快速检测药材中的黄曲霉毒素的方法技术

本发明专利技术涉及快速检测药材中的黄曲霉毒素的方法。该方法包括如下步骤：提供用于检测黄曲霉毒素的胶体金试纸卡；样品提取：取待检药材或其饮片的粉末，添加乙腈，超声波振荡，离心，取上清液适量，加至稀释缓冲液中混匀，得样品提取液，待检测；样品测定：移取样品提取液，点于胶体金试纸卡上，在45℃条件下恒温孵育，用读数仪对检测条进行读数测定，并根据上样量和样品稀释倍数计算药材中的黄曲霉毒素含量。本发明专利技术方法可以在5分钟检测出结果，这种方法可以准确定量检测各种根及根茎类中药材。本发明专利技术所提供的试纸卡具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、检测结果准确、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

Rapid determination of aflatoxin in medicinal materials

The invention relates to a method for rapid detection of aflatoxins in medicinal materials. The method includes the following steps: providing colloidal gold test paper card for aflatoxin detection; sample extraction: taking the powder of the medicine or its decoction pieces to be tested, adding acetonitrile, ultrasonic vibration, centrifugation, taking appropriate amount of supernatant, adding it to dilution buffer, mixing, obtaining sample extract, sample determination: removing samples; The extract was dotted on the colloidal gold test paper card and incubated at constant temperature at 45 C. The test strip was measured by a reader. The content of aflatoxin in the medicinal materials was calculated according to the sample size and dilution ratio. The method of the invention can detect the results in 5 minutes, and the method can accurately and quantitatively detect various root and rhizome traditional Chinese medicines. The test paper card provided by the invention has the characteristics of simple operation, high sensitivity, fast detection speed, accurate detection result and low cost, and is suitable for screening and on-site monitoring of a large number of samples.

