老年CAR-T细胞及其用途制造技术

表达T细胞的嵌合抗原受体(CAR)是有前景的实体肿瘤免疫疗法形式。来自老年供体的CAR‑T细胞(gCART)在本文中显示相对于来自年轻供体的CAR‑T(yCAR‑T)功能受损。与gCAR‑T相比，在yCAR‑T细胞中观察到更高的转导效率和改善的细胞扩增。yCAR‑T显示pERK、pAKT、pSTAT3和pSTAT5的增殖和信号传导激活水平显著增加。此外，yCAR‑T含有较高比例的CD4和CD8效应记忆细胞(EM)，已知它们具有增强的细胞溶解能力。根据CD4和CD8EM的数量较高，与gCAR‑T相比，yCAR‑T表现出更高水平的CEA特异性细胞毒性，其中在IL15处理的yCAR‑T细胞中观察到最大细胞毒性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】老年CAR-T细胞及其用途
本文描述的主题涉及用于提高用重组病毒转导离体外周血单核细胞(PBMC)的效率的方法，所述重组病毒含有编码嵌合抗原受体(CAR)构建体的重组DNA分子。可以从患有如癌症的疾病的老年受试者收获PBMC，用感兴趣的CAR转导并将其返回给予受试者以治疗疾病。
技术介绍
癌症是老年人的疾病，工业化国家的中位年龄为70岁(Gloeckler等人,2003,Oncologist,8:541-552)。老年人积累了更多与环境致癌物相关的遗传损伤，并且免疫功能降低或具有“免疫衰老”(Gloeckler等人,2003,Oncologist,8:541-552)。免疫衰老的特征在于初始T细胞区室的收缩和CD4+和CD8+T细胞功能缺陷，其损害抗肿瘤免疫力(Naylor等人,2005,JImmunol,174:7446-7452)。因此，癌症免疫疗法必须考虑与年龄相关的免疫变化。主要通过开发CAR-T细胞平台，在过继性T细胞疗法(ACT)领域取得了重大进展。可以通过遗传工程改造自体T细胞以通过引入编码合成嵌合抗原受体(CAR)的基因来表达赋予肿瘤抗原精确特异性的蛋白质。在最近的I期HITM试验和正在进行的HITM-SIRIb期研究中，我们测试了正在测试癌胚抗原(CEA)特异性CAR-T细胞的安全性。CEA在几种类型的癌症中表达，包括但不限于结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌和肺癌。输注具有肿瘤抗原特异性的CAR-T细胞为患者提供即时的高度特异性免疫应答，与试图在宿主内产生免疫力的疫苗形成对比。在老年患者中，存在从初始到记忆效应T细胞群的主要表型转变，其可使ACT不如治疗年轻患者有效(Kovaiou等人,2005,IntImmunol17:1359-1366)。已知白细胞介素-2(IL2)和白细胞介素-15(IL15)通过共同的γ链(γc)和IL2β链受体发出信号，并且是T细胞增殖和分化的关键但功能上不同的调节剂。已知IL2和IL15都激活Jak/Stat、PI3k/Akt和Mek/Erk信号传导途径(Marzec等人,2008,CancerRes,68:1083-1091)，但它们具有不同的免疫治疗效果。IL15对产生记忆和效应T细胞具有优异的作用，因此使用外源IL15代替IL2进行免疫治疗存在增长的趋势(Waldmann,2006,NatRevImmunol,6:595-601)。研究了从老年供体产生的CAR-T细胞的抗肿瘤活性，并且进行了实验以评估IL2和IL15是否对老年和年轻供体中的CAR-T表型具有任何差异效应。本公开中提供的结果显示，与来自年轻供体的细胞相比，从老年供体获得的T细胞以较低的效率被转导，导致老年T细胞的细胞毒性和肿瘤杀伤活性较低。然而，如本公开所示，通过用增加α5β1表达的药剂处理收获的细胞，可以增加老年T细胞的转导效率。相关技术的前述实例和与其相关的限制旨在是说明性的而非排它性的。在阅读本说明书和研究附图之后，相关领域的其它限制对于本领域技术人员将变得显而易见。
技术实现思路
以下描述和说明的以下方面和实施例旨在是示例性和说明性的，而不是限制范围。在一个方面，提供了一种离体转导淋巴细胞群的方法，所述方法包括将淋巴细胞离体与增加淋巴细胞表达α5β1的药剂接触，并将淋巴细胞与重组病毒颗粒混合，其中重组病毒载体含有编码嵌合抗原受体(CAR)的重组DNA分子。在一些实施例中，与未曾和增加α5β1表达的药剂接触的淋巴细胞的转导效率相比，所述方法提高了重组病毒颗粒对淋巴细胞的转导效率。在一些实施例中，淋巴细胞群包含T细胞、B细胞和/或NK细胞。在其它实施例中，T细胞包含CD4+细胞、CD8+细胞、γδT细胞(γδT细胞)、NKT细胞和/或调节性T细胞(Treg)。在一些实施例中，增加α5β1表达的药剂包括巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)或转化生长因子β-1(TGFβ1)。在其它实施例中，增加α5β1表达的药剂包括M-CSF和TGFβ1。