酵枸杞酒与发酵葡萄酒按照(1％-99％)：(99％-1％)的比例勾兑配比后调成不同类型的糖度，经过热处理、冷处理、过滤、装瓶、杀菌，制成发酵枸杞葡萄酒。此方法酿制的发酵枸杞葡萄酒，枸杞葡萄香气和谐，口感丰满协调，枸杞味浓郁，典型性突出。公开号:1104248的专利技术《一种枸杞酒的酿制方法》公开了一种枸杞酒的酿制方法，该方法包括原料经精选、压榨、发酵、过滤、灭菌，其特征在于鲜枸杞经精选、压榨成枸杞汁后，加入亚硫酸钠硫化后，再加入酵母，加葡萄糖至糖度为22°BX后，投入压力罐内密封发酵，其发酵温度为(20-25)℃，时间为5-8天后，再次添加葡萄糖至糖度为18°BX，再次进行密封发酵，其发酵温度为(15-20)℃，当发酵至罐底沉淀有果渣及酵母、酒液初步澄清，糖度为5°BX以下后，对罐内枸杞液果渣、酵母混合物进行搅拌、加热后，再进行冷却，将枸杞混合物过滤，在过滤所得的枸杞液中加入适量的亚硫酸钠再加入蜂蜜澄清，再次过滤，将过滤液贮于桶内，在温度为10℃左右下贮存2-3个月换桶一次后进行灌装巴氏灭菌，即酿制成枸杞酒，将上述酿制的枸杞液投入一定量的枸杞浸泡液，配制成不同酒度的枸杞酒。公开号:1782060的专利技术《一种枸杞酒的酿制方法》公开的枸杞酒的酿制方法：鲜枸杞或干枸杞经分选、清洗，若是干枸杞还要用2-5倍于其重量的水浸泡12-24小时，然后破碎成枸杞浆，用95％(v/v)的脱臭酒精调整酒精度至20-25％(v/v)，浸泡10-20天，浸泡期间每天打循环1-4次，完毕后分离出浸泡酒；分离后的鲜枸杞果渣加0.5-2倍鲜枸杞重量的软水；干枸杞果渣加2-5倍干枸杞重量的软水，用蔗糖调整糖度至210-230g/L，用柠檬酸或酒石酸调整总酸至6.0-8.0g/L，调SO2至80-100mg/L，加果胶酶0.2-0.5g/L，添加干酵母0.15-0.3g/L，控制温度在18-30℃发酵，时间5-7天，当比重降至1000g/L以下时，分析残糖＜4g/L分离出发酵酒；将浸泡酒和发酵酒混合，再经陈酿、调配、下胶、过滤、除菌、装瓶、包装即为成品。公开号:1265420的专利技术《一种枸杞酒的酿制方法》公开的枸杞酒的酿制方法：将分选好的枸杞置入柠檬酸及亚硫酸钠混合液中热烫，热烫后的枸杞先经破碎后，再加入软水浸泡，枸杞和软水以7:3(体积比)装罐，用二氧化硫和果胶酶处理，调整成份后静置，接种发酵，经前发酵和后发酵后，分离出发酵酒贮存待用，经分选破碎的枸杞置入95％脱臭食用酒精中浸泡30天左右分离，制得浸泡酒，将浸泡酒和发酵酒按1:4(体积比)勾兑调配，贮存一段时间后，经下胶过滤，除菌过滤后装瓶。公开号:1077744的专利技术《枸杞发酵酒制备方法》公开的枸杞发酵酒的制备方法：将枸杞经去杂冲洗，热浸提，破碎，过滤，加辅料，灭菌，冷却，前期发酵，净化处理，过滤，陈酿，制坛，调配，过滤等工序而制得枸杞发酵酒，具体工艺为：a：将枸杞果去杂冲洗，用65℃-75℃热水浸提1.5-2.5小时，粉碎过滤后将其剩余物再次放入65℃-75℃热水中，浸提0.8-1.2小时后进行第二次过滤，b：将a项二次过滤后的剩余物粉碎，经再次过滤后弃其滤渣，c：在b项的滤液中加入20％白糖辅料，d：将c项制得的溶液在95℃-100℃温度下灭菌20-25秒，冷却到65℃-70℃，放入酒坛，继续冷却到30℃-32℃，e：在28℃-30℃条件下将d项制得的溶液进行前期发酵6-8天，再在室温条件下进行后期发酵9-11天，f：将e项制得的溶液进行净化处理，加入明胶(按10mL溶液0.008g明胶的比例加入)，下胶14-16天过滤，g：将f项制得的溶液陈酿3-5个月，倒坛，在50℃-60℃条件下放置10-20天，在零下2℃-44℃条件下放置5-7天，过滤，滤液存放1个月，h：将g项制得的滤液加入调味剂及滋补药进行调配，i：将h项制得的溶液过滤，灭菌，即为成品。由现有技术技术的公开我们发现：在枸杞酒生产中常用的酶仅为果胶酶，目的主要为酶解果肉以提高出汁率，最终提高出酒率，其他酶在发酵枸杞酒中的应用并未见报道。而枸杞中含量非常丰富的类胡萝卜素，经过微生物发酵后，由于类胡萝卜素不溶于水，很大一部分在发酵结束果渣分离时被除去，一部分在酿造过程中被降解而损失，最终枸杞酒中类胡萝卜素含量并不高。宁夏枸杞历史悠久的传统品牌、文化优势历史己有数百年，中宁县是国务院命名的“中国枸杞之乡”，宁夏枸杞被《中国药典》列为药食品同源食品，这是其他任何省区都无法比拟的。2017年国家1号文件明确提出，“加强新食品原料、药食同源食品开发和应用”“加强现代生物和营养强化技术研究，挖掘开发具有保健的功能的食品”，为了响应国家号召，开发功能保健食品，发展宁夏优势特色枸杞资源，提升枸杞保健酒的品质，找到一种类胡萝卜素降解酶的制备方法，是本专利技术所要解决的技术问题。