一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒及其方法技术

本发明专利技术公开了一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒及其方法，涉及分子生物技术领域。该试剂盒包括有脱腊油，脱腊油包括有正十六烷和松节油，正十六烷和松节油的体积比为(3～6)：1。采用该脱蜡油对石蜡切片样本进行脱蜡，无需使用有毒化学品，正十六烷和松节油的配合使用具有良好脱蜡效果，无毒环保，简化了脱蜡过程中繁琐的洗涤步骤，且松节油具有氧化后会变色的效果，便于操作人员准确吸取裂解液层进行后续核酸提取的实验步骤，此外，该试剂盒具有能够提取数量更大、质量更高的石蜡DNA的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒及其方法
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒及其方法。
技术介绍
福尔马林固定石蜡包埋组织(formalinfixedandparaffinembeddedtissues，FFPE)是医疗机构最常用的保存病例组织的方法，由于新鲜标本难以得到，为进行肿瘤分子生物学研究，对已有病例进行回顾性研究时，只能从石蜡包埋组织中进行基因提取，因此石蜡包埋组织就成为来源最丰富的珍贵资源。随着生物分子技术的发展，对于FFPE不单只进行光学显微检查，分析其核酸(DNA和RNA)变化已日渐重要。同时，还会将从此类样品中获得的核酸利用高度灵敏的技术，如聚合酶链反应(PCR)进行后续分析。因此，建立一种相对简便有效，安全可行的从FFPE样品中提取高质量DNA，并通过PCR能扩增得到长片段DNA的方法尤为重要。采用福尔马林固定组织材料并将其包埋在石蜡中以加固样本材料。该石蜡切片样本中的组织随保存时间的变化，在组织内部形成生物分子的大量交联(核酸和蛋白之间以及蛋白之间或核酸之间的交联)。这些处于细胞内部和外部的交联结构促成了不溶性碎片或者说很难裂解或不可裂解的碎片的产生。石蜡包埋样本通常被制成切片以供病理学家鉴定，这些切片也可用作核酸分析的起始材料。进行核酸提纯时，必须在裂解后去除细胞碎片和石蜡。否则这些成分可能妨碍接下来的分离和分析工作。同时，石蜡切片样本在染色免疫荧光实验等样本处理中，包埋在石蜡块中的肿瘤组织DNA不可避免地经历了多重损伤，这也是石蜡样本提取的核酸通常易高度降解的根本原因。目前，传统的石蜡包埋组织DNA提取采用二甲苯脱蜡、蛋白酶K孵育的方法，该方法整个抽提过程长，操作繁琐，同时在提取过程中所使用的有机溶剂二甲苯试剂易造成环境的污染和对操作者身体的伤害。且现有技术所应用针对的对象，即FFPE样本多为1年内的样本，这也为临床研究的应用带来很大的限制。因此，需要研发更有效的能适用于更长时间保存的FFPE样本的核酸提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒，该试剂盒能够快速提取到高质量的石蜡切片样本核酸，为后期开展更多检测实验提供便利。本专利技术的另一目的在于提供一种从石蜡切片样本中提取核酸的方法，能快速地提取数量更大，质量更高的石蜡切片样本中的核酸。本专利技术是这样实现的：一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒，试剂盒包括有脱腊油，脱腊油包括有正十六烷和松节油，正十六烷与松节油的体积比为(3～6)：1。一种从石蜡切片样本中提取核酸的方法，采用上述的试剂盒提取石蜡切片样本中的核酸。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒，该试剂盒包括有脱腊油，脱腊油包括有正十六烷和松节油，正十六烷和松节油的体积比为(3～6)：1。采用该脱蜡油对石蜡切片样本进行脱蜡，无需使用有毒化学品，正十六烷和松节油的配合使用具有良好脱蜡效果，无毒环保，简化了脱蜡过程中繁琐的洗涤步骤，且松节油具有氧化后会变色的效果，便于操作人员准确吸取裂解液层进行后续核酸提取的实验步骤，此外，该试剂盒具有能够提取数量更大、质量更高的石蜡DNA的优点。本专利技术实施例还提供一种从石蜡切片样本中提取核酸的方法，该方法具有能够快速高效提取陈年FFPE样本核酸的优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术第四对比例中本专利技术和参比试剂盒提取样本基因组的琼脂糖凝胶电泳图。图2为本专利技术第五对比例中本专利技术和参比试剂盒提取样本基因组的荧光定量PCR结果分析图(图中纵坐标表示Ct值，横坐标表示样本编号)。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例提供的从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒及其方法进行具体说明。