用于阵列产生的高密度沉积制造技术

本文公开了用于产生高密度细胞阵列的方法。在一些实施例中，所述方法包括：提供包括多个细胞的样本；以及将所述样本中的所述多个细胞引入到微孔阵列的微孔中以产生细胞阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，并且其中，所述细胞阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞。所公开的方法可以用于产生高密度合成颗粒阵列和高密度试剂阵列。可以使用流式细胞仪将所述细胞引入到所述微孔中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于阵列产生的高密度沉积相关申请本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2016年4月22日提交的题为“HIGHDENSITYDEPOSITIONFORARRAYPRODUCTION(用于阵列产生的高密度沉积)”的美国临时申请号62/326,358；于2016年5月6日提交的题为“AUTOMATEDSET-UPFORCELLSORTING(用于细胞分选的自动化设置)”的美国临时申请号62/333,098；以及于2016年5月9日提交的题为“AUTOMATEDSET-UPFORCELLSORTING(用于细胞分选的自动化设置)”的美国临时申请号62/333,770的优先权，这些相关申请中的每一个的内容都通过引用以其全文结合在此。专利技术背景
本公开总体上涉及用于产生阵列例如细胞阵列或液滴阵列的高密度沉积领域。
技术介绍
已经开发了如流式细胞术等用于将细胞沉积到96孔微量滴定板中的方法和技术。已经开发了如低浓度样本的重力沉积等用于以15％的占用率将单一细胞沉积到微孔(microwell)中的方法和技术。然而，仍然需要能够产生具有高特异性、准确度和占用率的高密度微孔阵列的方法和系统。
技术实现思路
本公开提供了用于产生细胞阵列的方法。在一些实施例中，所述方法包括：提供包括多个细胞的样本；以及将所述样本中的所述多个细胞引入到微孔阵列的微孔中以产生所述细胞阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，并且其中，所述细胞阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞。将所述样本中的所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中包括：将所述样本中的所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中在多个第一期望位置处。将所述样本中的所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中在所述多个第一期望位置处包括：将来自所述多个细胞的兴趣细胞引入到所述多个第一期望位置之一处。在一些实施例中，所述细胞阵列的所述微孔中的50％或更多包括单个细胞。在一些实施例中，所述微孔阵列包括每平方英寸1000个或更多个微孔。所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000纳升或不超过400纳升的体积。所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000微米或不超过400微米的直径。所述微孔阵列的所述微孔中的至少两个彼此间隔开不超过200微米或不超过80微米。在一些实施例中，将所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中包括：将所述多个细胞流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。将所述多个细胞流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中包括：使用流式细胞仪将单个细胞一次性沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。在一些实施例中，所述方法进一步包括：在将所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中之前，将试剂引入到所述微孔阵列的所述微孔中的一个或多个中。在一些实施例中，所述方法进一步包括：将试剂引入到所述细胞阵列的所述微孔中的一个或多个中。所述试剂包括一个或多个合成颗粒。引入所述试剂包括：将所述试剂流式细胞术地沉积到所述微孔中。所述一个或多个合成颗粒包括珠粒。在一些实施例中，所述方法进一步包括：将合成颗粒引入到所述微孔阵列的所述微孔中在多个第二期望位置处。在一些实施例中，所述方法进一步包括：将兴趣合成颗粒引入到所述微孔阵列的所述微孔中在所述多个第二期望位置之一处，其中，所述合成颗粒中的一个不同于所述合成颗粒中的其他合成颗粒，其中，将合成颗粒引入到所述微孔阵列的所述微孔中的一个或多个中包括：将所述合成颗粒中的所述一个引入到所述微孔阵列的微孔中在第二期望位置处。将合成颗粒引入到所述微孔阵列的所述微孔中包括：将所述合成颗粒流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。所述一个或多个合成颗粒包括附有寡核苷酸条形码的磁性珠粒。在一些实施例中，所述方法进一步包括：将流式细胞仪的分选部件与微孔阵列对齐。本文公开了用于产生液滴阵列的方法。在一些实施例中，所述方法包括：将多个第一液滴引入到微孔阵列的微孔中以产生第一液滴阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，其中，所述第一液滴阵列的所述微孔中的25％或更多仅包括单个第一液滴。在一些实施例中，所述第一液滴阵列的所述微孔中的50％或更多仅包括单个第一液滴。在一些实施例中，所述微孔阵列包括每平方英寸1000个或更多个微孔。所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000纳升或不超过400纳升的体积。所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000微米或不超过200微米的直径。