在一些实施例中，所述药剂通过淋巴细胞群使α5β1的表达增加至少约未用所述药剂转导的等效淋巴细胞群的α5β1表达的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在其它实施例中，通过定量编码M-CSF和/或TGFβ1的mRNA来测量M-CSF和/或TGFβ1表达的增加。在其它实施例中，通过定量M-CSF和/或TGFβ1蛋白水平来测量M-CSF和/或TGFβ1表达的增加。在一些实施例中，淋巴细胞群内的一种或多种细胞不表达内源性M-CSF和TGFβ1蛋白。在一些实施例中，使淋巴细胞与药剂接触包括用药剂培育约1×105至1×108、1×106至1×107、1×106至1×108个淋巴细胞。换句话说，在一些实施例中，淋巴细胞群包含约1×105至1×108、1×106至1×107、1×106至1×108个淋巴细胞。在其它实施例中，使淋巴细胞与药剂接触包括用药剂培育约1×105、1×106、1×107或1×108个淋巴细胞。在一些实施例中，使细胞与M-CSF接触包括用0.1ng/ml至10ng/ml、2.5至7.5nm/ml或4ng/ml至7ng/mlM-CSF培育细胞。在一些实施例中，使细胞与TGFβ1接触包括用1ng/ml至20ng/ml、5ng/ml至15nm/ml、或7.5ng/ml至12.5ng/mlTGFβ1培育细胞。在一些实施例中，在使细胞与M-CSF或TGFβ1接触之前，从诊断患有疾病的受试者获取细胞。在其它实施例中，所述疾病是癌症或免疫缺陷疾病。在另外的其它实施例中，癌症选自由肝癌、胰腺癌、白血病、淋巴癌、脑癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、膀胱癌、宫颈癌、卵巢癌和皮肤癌组成的组。在其它实施例中，免疫缺陷疾病由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起。在一些实施例中，重组病毒颗粒是慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺相关病毒载体。在一些实施例中，CAR编码结合肿瘤抗原的T细胞受体。在其它实施例中，肿瘤抗原选自由以下组成的组：在其它实施例中，肿瘤抗原是癌胚抗原(CEA)。在另一个方面，提供了治疗有需要的受试者的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用包含使用本文所述的任何方法产生的CAR-T的组合物。在一些实施例中，受试者为至少55岁、60岁、65岁、70岁或75岁。在一些实施例中，受试者已被诊断患有癌症。在其它实施例中，癌症选自由肝癌、胰腺癌、白血病、淋巴癌、脑癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、膀胱癌、宫颈癌、卵巢癌和皮肤癌组成的组。根据以下描述、附图、实例和权利要求，本专利技术方法和组合物等的其它实施例将是显而易见的。如从前面和后面的描述可以理解的，这里描述的每个特征以及这些特征中的两个或更多个的每个组合都包括在本公开的范围内，只要这样的组合中包括的特征不相互矛盾。另外，可以从本专利技术的任何实施例中明确地排除任何特征或特征的组合。在以下描述和权利要求中阐述了本专利技术的其它方面和优点，特别是当结合所附实例和附图考虑时。附图说明图1A示出了从人类受试者分离然后用含有编码CAR的构建体的重组病毒载体转导的PBMC的门控流式细胞术。图1B显示了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种离体转导淋巴细胞群的方法，其包含将所述淋巴细胞离体与增加所述淋巴细胞表达α5β1的药剂接触；和将所述淋巴细胞与重组病毒颗粒混合，所述重组病毒颗粒包含编码嵌合抗原受体(CAR)的重组DNA分子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.08 US 62/276,6931.一种离体转导淋巴细胞群的方法，其包含将所述淋巴细胞离体与增加所述淋巴细胞表达α5β1的药剂接触；和将所述淋巴细胞与重组病毒颗粒混合，所述重组病毒颗粒包含编码嵌合抗原受体(CAR)的重组DNA分子。2.根据权利要求1所述的方法，其中使所述淋巴细胞与所述药剂接触包含用所述药剂培育所述淋巴细胞。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述药剂包括M-CSF或TGFβ1。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中使所述淋巴细胞与所述药剂接触包含用0.1ng/ml至10ng/ml、2.5ng/ml至7.5ng/ml或4ng/mL至7ng/mlM-CSF培育所述淋巴细胞。5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中使所述细胞与所述药剂接触包含用1ng/ml至20ng/ml、5ng/ml至15nm/ml或...

【专利技术属性】
技术研发人员：史蒂文森·C·卡茨，
申请(专利权)人：罗杰威廉姆斯医疗中心以普拉斯派克特查特凯尔RWMC有限责任公司许可，
类型：发明
国别省市：美国,US