一株巨大芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物应用领域，具体涉及一株巨大芽孢杆菌及其应用。具体技术方案为：一株巨大芽孢杆菌，于2018年6月11日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；菌种名称:巨大芽孢杆菌DFN1，保藏编号为CGMCC No.15925。本发明专利技术提供了一株巨大芽孢杆菌，对常见恶臭来源物质，尤其是氨气、硫化氢、VOC等，具有极佳的处理效果。本发明专利技术还提供了一种利用巨大芽孢杆菌制备的除臭液，针对VOC的除臭效果可达到95％以上，且除臭持续时间长，显著优于现有市售的其它同类型产品，可实际推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一株巨大芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于微生物应用领域，具体涉及一株巨大芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
随着社会经济的发展，人们对生活所处的环境的要求也随之增高。恶臭作为一种重要的环境污染物，其物质种类繁多，影响范围大，其治理也逐渐得到人们的重视。禽畜粪便及生活垃圾中存在大量的致臭微生物，在垃圾填埋和堆肥过程中会产生大量的氨气和硫化氢，不仅对人的身体造成严重危害，还污染环境、污染地下水源等。目前常规的除臭方法有：物理除臭法、化学除臭法、生物除臭法。物理除臭法是依靠固、液、气三相之间的转化消除恶臭气味，仅仅只降低了嗅觉对气味的感知程度，然而其化学性质没有根本改变。化学除臭法是添加某些化学试剂，改变其化学结构以破坏其致臭基团，转变为无臭味或臭味较低的物质。生物法是近年来开发的一种新型的恶臭处理方法，因其投资和运行成本低、处理效率高、不产生二次污染等优点，正逐步发展成除臭的主流方法。在堆肥厂、垃圾填埋场除臭方法中，采用生物抑菌除臭能够解决化学杀菌除臭带来的问题，做到无异味，无二次污染等。生物抑菌除臭利用菌株繁殖速度迅速，存活时间长，在生长过程中还会产生其他有益菌素，对人畜无危害，不污染环境，抑菌除臭效果持续而且较强，是堆肥除臭、公厕除臭、垃圾填埋场等环境净化的更好选择，可广泛推广应用。房屋装修等产生大量的VOC(挥发性有机化合物，volatileorganiccompounds)，也属于恶臭来源的一种对人体健康产生巨大影响，会伤及肝、肾、大脑、神经系统等，造成极为严重的危害。但针对VOC处理的微生物研究目前还处于初级阶段，适用性微生物较少，处理效果不理想。专利技术内容本专利技术的目的是提供一株巨大芽孢杆菌及其应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案是：一株巨大芽孢杆菌，于2018年6月11日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；菌种名称:巨大芽孢杆菌DFN1，保藏编号为CGMCCNo.15925。相应的，一株巨大芽孢杆菌，其16SrDNA测序结果如SEQIDNO1所示。相应的，所述巨大芽孢杆菌在处理恶臭物质中的应用。优选的，所述巨大芽孢杆菌在处理氨气或硫化氢中的应用。优选的，将所述巨大芽孢杆菌制备为除臭剂，所述除臭剂中，活菌数为1×109CFU/ml。优选的，除臭剂用量为50ml/m2。优选的，巨大芽孢杆菌在处理VOC中的应用。优选的，将所述巨大芽孢杆菌制备为除臭剂，所述除臭剂中，活菌数为1×109CFU/ml。优选的，除臭剂用量为100ml/m2。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术提供了一株巨大芽孢杆菌，对常见恶臭来源物质，尤其是氨气、硫化氢、VOC等，具有极佳的处理效果。2、本专利技术还提供了一种利用巨大芽孢杆菌制备的除臭液，针对VOC的除臭效果可达到95％以上，且除臭持续时间长，显著优于现有市售的其它同类型产品，可实际推广应用。具体实施方式本文涉及的培养基如下：1、维氏盐溶液配制(g/L)：K2HPO45.0，MgSO4·7H2O2.5，NaCl2.5，FeSO4·7H2O0.05g，MnSO40.05g，pH＝7.0。2、富集培养基(g/L)：(NH4)2SO42.0,琥珀酸钠13.85，乙酸钠5.0，葡萄糖5.0，维氏盐溶液50mL,pH＝7.0。3、分离培养基(g/L)：(NH4)2SO40.47,琥珀酸钠5.62,维氏盐溶液50mL,pH＝7.0。4、分离固体培养基：在分离培养基的基础上加2.0琼脂，121℃，30min高温灭菌处理。用于异养硝化菌的分离纯化及脱氨特性研究。5、牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，加水至1L，pH＝7，121℃，30min高温灭菌处理。6、牛肉膏固体培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基的基础上添加2.0％的琼脂，用于菌株的形态观察、保存以及活化。