【技术实现步骤摘要】
快速检测药材中的黄曲霉毒素的方法
本专利技术属于医药
，特别是属于医药检测
，涉及一种快速检测中药材中黄曲霉毒素总量的方法，以及该方法所用的试纸卡，特别是涉及一种胶体金试纸卡快速检测中药材中黄曲霉毒素总量的方法。
技术介绍
黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。AFT由黄曲霉菌和寄生曲霉菌等产毒菌株产生的次生代谢产物，是自然界中已发现的理化性质最稳定的一类毒素。已知的AFT有20多种，常见的有黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2，其中黄曲霉毒素B类和G类具有很强的肝毒性，尤其B1的毒性最强，也是致癌性最强的一种物质，在1993年被世界卫生组织癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等农作物。黄曲霉毒素不仅广泛存在于玉米、麦类、稻谷等农产品以及坚果、花生等多种食用植物中，也存在于中药等药用植物中。中药材材种类繁多，种植地区广泛，多数药材在生产、加工、贮藏、运输的过程中，很容易发生霉变而被黄曲霉毒素污染。有学者在对中药黄曲霉毒素的污染情况进行调研时发现，中药材、饮片及中成药被黄曲霉毒素污染的情况十分普遍。因其剧毒和强致癌性，且对于其污染预防研究的薄弱，黄曲霉毒素成为国内外政府和消费者监管与关注重点。针对农产品及食品，我国及世界各国就其污染问题采取控制措施，即设置严格的限量标准来保障农产品质量安全。而相较之下，对于中药中的污染控制甚为薄弱。《中国药典》(2015版)开始对远志等19种药材及其饮片品种项下增加黄曲霉毒素检查项目。药典限量为黄曲霉毒素B1不得过5μg/kg，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量不得过10μg/kg。其他中药材及饮片均未控制尚未有标准对其黄曲霉毒素的限量进行规定。根及根茎类中药为中药中品种种类最多的一类，《中国药典》(2015年版)中根及根茎类中药占收载药材饮片数量的近1/3。其次，根及根茎类中药原植物长期接触土壤、水和腐殖质，并且含有糖类、粘液质、淀粉、蛋白质及油类等成分增加了其感染黄曲霉毒素的风险。另外如远志等饮片的特殊炮制方法，需要水中长时间浸泡等也增加了霉变感染黄曲霉毒素的可能。所以对于根及根茎类中药安全性的监管和黄曲霉毒素污染的控制势在必行。尤其是中成药建立高灵敏度的黄曲霉毒素测定方法有着迫切的需求。目前，对黄曲霉毒素检测的方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、免疫分析法、质谱法、免疫亲和荧光法等。高效液相色谱法灵敏度高、分离能力强、特异性好等，但有些样品需要作彻底有效的前处理，不适合于大批量样品的检测，并且设备仪器昂贵，不易普及。酶联免疫吸附法是目前常使用的一种检测方法，它具有快速、灵敏、可定量、对样品纯度要求不高等优点，特别适用于大批量样品的检测，但由于需要酶标仪和操作熟练的人员以及检测时间相对较长，所以不适合现场快速检测。胶体金免疫层析法与酶联免疫法相比检测时间更短，稳定性好、操作简便、无需其他仪器设备，结果判断直观可靠，适用于进行现场快速筛选。现有技术公开了一些检测某些食品或粮食中的黄曲霉毒素。例如，CN107688087A(201710763310.2，深圳)公开了一种黄曲霉毒素M1的检测凝胶柱及黄曲霉毒素M1的检测方法，黄曲霉毒素M1的检测凝胶柱包括空心柱以及填充在空心柱内的检测层和质控层。检测时，将待测样品和化学发光标记物标记的黄曲霉毒素M1酶标抗原加入到该黄曲霉毒素M1的检测凝胶柱中并流经检测层和质控层。待测样品和化学发光标记物标记的黄曲霉毒素M1酶标抗原两者共同竞争检测层中的黄曲霉毒素M1单克隆抗体，根据检测层的颜色和质控层的颜色判断待测样品中是否含有黄曲霉毒素M1。据信上述黄曲霉毒素M1的检测凝胶柱携带方便，快速、灵敏的检测待测样品中是否含有黄曲霉毒素M1，适合现场大量本的快速检测。CN104422686A(201310397266.X，蓝农谷)公开了一种测定黄曲霉毒素的方法，包括以下步骤：(1)待用液1的制备(2)待用液2的制备(3)制备HRP(辣根过氧化物酶)修饰的R1(4)制备HRP修饰的R2(5)黄曲霉毒素的检测。红色罗丹明B既不会引起浓度淬灭，也不会导致光强不足。云母粉末的加入使草酸酯发光体系的发光寿命显著延长。三联吡啶钌和化学发光具有检测灵敏度高、线性范围宽等优点，能够更加有效的检测黄曲霉毒素。本专利技术具有更低的毒性、更高的闪点和更低的蒸气压这些优良特性。通过检测液态奶中黄曲霉毒素的含量，并利用加标回收率法得到回收率在98.4％-100.4％，表明此方法在测定黄曲霉毒素时具有良好的准确度。CN106290889A(201610679285.5，广东)公开了一种黄曲霉毒素B1的检测方法，包括以下步骤：前处理：以提取溶液对待测样品进行提取，随后加入稀释液，得到待检溶液；所述提取溶液为体积百分浓度为40％-100％的甲醇水溶液和/或乙腈，所述稀释液为水或缓冲盐水溶液；检测：取所述待检溶液，加入到包被了黄曲霉毒素B1抗原的酶标板上，再加入黄曲霉毒素B1抗体溶液，温育，加入辣根过氧化酶标记的羊抗鼠二抗进行酶活性的放大，洗板，加入底物显色剂、终止液，然后以酶标仪测定吸光度值，计算得到待测样品中黄曲霉毒素B1的含量。据信该检测方法避免了氮吹等前处理步骤，具有步骤简单，稳定性好的优点，能够快速检出黄曲酶毒素B1的残留量。CN106872619A(201710272829.0，博泰)公开了黄曲霉毒素的测定方法，其创新点在于：包括以下步骤：1)称取样品，加入乙腈-水的提取液搅拌45分钟，其中乙腈和水的体积比为20:12，然后用定性滤纸过滤；2)样品测定：色谱条件为：液相色谱柱AgilentSBC-18(25cm×4.6mm)；流动相：体积百分比为85％的乙腈和15％的水；柱温：45℃，进样量：25mL；流速：1.0mL/min；取8mL提取过滤液至多功能净化柱，净化柱的收集池内转移2mL净化液到衍生瓶中，60℃下氮吹后，加500mL正己烷和100mL三氯乙酸混匀，45s后于56℃烘箱衍生15min，室温下干燥后以500uL水-乙腈溶解，混匀后全部进自动进样瓶中，测定。据信该专利技术的检测方法操作简单，快速，结果精确可靠；污染少，安全性高，减少对操作人员和环境的污染；检测成本较低，易于推广。CN108051520A(201711345652.9，健牛)针对普洱茶中共存物质对黄曲霉毒素B1测定有严重干扰的难题，制备了两种对黄曲霉毒素B1有特异性吸附，又对干扰物质起到净化作用的功能性磁性纳米材料，在使用时采用两种材料的混合物，将吸附及净化同时完成，结合高效液相色谱-荧光检测器进行普洱茶中黄曲霉毒素B1测定，有准确的测定结果，将建立的方法与HPLC-MS/MS比对，结果一致。据信该专利技术方法制备的功能性磁性四氧化三铁纳米粒子充分利用了聚多巴胺对黄曲霉毒素B1的强吸附作用，阳离子表面活性剂CTAB好的分散作用，多巴胺制备的CQDs表面的亲水作用，使用两种功能性磁性纳米材料的混合物对普洱茶中AFB1既有净化又有吸附的双重作用。由于制备材料为纳米级，材料用量少，只需几毫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测药材中黄曲霉毒素的方法，该方法包括如下步骤：(1)提供用于检测黄曲霉毒素的胶体金试纸卡；(2)样品提取：取待检药材或其饮片的粉末1克重量份，添加1～8毫升体积份的乙腈，超声波振荡2～5min，2500‑5000rpm离心2～10min，取上清液适量，加至5～50倍量的稀释缓冲液中混匀，得样品提取液，待检测；(3)样品测定：移取步骤(2)所得样品提取液100～300μl，点于胶体金试纸卡上，在45℃条件下恒温孵育4‑6分钟，用读数仪对检测条进行读数测定，并根据上样量和样品稀释倍数计算药材中的黄曲霉毒素含量。

