一种Grp94抑制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种Grp94抑制剂。本发明专利技术发现，α‑山道年、β‑山道年对Grp94蛋白的抑制作用最强，其次为6‑甲氧基半棉酚、2‑O‑甲基异半棉酸内酯，最后为3β,4β‑环氧沉香呋喃、8β‑乙氧基苍术内酯Ⅱ。这6个化合物不但对Grp94蛋白抑制作用强，而且选择性强，对Hsp90α抑制作用极弱。3,4‑二羟基二氢沉香呋喃虽然与3β,4β‑环氧沉香呋喃结构接近，但是对Grp94、Hsp90α抑制作用均极弱。由此可见，6‑甲氧基半棉酚、2‑O‑甲基异半棉酸内酯、3β,4β‑环氧沉香呋喃、8β‑乙氧基苍术内酯Ⅱ、α‑山道年、β‑山道年为有效的Grp94选择性抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
一种Grp94抑制剂
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及萜类化合物用作Grp94抑制剂的用途。
技术介绍
热休克蛋白Hsp90是细胞内高度保守的一类蛋白，其主要功能是辅助细胞内其他蛋白(客户蛋白)的成熟。Hsp90包括四个亚型，分别是细胞质中的Hsp90α/β，线粒体中的TRAP1和内质网中的Grp94。作为Hsp90的内质网亚型，Grp94的客户蛋白广泛参与炎症相关性疾病的发生发展中，如心肌炎、心肌肥大、结肠炎等。Grp94抑制剂在心肌炎、心肌肥大、结肠炎等炎症相关疾病的治疗方面具有巨大价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供萜类化合物用作Grp94抑制剂的用途。本专利技术技术方案如下：6-甲氧基半棉酚用作Grp94抑制剂的用途。6-甲氧基半棉酚用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为6-甲氧基半棉酚。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。2-O-甲基异半棉酸内酯用作Grp94抑制剂的用途。2-O-甲基异半棉酸内酯用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为2-O-甲基异半棉酸内酯。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。3β,4β-环氧沉香呋喃用作Grp94抑制剂的用途。3β,4β-环氧沉香呋喃用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为3β,4β-环氧沉香呋喃。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ用作Grp94抑制剂的用途。8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。α-山道年或β-山道年用作Grp94抑制剂的用途。α-山道年或β-山道年用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。一种治疗心肌肥大的药物，含有Grp94抑制剂，该抑制剂为α-山道年或β-山道年。进一步地，还含有药学上可以接受的辅料。有益效果：本专利技术发现，6-甲氧基半棉酚、2-O-甲基异半棉酸内酯、3β,4β-环氧沉香呋喃、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ、α-山道年、β-山道年为有效的Grp94选择性抑制剂。附图说明图1为实施例测试的化合物的化学结构；图2为各化合物对心肌肥大细胞中Grp94基因表达的影响；图3为各化合物对心肌肥大细胞氧化应激的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例介绍本专利技术实质性内容，但本专利技术的保护范围并不局限于此。实施例1：分子水平抑制试验一、实验材料6-甲氧基半棉酚(CAS登录号：50399-95-6)、2-O-甲基异半棉酸内酯(CAS登录号：61470-49-3)、3β,4β-环氧沉香呋喃(CAS登录号：149117-37-3)、3,4-二羟基二氢沉香呋喃(CAS登录号：141554-22-5)、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ(CAS登录号：113269-35-5)、α-山道年(CAS登录号：481-06-1)、β-山道年(CAS登录号：481-07-2)购买或自制，纯度不低于98％。各化合物的结构式如图1所示。