本发明专利技术提供了一株地衣芽孢杆菌XW015(Bacillus licheniformiss)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15648，保藏日期为2018年4月26日。本发明专利技术还公开了所述的地衣芽孢杆菌的应用，将所述地衣芽孢杆菌应用于刺参的养殖，包括两种方法：（1）采用所述地衣芽孢杆菌发酵刺参饲料；（2）将所述地衣芽孢杆菌的菌液泼洒在刺参养殖池中。所述菌株一方面能向细胞外分泌纤维素酶，所述纤维素酶可以分解饲料中的纤维素；另一方面能有效抑制刺参腐皮综合征(又称腐皮病)的主要致病菌——假交替弧菌。
【技术实现步骤摘要】
产纤维素酶且抑制假交替单胞菌的地衣芽孢杆菌及使用方法
本专利技术属于生物学领域，涉及一株地衣芽孢杆菌，具体涉及一株产纤维素酶而且抑制假交替单胞菌的芽孢杆菌及使用方法。
技术介绍
随着水产养殖业的飞速发展，高密度的集约化养殖规模日益扩大，水产养殖的环境恶化和疾病的危害对水产养殖业的经济损失也愈加明显。而传统的解决办法是采用抗生素。众所周知，抗生素的使用容易产生耐药性菌株的问题，并且会在体内残留。益生菌是一定浓度范围内可以对动物体产生有益作用的活的微生物。益生菌通过增强动物对肠内有害微生物群落的抑制作用，或者通过增强非特异性免疫功能来预防疾病，起到了促进动物生长的作用。因此，近些年来，作为抗生素的部分领域的替代品，益生菌得到迅速的发展。目前益生菌已经广泛应用于鱼类、贝类、虾类以及刺参的养殖中。Bagheri等(2008)将不同浓度的复合芽孢杆菌制剂添加到虹鳟饲料中进行两个月的投喂，结果发现高浓度的复合益生菌制剂可以明显促进虹鳟生长。Doeschate等(2008)研究证明南非鲍分离得到的土著益生菌群可以提高其消化酶活力，促进生长。Iehata等(2009)发现乳酸菌对鲍鱼肠道消化酶活性提高有一定的作用。专利技术专利申请201510896838.8提供了“一株地衣芽孢杆菌及包含该菌株的饲料添加剂”。该专利技术专利申请具体提供了一株新型地衣芽孢杆菌DN29(BacilluslicheniformisDN29)，其保藏编号为CCTCCNO：M2015482。所述的地衣芽孢杆菌DN29，能有效抑制灿烂弧菌和假交替单胞菌等病原菌，减少养殖动物病害发生的几率，同时还能作为饲料添加剂，显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进动物生长。所述地衣芽孢杆菌DN29可作为益生菌应用于刺参的养殖生产过程中，对刺参的生长具有显著的促进作用，还可以有效提高刺参的免疫力及对假交替单胞菌的抵抗能力。专利技术专利申请201610812192.5公开了一株产纤维素酶的地衣芽孢杆菌，该菌种已于2016年4月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号是CCTCCNo.M2016202。该专利技术添加了地衣芽孢杆菌CCTCCNo.M2016202的秸秆腐熟剂能原位降解农作物秸秆、促进秸秆还田，尤其在秋冬季节温度较低的条件下仍能发挥作用。综上可知，现有技术中报道的芽孢杆菌菌株，有些提高刺参生长和抗病力或免疫力，有些可以分泌纤维素酶。但目前还没有报道同时可以抑制主要致病菌和分泌纤维素酶的菌株。
技术实现思路
本专利技术提供了一株地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)，所述菌株一方面能向细胞外分泌纤维素酶，所述纤维素酶可以分解饲料中的纤维素；另一方面能有效抑制刺参腐皮综合征(又称腐皮病)的主要致病菌——假交替弧菌。本专利技术的技术方案：一株产纤维素酶且抑制弧菌的地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌命名为地衣芽孢杆菌XW015(Bacilluslicheniformis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15648，保藏日期为2018年4月26日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。所述地衣芽孢杆菌XW01516SrDNA序列如SEQNO.3所示。所述的地衣芽孢杆菌的活化方法，将地衣芽孢杆菌接种到LB培养基中，在32-38℃的温度条件下培养8-10小时。其中，所述LB培养基的配方为：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl10g/L。所述的地衣芽孢杆菌的应用，将所述地衣芽孢杆菌应用于刺参的养殖。所述地衣芽孢杆菌应用于刺参的养殖包括两种方法：(1)采用所述地衣芽孢杆菌发酵刺参饲料；(2)将所述地衣芽孢杆菌的菌液泼洒在刺参养殖池中。其中，所述方法(1)具体为：(A)将所述地衣芽孢杆菌菌株活化(细菌含量为1.0*108cfu/ml-1.0*109cfu/ml)，然后取适量，投入到初始刺参养殖饲料中，混合均匀，得到混合刺参养殖饲料；所述地衣芽孢杆菌菌液的重量分数为3-8％。(B)向混合刺参养殖饲料中加入适量水，所述水的量为初始刺参养殖饲料重量的1.5-3倍，然后在30-38℃的温度条件下发酵12-32小时，即发酵刺参饲料。发酵后得到的刺参饲料为浆状液体，具有发酵香味。用该菌株发酵刺参饲料，能使饲料中的纤维素分解为可溶性多糖，更加有利于刺参的消化吸收。其中，所述方法(2)具体为：将活化好的菌液，均匀投放在刺参养殖池中，使菌液的浓度为8-20PPM；并根据消耗量定期补充以维持该浓度。