在一些实施例中，所述方法进一步包括：将多个第二液滴引入到所述第一液滴阵列的所述微孔中以产生第二液滴阵列，其中，所述第二液滴阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个第一液滴和单个第二液滴。在一些实施例中，所述方法进一步包括：在将所述多个第一液滴引入到所述微孔阵列的所述微孔中之前，将多个第二液滴引入到所述微孔阵列的所述微孔中以产生第二液滴阵列，其中，所述第二液滴阵列中的所述微孔中的25％或更多包括单个第一液滴和单个第二液滴。在一些实施例中，所述多个第一液滴和所述多个第二液滴中的每一个都分别包括单个细胞或合成颗粒。所述合成颗粒包括附有多个寡核苷酸条形码的珠粒。所述多个寡核苷酸条形码中的每一个都与所述多个寡核苷酸条形码中的至少另一个相同或不同。所述多个第二液滴中的第二液滴进一步包括试剂。引入所述多个第一液滴包括：将所述多个第一液滴流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。将所述多个第一液滴流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中包括：使用流式细胞仪将单个第一液滴一次性沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。本文公开了细胞阵列。在一些实施例中，细胞阵列包括微孔阵列，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞。在一些实施例中，所述微孔中的50％或更多包括单个细胞。所述微孔阵列包括每平方英寸1000个或更多个微孔。所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000纳升或不超过400纳升的体积。所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000微米或不超过400微米的直径。所述微孔阵列的所述微孔中的至少两个彼此间隔开不超过200微米或不超过80微米。在一些实施例中，所述微孔阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞和合成颗粒。所述合成颗粒包括附有多个寡核苷酸条形码的珠粒。本文公开了用于对齐第一对齐微孔阵列以产生样本微孔阵列的方法。在一些实施例中，所述方法包括：(a)使用第一成像传感器确定第一参数并且使用第二成像传感器确定第二参数，其中，所述第一成像传感器和所述第二成像传感器大致彼此正交并且被定位在废液接收器皿与第一对齐微孔阵列之间；(b)提供所述第一对齐微孔阵列上、在x方向和y方向上的期望位置；(c)基于所述第一参数和所述第二参数将第一对齐液滴沉积到所述第一对齐微孔阵列的微孔中，其中，所述第一参数与所述x方向上的所述期望位置相关，并且其中，所述第二参数与所述y方向上的所述期望位置相关；(d)确定所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的距离；(e)如果所述距离大于预定阈值，则基于所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的所述距离调整所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生细胞阵列的方法，所述方法包括：提供包括多个细胞的样本；以及将所述样本中的所述多个细胞引入到微孔阵列的微孔中以产生所述细胞阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，并且其中，所述细胞阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.22 US 62/326,358;2016.05.06 US 62/333,098;1.一种产生细胞阵列的方法，所述方法包括：提供包括多个细胞的样本；以及将所述样本中的所述多个细胞引入到微孔阵列的微孔中以产生所述细胞阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，并且其中，所述细胞阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞。2.如权利要求1所述的方法，其中，将所述样本中的所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中包括：将所述样本中的所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中在多个第一期望位置处。3.如权利要求2所述的方法，其中，将所述样本中的所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中在所述多个第一期望位置处包括：将来自所述多个细胞的兴趣细胞引入在所述多个第一期望位置之一处。4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述细胞阵列的所述微孔中的50％或更多包括单个细胞。5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸1000个或更多个微孔。6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000纳升的体积。7.如权利要求6所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过400纳升的体积。8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000微米的直径。9.如权利要求8所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过400微米的直径。10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的至少两个彼此分离不超过200微米。11.如权利要求10所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的至少两个彼此分离不超过80微米。