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种类胡萝卜素降解酶，采用分离得到的一株类胡萝卜素降解菌，制备类胡萝卜素降解酶，利用类胡萝卜素不稳定，受光、氧、热、生物酶等易降解产生降异戊二烯类香气化合物的特性，使其产生大量的C9-、C10-、C13-和C15-降异戊二烯类化合物(norisoprenoids)，这些物质是具有挥发性的芳香化合物，这些化合物因为感官阈值较低，对食品具有积极的贡献。枸杞富含的类胡萝卜素主要包括β-胡萝卜素、玉米黄素、玉米黄素双棕榈酸酯，且其中以玉米黄素双棕榈酸酯最多，约为类胡萝卜素总量的77.5％。但是在酿造酒时，由于不溶于水，大部分流失于枸杞渣中，造成很大的浪费。本专利技术的类胡萝卜素降解酶能够降解枸杞渣或枸杞浆中不溶于水的类胡萝卜素，使所含大量的类胡萝卜素降解，使枸杞酒中产生大量的芳香化合物，起到增加酒香气的作用，提高枸杞酒的品质。当然，本专利技术的类胡萝卜素不限本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类胡萝卜素降解酶，其特征在于，由包括如下步骤的方法制备：①库特氏杆菌液的制备液体培养基(g/L)：硝酸钠3、磷酸氢二钾1、硫酸镁0.5、氯化钾0.5、硫酸铁0.01、蔗糖30、YNB合成培养基6.7、β‑胡萝卜素15；pH＝3.2；②扩大培养取斜面试管库特氏杆菌(Kurthia sp)NXUGQ15 1环→10mL液体培养基35‑37℃、130r/min下培养10‑12h→100mL液体培养基35‑37℃、130r/min下培养10‑12h→3000mL液体培养基35‑37℃、130r/min下培养10‑12h→菌液浓度达到106cfu/ml→库特氏杆菌种子液；③发酵液体培养基→接种库特氏杆菌种子液2％→30℃‑35℃，pH＝3.0‑3.5，140r/min发酵8‑10h→发酵液；④类胡萝卜素降解酶制备发酵液→4℃，10000r/min离心100‑150min→取上清液→类胡萝卜素降解酶粗酶液。

【技术特征摘要】
1.一种类胡萝卜素降解酶，其特征在于，由包括如下步骤的方法制备：①库特氏杆菌液的制备液体培养基(g/L)：硝酸钠3、磷酸氢二钾1、硫酸镁0.5、氯化钾0.5、硫酸铁0.01、蔗糖30、YNB合成培养基6.7、β-胡萝卜素15；pH＝3.2；②扩大培养取斜面试管库特氏杆菌(Kurthiasp)NXUGQ151环→10mL液体培养基35-37℃、130r/min下培养10-12h→100mL液体培养基35-37℃、130r/min下培养10-12h→3000mL液体培养基35-37℃、130r/min下培养10-12h→菌液浓度达到106cfu/ml→库特氏杆菌种子液；③发酵液体培养基→接种库特氏杆菌种子液2％→30℃-35℃，pH＝3.0-3.5，140r/min发酵8-10h→发酵液；④类胡萝卜素降解酶制备发酵液→4℃，10000r/min离心100-150min→取上清液→类胡萝卜素降解酶粗酶液。2.根据权利要求1所述的类胡萝卜素降解酶，其特征在于，所述库特氏杆菌为(Kurthiasp)NXUGQ15，保藏编号为CCTCCNO：M2017524。3.根据权利要求2所述的类胡萝卜素降解酶，其特征在于，制备方法步骤还包括：将粗酶液经冷冻、干燥、浓缩并利用透析法纯化。4.根据权利要求3所述的类胡萝卜素降解酶，其特征在于，由包括如下步骤的方法制备：①库特氏杆菌液的制备液体培养基(g/L)：硝酸钠3、磷酸氢二钾1、硫酸镁0.5、氯化钾0.5、硫酸铁0.01、蔗糖30、YNB合成培养基6.7、β-胡萝卜素15；pH＝3.2；②扩大培养取斜面试管库特氏杆菌(Kurthiasp)NXUGQ151环→10mL液体培养基35-37℃、130r/min下培养11h→100mL液体培养基35-37℃、130r/min下培养11h→3000mL液体培养基35-37℃、130r/min下培养11h→菌液浓度达到106cfu/ml→库特氏杆菌种子液；③发酵液体培养基→接种库特氏杆菌种子液2％→33℃，pH＝3.3，140r/min发酵9h→发酵液；④类胡萝卜素降解酶制备发酵液→4℃，1000...

【专利技术属性】
技术研发人员：张惠玲，李金鹏，赵璐，郝向峰，张金宏，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：宁夏,64