本专利技术实施例提供的从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒，其含有正十六烷和松节油。松节油是植物来源烃类溶剂中的代表，属于松香类溶剂存在于一种叫松脂的天然树脂中，为混合烃类，主要成分是α-蒎烯及β-蒎烯和少量1-莰烯。是油脂、蜡、树脂的良好溶剂，使用时安全性良好，并且松节油容易于空气中氧化，当有水分存在时，则氧化变为黄色粘稠状的物质，因而与裂解液层有明显区别，便于水相与有机相之间界面的光学分辨。正十六烷和松节油的配合使用，替代了传统脱蜡过程中使用的二甲苯，使得在石蜡切片样本提取核酸的脱蜡过程中无需添加有毒化学品(二甲苯)，且脱腊油具有很好的脱蜡效果。此外，在提取核酸的过程中无需采用繁复的洗涤步骤，松节油具有氧化后会变色的效果，便于指示操作人员准确吸取裂解液层进行后续的核酸提取实验步骤。进一步地，正十六烷与松节油的体积比为(3～6)：1。该配比能够使正十六烷和松节油在脱蜡过程中发挥协同作用，以达到更好的脱蜡效果。具体地，正十六烷与松节油的体积比可以为3:1、4:1、5:1或6:1。本专利技术实施例提供的试剂盒还包括有裂解液、结合液、第一洗涤液、第二洗涤液以及洗脱液中的一种或多种。裂解液包括硼氢化钠、Tris-HCl、EDTA、DTT(二硫苏糖醇)、SDS(十二烷基硫酸钠)、Tween-20、TritonX-100、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)以及CarrierRNA。具体地，硼氢化钠的浓度为1.8～2.2％(m/m)，Tris-HCl的浓度为95～105mmol/L，EDTA的浓度为45～55mmol/L，DTT的浓度为0.8～1.2％(m/m)，SDS的浓度为1.8～2.2％(m/m)，Tween-20浓度为5.8～6.2％(v/v)，TritonX-100的浓度为0.8～1.2％(v/v)，CTAB的浓度为1.8～2.2％(m/m)，CarrierRNA的浓度为0.48～0.52μg/μL。具体地，硼氢化钠的浓度可以为1.8％、1.9％、2.0％、2.1％或2.2％。在该浓度范围下的硼氢化钠能将甲醛还原为甲醇并蒸发，解除了甲醛对细胞结构的固定，减少甲醛对细胞的约束，从而提高石蜡DNA的产量。同时，在该组分及组分配比下的该裂解液可以有效去除在组织内部形成生物分子的大量交联，减少DNA与蛋白的交联，彻底释放DNA，提高从石蜡切片样本中提取的DNA质量。结合液包括有Tris-HCl、EDTA-2Na、(NH4)2SO4、NonidetP40以及异硫氰酸胍。具体地，在结合液中，Tris-HCl的浓度为95～105mmol/L，EDTA-2Na的浓度为48～52mmol/L，(NH4)2SO4浓度为0.78～0.82M，NonidetP40浓度为3.8～4.2％(v/v)，异硫氰酸胍浓度为4.8～5.2M。第一洗涤液包括有Tris-HCl、乙醇、EDTA-2Na以及DTT。在第一洗涤液中，Tris-HCl的浓度为64～6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括有脱腊油，所述脱腊油含有体积比为(3～6)：1的正十六烷和松节油。

【技术特征摘要】
1.一种从石蜡切片样本中提取核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括有脱腊油，所述脱腊油含有体积比为(3～6)：1的正十六烷和松节油。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括有裂解液、结合液、第一洗涤液、第二洗涤液以及洗脱液中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括有硼氢化钠、Tris-HCl、EDTA、DTT、SDS、Tween-20、TritonX-100、CTAB以及CarrierRNA。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在所述裂解液中，硼氢化钠的浓度为1.8～2.2％(m/m)，Tris-HCl的浓度为95～105mmol/L，EDTA的浓度为45～55mmol/L，DTT的浓度为0.8～1.2％(m/m)，SDS的浓度为1.8～2.2％(m/m)，Tween-20浓度为5.8～6.2％(v/v)，TritonX-100的浓度为0.8～1.2％(v/v)，CTAB的浓度为1.8～2.2％(m/m)，CarrierRNA的浓度为0.48～0.52μg/μL。5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述结合液包括有Tris-HCl、EDTA-2Na、(NH4)2SO4、Nonidet...

【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，吴诗扬，刘志明，赖炳林，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44