12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，将所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中包括：将所述多个细胞流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。13.如权利要求12所述的方法，其中，将所述多个细胞流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中包括：使用流式细胞仪将单个细胞一次性沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，进一步包括：在将所述多个细胞引入到所述微孔阵列的所述微孔中之前，将试剂引入到所述微孔阵列的所述微孔中的一个或多个中。15.如权利要求1至13中任一项所述的方法，进一步包括：将试剂引入到所述细胞阵列的所述微孔中的一个或多个中。16.如权利要求14或15所述的方法，其中，所述试剂包括一个或多个合成颗粒。17.如权利要求14至16中任一项所述的方法，其中，引入所述试剂包括：将所述试剂流式细胞术地沉积到所述微孔中。18.如权利要求16和17中任一项所述的方法，其中，所述一个或多个合成颗粒包括珠粒。19.如权利要求1至13中任一项所述的方法，进一步包括：将合成颗粒引入到所述微孔阵列的所述微孔中在多个第二期望位置处。20.如权利要求1至13中任一项所述的方法，进一步包括：将兴趣合成颗粒引入到所述微孔阵列的所述微孔中在所述多个期望位置之一处。21.如权利要求19和20中任一项所述的方法，其中，将合成颗粒引入到所述微孔阵列的所述微孔中包括：将所述合成颗粒流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。22.如权利要求16至21中任一项所述的方法，其中，所述一个或多个合成颗粒包括附有寡核苷酸条形码的磁性珠粒。23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，进一步包括：将流式细胞仪的分选部件与所述微孔阵列对齐。24.一种产生液滴阵列的方法，所述方法包括：将多个第一液滴引入到微孔阵列的微孔中以产生第一液滴阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，其中，所述第一液滴阵列的所述微孔中的25％或更多仅包括单个第一液滴。25.如权利要求24所述的方法，其中，所述第一液滴阵列的所述微孔中的50％或更多仅包括单个第一液滴。26.如权利要求24和25中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸1000个或更多个微孔。27.如权利要求24至26中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000纳升的体积。28.如权利要求27所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过400纳升的体积。29.如权利要求24至28中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000微米的直径。30.如权利要求24至29中任一项所述的方法，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的至少两个彼此分离不超过200微米。31.如权利要求24至30中任一项所述的方法，进一步包括：将多个第二液滴引入到所述第一液滴阵列的所述微孔中以产生第二液滴阵列，其中，所述第二液滴阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个第一液滴和单个第二液滴。32.如权利要求24至30中任一项所述的方法，进一步包括：在将所述多个第一液滴引入到所述微孔阵列的所述微孔中之前，将多个第二液滴引入到所述微孔阵列的所述微孔中以产生第二液滴阵列，其中，所述第二液滴阵列中的所述微孔中的25％或更多包括单个第一液滴和单个第二液滴。33.如权利要求31和32中任一项所述的方法，其中，所述多个第一液滴和所述多个第二液滴中的每一个都分别包括单个细胞或合成颗粒。34.如权利要求33所述的方法，其中，所述合成颗粒包括附有多个寡核苷酸条形码的珠粒。35.如权利要求34所述的方法，其中，所述多个寡核苷酸条形码中的每一个都与所述多个寡核苷酸条形码中的至少另一个相同或不同。36.如权利要求33至35中任一项所述的方法，其中，所述多个第二液滴中的第二液滴进一步包括试剂。37.如权利要求24至35中任一项所述的方法，其中，引入所述多个第一液滴包括：将所述多个第一液滴流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。38.如权利要求37所述的方法，其中，将所述多个第一液滴流式细胞术地沉积到所述微孔阵列的所述微孔中包括：使用流式细胞仪将单个第一液滴一次性沉积到所述微孔阵列的所述微孔中。39.一种通过权利要求1至31中任一项产生的细胞阵列。40.一种细胞阵列，包括：微孔阵列，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞。41.如权利要求40所述的细胞阵列，其中，所述微孔中的50％或更多包括单个细胞。42.如权利要求40和41中任一项所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸1000个或更多个微孔。43.如权利要求40至42中任一项所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000纳升的体积。44.如权利要求43所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过400纳升的体积。45.如权利要求40至44中任一项所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过1000微米的直径。46.如权利要求45所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的每一个都具有不超过400微米的直径。47.