二、实验方法化合物对Grp94、Hsp90α抑制活性采用荧光偏正的方法测试(参见文献CN108147978A)。通过测试化合物与荧光基团标记的格尔德霉素(GM-FITC)竞争性结合重组Grp94、Hsp90α蛋白的能力，反应化合物对Grp94、Hsp90α的抑制作用。测试中使用384孔黑板(型号为Corning#3575)，测试终体积选择60μL，所测试化合物和GM-FITC溶解于DMSO中备用。将化合物用assaybuffer倍比稀释12个浓度梯度后每个孔板加入20μL稀释好的化合物，每个孔板再加入20μL用assaybuffer稀释好的6nM/L(终浓度)的GM-FITC，再加入20μL用assaybuffer稀释好的15nM/L(终浓度)蛋白。每个化合物浓度设定两个附孔，每次实验设置空白对照(20μLGM-FITC+40μLassaybuffer)和阴性对照(20μLGM-FITC+20μL蛋白+20μLassaybuffer)。之后在4℃摇床上震摇孵育2h，用Synergy读板器扫板，激发波长设置为485nm，发射波长设置为535nm，结果GraphpadPrism6分析。根据不同浓度抑制率计算IC50值。三、实验结果各化合物对Grp94、Hsp90α蛋白的IC50值如表1所示。表1各化合物对Grp94蛋白的IC50值上述化合物中，α-山道年、β-山道年对Grp94蛋白的抑制作用最强，其次为6-甲氧基半棉酚、2-O-甲基异半棉酸内酯，最后为3β,4β-环氧沉香呋喃、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ。这6个化合物不但对Grp94蛋白抑制作用强，而且选择性强，对Hsp90α抑制作用极弱。3,4-二羟基二氢沉香呋喃虽然与3β,4β-环氧沉香呋喃结构接近，但是对Grp94、Hsp90α抑制作用均极弱。实施例2：细胞水平抑制试验一、实验材料6-甲氧基半棉酚(CAS登录号：50399-95-6)、2-O-甲基异半棉酸内酯(CAS登录号：61470-49-3)、3β,4β-环氧沉香呋喃(CAS登录号：149117-37-3)、3,4-二羟基二氢沉香呋喃(CAS登录号：141554-22-5)、8β-乙氧基苍术内酯Ⅱ(CAS登录号：113269-35-5)、α-山道年(CAS登录号：481-06-1)、β-山道年(CAS登录号：481-07-2)购买或自制，纯度不低于98％。各化合物的结构式如图1所示。1～2日龄Wistar乳鼠由南京江宁青龙山动物中心提供。DMEM、胎牛血清购自赛默飞世尔生物化学制品有限公司。Trizol、RT-PCR试剂盒购自Invitrogen公司；SYBRGreenPCRMasterMix试剂盒购自美国AppliedBiosystems公司。RT-PCR引物由上海生工设计合成。SOD、MDA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。二、实验方法1、心肌肥大细胞模型的构建及分组给药取Wistar乳鼠，75％乙醇皮肤消毒后剪除头部，开胸取心脏，放置装有DMEM的无菌玻璃平皿中洗净血污，每个心脏剪成大小均匀的组织块，将所有组织块转移至无菌离心管中，加0.25％胰酶在37℃恒温水浴中振摇消化、自然沉降。收集细胞悬液于离心试管中，加入等体积预冷细胞培养液(DMEM+10％FBS)混匀，经200目无菌不锈钢网滤过后装置另一离心管中，2500r/min离心2min，弃上清液，沉淀加入培养液吹打均匀制成细胞悬液，接种于细胞瓶中，按差速贴壁分离法预接种。2h后将未贴壁细胞吸出，在培养液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BRDU，0.1mmol/L)，48h后将培养液换为无血清的培养液，饥饿12h。心肌细胞随机分为：对照组只加入培养液，异丙肾上腺素10μM(模型)组、各化合物5μM与异丙肾上腺素10μM共同给药组，各组细胞给予相应物质后于培养箱中孵育48h，备用。2、RT-PCR法检测Grp94基因表达取各组细胞，Trizol法提取总RNA，逆转录获得cDNA，采用SYBRGreenPCRMasterMix试剂盒进行PCR反应。反应体系20μL(10μM上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.α‑山道年或β‑山道年用作Grp94抑制剂的用途。

【技术特征摘要】
1.α-山道年或β-山道年用作Grp94抑制剂的用途。2.α-山道年或β-山道年用于制备治疗心肌肥大的药物的用途。3.一种治疗心肌肥大...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁新华，徐嘉辰，
申请(专利权)人：袁新华，
类型：发明
国别省市：江苏,32