一种番石榴叶黄酮苷元的生产方法技术

本发明专利技术公开了一种番石榴叶黄酮苷元的生产方法，包括以下步骤：(1)从番石榴叶中提取黄酮类化合物；(2)将步骤(1)中得到的黄酮类化合物加入到含灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的液体培养基中培养，振荡发酵培养得到发酵溶液；(3)将步骤(2)中得到的发酵溶液振荡酶解得到酶解溶液；(4)将步骤(3)中得到的酶解溶液静置、离心，沉淀用甲醇溶解，过滤后得到含有黄酮苷元的甲醇溶液。本发明专利技术番石榴叶黄酮苷元的生产方法简便、易于操作，最终得到的黄酮苷元的杂质含量小，后续提纯工艺简单。

【技术实现步骤摘要】
一种番石榴叶黄酮苷元的生产方法
本专利技术属于番石榴领域，尤其涉及一种番石榴叶提取物的生产方法。
技术介绍
番石榴(PsidiumguaijavaL.)为桃金娘科番石榴属植物，是热带常绿小乔木或灌木，原产于热带美洲，几个世纪前传入我国，现在我国福建、广东、台湾等地均有广泛的种植。中医认为其性平味干涩，具有收敛止泻等功能，其挥发油具有抗菌、抗病毒作用，对消化系统也有解痉、增强胃肠蠕动的作用。现代研究表明，番石榴中含有多种重要的芳香类二级代谢产物如多酚黄酮类化合物，有学者认为正是这些酚类化合物赋予番石榴多种药用功效。因而，针对番石榴叶的黄酮苷元资源进行开发研究有较好的前景与必要。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种成本低、品质高的番石榴叶黄酮苷元的生产方法。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：一种番石榴叶黄酮苷元的生产方法，包括以下步骤：(1)从番石榴叶中提取黄酮类化合物；(2)将步骤(1)中得到的黄酮类化合物加入到含灰色链霉菌(StreptomycesgriseusATCC13273)的液体培养基中培养，于25-40℃条件下，振荡发酵培养6-8天得到发酵溶液；(3)将步骤(2)中得到的发酵溶液于50-55℃条件下，振荡酶解3-4h得到酶解溶液；(4)将步骤(3)中得到的酶解溶液静置、离心，沉淀用甲醇溶解，过滤后得到含有黄酮苷元的甲醇溶液。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，灰色链霉菌首先需要先以马铃薯培养基进行扩大培养当作种子，再接种至新的马铃薯培养基。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述含灰色链霉菌的液体培养基为标准马铃薯培养基，其配方为：去皮新鲜马铃薯200g、葡萄糖20g、MgSO4·7H2O1.5g、KH2PO43g、1L蒸馏水，所述标准马铃薯培养基的初始pH值无需调节。通过灰色链霉菌代谢产生的鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶等，会使提取物中的黄酮糖苷成分通过微生物发酵作用转化生成黄酮苷元(槲皮素、山奈酚和异鼠李素等)，以微生物进行转化，可以增加产物量，克服化学合成的缺点，又因微生物发酵大多在中性、室温条件下作用，减少了产物异构、消旋和重排反应等不利因素。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述含灰色链霉菌的液体培养基中灰色链霉菌的接种量为每毫升培养基中接种10000-60000个孢子。更优选的，为10000-60000个孢子。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述步骤(2)中，所述黄酮类化合物的加入量与液体培养基的质量比控制为(0.5-1.5)：5。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述步骤(1)中从番石榴叶中提取黄酮类化合物的方法为碱水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法。由于黄酮类成分大多具有酚羟基，因此可用碱性水如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液或碱性稀醇如乙醇浸出，浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。有机溶剂提取法是目前国内外使用最广泛的方法，有机溶剂提取对设备要求简单，产品得率高，容易实现工业化生产，但成本较高，杂质含量也较高，常用于黄酮提取的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙醋、乙醚等，考虑到甲醇、丙酮等的毒性较大，优选的采取乙醇为提取溶剂。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述步骤(1)中从番石榴叶中提取黄酮类化合物的方法为微波辅助低共熔提取技术，其工艺条件为：用200W微波强度处理番石榴叶2min后，以丁二醇和氯化胆碱按照摩尔体积比为4：1比例混合作为低共熔溶剂，控制料液比为1：22，65℃下提取40min。微波辅助提取时，被提取的极性分子在微波电场中快速转向及定向排列，从而产生撕裂和相互摩擦引起发热，可以保证能量的快速传递和充分利用，易于溶出和释放。同时，采用低共熔溶液可以保护环境，减小废液对于人类的污染产生。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述步骤(1)中从番石榴叶中提取黄酮类化合物的方法为超声波提取技术，其工艺条件为：以75％乙醇为溶液，控制料液比为1：28，42℃下提取30min。超声波提取技术是利用超声波的空化作用加强番石榴有效成分的浸出提取，另外，超声波的次级效应如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速目标成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述步骤(1)中黄酮类化合物还经过高速逆流色谱技术分离纯化过程，其工艺条件为：将石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水作为两相溶剂体系，其各组分按照体积比为2∶2∶3∶1的比例配制，静置6-10h得到分别作为上、下相的溶液组分，用最大流速将上相注入HSCCC分离管中，待上相充满整个管路后调整主机转速为720r/min，再以1.5mL/min流速注入下相；待流动相从柱出口流出，两相在分离管中达到动态平衡后，由进样阀注入经超声波提取技术得到的溶液。在超声波提取技术之后，利用高效逆流色谱(HSCCC)技术用以分离纯化黄酮类化合物，能得到更高纯度的黄酮提取液，有利于提高最终产品的品质。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述步骤(1)中的黄酮类化合物经冷冻干燥后再加入含灰色链霉菌的液体培养基中培养。上述番石榴叶黄酮苷元的生产方法中，优选的，所述步骤(3)中振荡酶解时采用纤维素酶与果胶酶的混合溶剂。纤维素酶与果胶酶的混合溶剂可以将油溶性的类黄酮转化为易溶于水的糖苷类溶于酶解溶液而利于提取，提高黄酮含量，并通过酶反应将植物组织分解，使提取传质阻力减小，加快反应进程。此外，可使提取液中的杂质分解去除，从而简化后续分离纯化工序。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1、本专利技术采用含灰色链霉菌的液体培养基培养黄酮类化合物，灰色链霉菌催化黄酮母核上的羟基成甲氧基，此过程为生物解毒的方式之一，也是天然产物结构修饰产生稳定化合物的重要反应之一，减少了产物异构、消旋和重排反应等不利因素。另外，微生物发酵作用大多在中性、室温条件下作用，能较方便的控制反应环境，减少了在大规模生产时，对厂房温度、湿度等控制条件的大成本投入，经济节约。2、本专利技术番石榴叶黄酮苷元的生产方法简便、易于操作，最终得到的黄酮苷元的杂质含量小，后续提纯工艺简单。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例5中黄酮提取设备的结构示意图。图2为图1中A-A面的剖切视图。图例说明：1、多功能罐；2、解吸柱；3、旋转耙；4、浸出循环罐；5、导流筒；6、倒圆锥形气体挡板；7、带电磁阀的通气管；8、固定杆；9、夹套加热装置；101、第一管道；102、第二管道；103、第三管道；104第四管道；105、第二通气加压管；107、第一通气加压管；108、排气管。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本专利技术作更全面、细致地描述，但本专利技术的保护范围并不限于以下具体的实施例。除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种番石榴叶黄酮苷元的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从番石榴叶中提取黄酮类化合物；(2)将步骤(1)中得到的黄酮类化合物加入到含灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的液体培养基中培养，振荡发酵培养得到发酵溶液；(3)将步骤(2)中得到的发酵溶液振荡酶解得到酶解溶液；(4)将步骤(3)中得到的酶解溶液静置、离心，沉淀用甲醇溶解，过滤后得到含有黄酮苷元的甲醇溶液。