【技术特征摘要】
1.检测药材中黄曲霉毒素的方法，该方法包括如下步骤：(1)提供用于检测黄曲霉毒素的胶体金试纸卡；(2)样品提取：取待检药材或其饮片的粉末1克重量份，添加1～8毫升体积份的乙腈，超声波振荡2～5min，2500-5000rpm离心2～10min，取上清液适量，加至5～50倍量的稀释缓冲液中混匀，得样品提取液，待检测；(3)样品测定：移取步骤(2)所得样品提取液100～300μl，点于胶体金试纸卡上，在45℃条件下恒温孵育4-6分钟，用读数仪对检测条进行读数测定，并根据上样量和样品稀释倍数计算药材中的黄曲霉毒素含量。2.根据权利要求1的方法，其中所述药材是根茎类药材。3.根据权利要求1的方法，其中所述药材是根茎类药材，选自：太子参、西洋参、板蓝根、黄芪、甘草片、远志、红参、白参、半夏、白术、三七、何首乌、泽泻、玉竹、白茅根；例如是玉竹、白茅根。4.根据权利要求1的方法，其中所述胶体金试纸卡用于定量测定黄曲霉毒素，包括：样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬；硝酸纤维素膜黏附在PVC背衬上，样品垫和吸水垫分别黏附在...

【专利技术属性】
技术研发人员：范妙璇，傅欣彤，杨文良，郭洪祝，陈有根，
申请(专利权)人：北京市药品检验所，
类型：发明
国别省市：北京,11