7、液体扩大发酵培养基：牛肉膏5g、葡萄糖10g、蛋白胨5g、化钠5g，加水至1000ml，pH7.0～7.4。实施例一：菌株的采集、分离和鉴定1、菌株的采集和分离：(1)富集样品采自四川某污水处理厂二沉池的活性污泥。将采集的活性污泥与堆肥样品混合在好氧条件下用富集培养基进行驯化，每代驯化5天，驯化4代共计20天，随后进行梯度稀释，从10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8稀释度下吸取0.25mL，分别于分离培养基平板涂布，30℃恒温培养，经多次分离后获得多个菌落。(2)挑选形态各异、生长旺盛的菌株14株，30℃、转速160r/min，将14株菌进行反复划线培养三次以上，获得纯菌株，分别编号为：DNF1-14号菌株，在牛肉膏固体培养基上培养24h后于4℃保存。(3)将14株菌株分别用牛肉膏固体培养基进行培养，将培养得到的菌株1ml分别接种于装有100g粪便的1L烧杯中，在温度为30℃的条件下作用3d后，分别测量14个烧杯中的恶臭强度、氨气浓度、硫化氢浓度。其中，接种1号菌株的烧杯中臭气浓度降低了46.5％、氨气浓度降低了55.6％，硫化氢浓度降低了52.4％，远远高于其他13个菌株，初步判断该菌株除臭能力最强，命名为DNF1。2、菌株鉴定(1)形态特征：通过观察和检测发现，该细胞为长杆状，革兰氏阳性菌，体长1.2～4.0μm，能运动，在37℃培养2～3天形成芽孢，芽孢大小0.6～1.5μm，芽孢呈椭圆形。菌落表面光滑不透明，呈污白色。具体鉴定特征如表1所示。表1DNF1菌株的生理生化试验结果检测项目检测结果检测项目检测结果革兰氏染色G+牛奶胨化+菌体形状长杆状凝胶液化+接触酶试验+淀粉水解+运动性+氧化酶试验+硝酸盐还原试验-好/厌氧性好氧葡萄糖+甘露醇+L-阿拉伯糖+4％NaCl+木糖+50℃-附：“G+”表示该菌为革兰氏阳性，“+”表示可以利用或可以生长，“-”表示无法利用或不能生长。(2)分子生物学鉴定：提取该菌株的基因组DNA，PCR扩增16SrDNA片段。得到的16SrDNA序列产物由成都擎科生物工程技术服务有限公司测序。扩增16SrDNA的引物：F-primerF27：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；R-primerR1492：5’-GGCTACCTTGTTACGACTT-3’。PCR反应体系为：2×mix：12.5μL、F-primerF27：1.0μL、R-primerR1942：1.0μL、DNA基因组：1.0μLμL、ddH2O：9.5μL。PCR反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸100s，29个循环，72℃最终延伸5min，4℃保存。取3μL的PCR反应产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳实验。测得的序列如SEQIDNO1所示。登陆NCBI网站，通过Blast程序与Genbank中核酸数据进行比对分析，比对结果显示该菌株为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)。该菌株已于2018年6月11日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter)保藏,保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；菌种名称:巨大芽孢杆菌(Baci本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株巨大芽孢杆菌，其特征在于：于2018年6月11日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；菌种名称:巨大芽孢杆菌DFN1，保藏编号为CGMCC No.15925。

【技术特征摘要】
1.一株巨大芽孢杆菌，其特征在于：于2018年6月11日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；菌种名称:巨大芽孢杆菌DFN1，保藏编号为CGMCCNo.15925。2.一株巨大芽孢杆菌，其特征在于：其16SrDNA测序结果如SEQIDNO1所示。3.权利要求1或2所述巨大芽孢杆菌在处理恶臭物质中的应用。4.根据权利要求3所述巨大芽孢杆菌在处理恶臭物质中的应用，其特征在于：所述巨大芽孢杆菌在处理氨气或硫化氢中的应用。5.根据权利要求4所述巨大芽孢杆菌在处理恶臭物质中的应用，其特征在于：将所述巨大芽孢杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯正远，闫志英，冯正伟，
申请(专利权)人：成都友益佳环保设备工程有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51