如权利要求40至46中任一项所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的至少两个彼此分离不超过200微米。48.如权利要求47所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的至少两个彼此分离不超过80微米。49.如权利要求40至48中任一项所述的细胞阵列，其中，所述微孔阵列的所述微孔中的25％或更多包括单个细胞和合成颗粒。50.如权利要求49所述的细胞阵列，其中，所述合成颗粒包括附有多个寡核苷酸条形码的珠粒。51.一种对齐第一对齐微孔阵列以产生样本微孔阵列的方法，所述方法包括：(a)使用第一成像传感器确定第一参数并且使用第二成像传感器确定第二参数，其中，所述第一成像传感器和所述第二成像传感器大致彼此正交并且被定位在废液接收器皿与第一对齐微孔阵列之间；(b)提供所述第一对齐微孔阵列上、在x方向和y方向上的期望位置；(c)基于所述第一参数和所述第二参数将第一对齐液滴沉积到所述第一对齐微孔阵列的微孔中，其中，所述第一参数与所述x方向上的所述期望位置相关，并且其中，所述第二参数与所述y方向上的所述期望位置相关；(d)确定所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的距离；(e)如果所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的所述距离大于预定阈值，则：基于所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的所述距离调整所述第一参数和所述第二参数；以及重复步骤(b)至(d)。52.如权利要求51所述的方法，其中，确定所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的所述距离包括：使用所述第一成像传感器对所述第一对齐微孔阵列和所述第一对齐液滴进行成像以及使用所述第二成像传感器对所述第一对齐阵列和所述第一对齐液滴进行成像。53.如权利要求52所述的方法，其中，基于所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的所述距离调整所述第一参数和所述第二参数包括：基于通过所述第一成像传感器对所述第一对齐微孔阵列和所述第一对齐液滴进行的所述成像和通过所述第二成像传感器对所述第一对齐微孔和所述第一对齐液滴进行的所述成像确定所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置。54.如权利要求51所述的方法，其中，将所述第一对齐液滴沉积到所述第一对齐微孔阵列的所述微孔中包括：将所述第一对齐液滴沉积到所述第一对齐微孔阵列的对齐设备中，并且其中，确定所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上的位置与所述期望位置之间的所述距离包括：使用所述第一成像传感器对所述对齐设备和所述对齐设备上的所述第一对齐液滴进行成像以及使用所述第二成像传感器对所述对齐设备和所述对齐设备上的所述第一对齐液滴进行成像。55.如权利要求54所述的方法，其中，所述对齐设备包括多个对齐区域。56.如权利要求55所述的方法，其中，所述多个对齐区域中的两个对齐区域包括大致相等的面积。57.如权利要求55所述的方法，其中，所述多个对齐区域包括多个同心环。58.如权利要求57所述的方法，其中，所述同心环中的两个同心环彼此分离0.1mm。59.如权利要求57所述的方法，其中，所述同心环中的两个同心环彼此分离1mm。60.如权利要求51至59中任一项所述的方法，其中，所述第一参数与液滴电荷相关。61.如权利要求51至60中任一项所述的方法，其中，所述第二参数与所述第一对齐液滴在所述第一对齐微孔阵列上在所述y方向上的位置相关。62.如权利要求51至61中任一项所述的方法，其中，所述第一成像传感器是CCD相机或CMOS相机。63.如权利要求51至62中任一项所述的方法，其中，所述第二成像传感器是CMOS相机或CCD相机。64.如权利要求51至63中任一项所述的方法，其中，将所述第一对齐液滴沉积到所述第一对齐微孔阵列的所述微孔中包括：将所述第一对齐液滴流式细胞术地沉积到所述第一对齐微孔阵列的所述微孔中。65.如权利要求51至64中任一项所述的方法，其中，所述预定阈值与所述第一对齐液滴距所述废液接收器皿的边缘的距离相关。66.如权利要求51至65中任一项所述的方法，进一步包括：基于所述第一参数和所述第二参数将样本液滴引入到所述样本微孔阵列的微孔中。67.如权利要求51至65中任一项所述的方法，进一步包括：基于所述第一参数和所述第二参数将多个样本液滴引入到所述样本微孔阵列的微孔中。68.如权利要求67所述的方法，其中，所述多个样本液滴包括细胞、附有寡核苷酸条形码的颗粒或其任何组合。69.如权利要求67和68中任一项所述的方法，进一步包括：在将所述多个样本液滴引入到所述样本阵列的所述微孔中之前，将第二对齐液滴引入到第二对齐微孔阵列的微孔中；以及使用所述第二成像传感器确定所述第二对齐液滴在所述第二对齐微孔阵列上的位置，其中，将所述多个样本液滴引入到所述样本微孔阵列的所述微孔中进一步基于所述第二对齐液滴在所述第二对齐阵列上的位置。70.如权利要求51至69中任一项所述的方法，其中，提供在所述第一对齐微孔阵列上在所述x方向上的所述期望位置包括：使用所述第一成像传感器确定在所述第一对齐微孔阵列上在所述x方向上的所述期望位置，并且提供在所述第一对齐微孔阵列上在所述y方向上的所述期望位置包括：使用所述第二成像传感器确定在所述样本阵列上在所述y方向上的所述期望位置。71.一种用于产生细胞阵列的系统，所述系统包括：细胞分选部件，所述细胞分选部件被配置成：将液滴流式细胞术地引入到微孔阵列的微孔中以产生细胞阵列，其中，所述微孔阵列包括每平方英寸500个或更多个微孔；以及控制部件，所述控制部件被配置成：接收在所述微孔阵列上在x方向和y方向上的期望位置；并且使用第一成像传感器确定第一参数并且使用第二成像传感器确定第二参数以便将所述液滴引入到所述微孔阵...

【专利技术属性】
技术研发人员：克拉克·梅森，蒂莫西·W·彼得森，弗拉基米尔·阿泽斯基，克里斯多佛·J·沃尔夫，
申请(专利权)人：贝克顿迪金森公司，
类型：发明
国别省市：美国,US