具体步骤为：将活化好的菌液(细菌含量为1.0*108cfu/ml-1.0*109cfu/ml)稀释10倍，然后再均匀投放到刺参养殖池中。5天补充投放一次，每次倒池(即将池中刺参连同刺参的附着基一起移至一个经过清理消毒的养殖池)后补充投放一次。在养殖水体中泼洒该菌株，可以有效抑制养殖刺参以及水体环境中的致病菌，提高刺参成活率，起到提高养殖效益的作用。一种包括所述的地衣芽孢杆菌的发酵刺参饲料，通过上述方法(1)制备得到。所述发酵刺参饲料的使用方法，其特征在于：将所述发酵刺参饲料与海泥(海底的浮泥，是海水中的泥沙和少数动植物碎屑及底栖硅藻等的混合物)，按照1:4-1:6的重量比混合均匀，然后将其投放在刺参养殖水中；所述每日的投放量为待喂养刺参总重量的1-3％。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术中的地衣芽孢杆菌XW008分泌的纤维素酶可以分解饲料的粗纤维，提高饲料的利用率；另一方面能有效抑制刺参腐皮病的主要致病菌——假交替单胞菌，避免了刺参腐皮病带来的经济损失。(2)采用本专利技术所述的菌株发酵的刺参饲料养殖刺参，可以使饲喂2个月的刺参的增重率提高近60个百分点；同时抑制刺参养殖过程中的假交替单胞菌，减少发病率，成活率可以提高近9个百分点；一方面降低了致病菌所导致的刺参养殖过程中的损失，另一方面增加了生长速度而产生了巨大的经济效益，对于刺参养殖产业的发展具有重要的意义。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明。实施例1：菌株的分离与筛选1.1有益菌的分离(1)初筛：取1g待筛选的样品(土壤或底泥)，加入99ml无菌水中，制备悬液，然后梯度稀释10-3、10-4、10-5、10-6，然后将在超净工作台中，均匀涂布于羧甲基纤维素固体培养基平板上，放于恒温培养箱中30℃恒温正置培养1小时，再倒置培养至长出单菌落。将培养出来的菌株，分别接种到另外一个培养基上，将一定量的1mg/ml浓度的刚果红溶液倒入培养好的平板中，使之覆盖住平板表面，染色1小时后，倒出刚果红溶液，再用1mol浓度的NaCl溶液浸泡洗脱，出现清晰透明圈，则为产纤维素酶的菌株，透明圈大，则产酶能力强。初筛培养基配方如下(500ml)：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)10g，硫酸铵1.4g，硫酸镁0.3g，磷酸二氢钾2g，硫酸锰1.6mg，硫酸铁5mg，硫酸锌2.5mg，氯化钴2.0mg，琼脂20g。pH8.0。(2)复筛：将初筛的菌株接种到羧甲基纤维素液体培养基中，30℃，180rpm振荡培养24小时，然后取5ml接种到100ml羧甲基纤维素液体培养基中，30℃，振荡培养2小时，再离心(4℃、8000rpm)10分钟，取上清液做为粗酶液，然后用DNS法测纤维素酶的活力。酶活力值大的即为目的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株产纤维素酶且抑制假交替单胞菌的地衣芽孢杆菌，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌命名为地衣芽孢杆菌XW015 (Bacillus licheniformiss)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No. 15648，保藏日期为2018年4月26日。
【技术特征摘要】
1.一株产纤维素酶且抑制假交替单胞菌的地衣芽孢杆菌，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌命名为地衣芽孢杆菌XW015(Bacilluslicheniformiss)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15648，保藏日期为2018年4月26日。2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌XW01516SrDNA序列如SEQNO.3所示。3.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌的活化方法，其特征在于：将权利要求1所述的地衣芽孢杆菌，接种到培养基中，在32-38℃的温度条件下培养8-10小时。4.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌的应用，其特征在于：将所述地衣芽孢杆菌应用于刺参的养殖。5.根据权利要求4所述的地衣芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌应用于刺参的养殖包括两种方法：（1）采用所述地衣芽孢杆菌发酵刺参饲料；（2）将所述地衣芽孢杆菌的菌液泼洒在刺参养殖池或刺参保苗池中。6.根据权利要求5所述的地衣芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述方法（1）具体为：(A)将所述地...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯政夫，朱伟，胡彦江，杨少辉，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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