【技术特征摘要】
1.一种番石榴叶黄酮苷元的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从番石榴叶中提取黄酮类化合物；(2)将步骤(1)中得到的黄酮类化合物加入到含灰色链霉菌(Streptomycesgriseus)的液体培养基中培养，振荡发酵培养得到发酵溶液；(3)将步骤(2)中得到的发酵溶液振荡酶解得到酶解溶液；(4)将步骤(3)中得到的酶解溶液静置、离心，沉淀用甲醇溶解，过滤后得到含有黄酮苷元的甲醇溶液。2.根据权利要求1所述的番石榴叶黄酮苷元的生产方法，其特征在于，所述含灰色链霉菌的液体培养基为标准马铃薯培养基，其配方为：去皮新鲜马铃薯200g、葡萄糖20g、MgSO4·7H2O1.5g、KH2PO43g、1L蒸馏水。3.根据权利要求1所述的番石榴叶黄酮苷元的生产方法，其特征在于，所述含灰色链霉菌的液体培养基中灰色链霉菌的接种量为每毫升培养基中接种500-200000个孢子。4.根据权利要求3所述的番石榴叶黄酮苷元的生产方法，其特征在于，所述含灰色链霉菌的液体培养基中灰色链霉菌的接种量为每毫升培养基中接种10000-60000个孢子。5.根据权利要求1所述的番石榴叶黄酮苷元的生产方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述黄酮类化合物的加入量与液体培养基的质量比控制为(0.5-1.5)：5。6.根据权利要求1-5中任一项所述的番石榴叶黄酮苷元的生产方法，其特征在于，所述步骤(1)中从番石榴叶中提取黄酮类化合物的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴学玲，曾伟民，周翔宇，周智广，胡芳，谢志国，罗奎，李交昆，申丽，余润兰，刘元东，刘阿娟，邱冠周，
申请(专利权)人：中南大学，中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：湖南,43