肿瘤细胞悬浮培养物和相关方法技术

提供用于及时和高效增殖来自患者的人类肿瘤细胞簇的基于悬浮液的细胞培养系统和培养基，和评估所述肿瘤细胞和所述患者对一种或多种治疗剂的潜在反应性的相关方法。

Suspension Culture of Tumor Cells and Related Methods

Provides a suspension-based cell culture system and medium for timely and efficient proliferation of human tumor cell clusters from patients, and related methods for assessing the potential reactivity of the tumor cells and the patients to one or more therapeutic agents.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肿瘤细胞悬浮培养物和相关方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.5119(e)要求2016年3月9日提交的PCT/CN2016/075947的优先权，所述专利以全文引用的方式并入。
本公开的实施例涉及用于及时和高效增殖来自患者的人类肿瘤细胞簇的基于悬浮液的细胞培养系统和培养基，和评估肿瘤细胞和患者对一种或多种治疗剂的潜在反应性的相关方法。
技术介绍
尽管不断努力以改进诊断和治疗，但是癌症在世界范围内仍然是死亡的主要原因。癌症的多样性或异质性呈现开发新疗法的障碍并且还使得难以鉴别可能的应答者。此外，许多癌症疗法受到原发性和获得性抗性的挑战，包括附加点突变和绕过治疗试剂的靶标的替代路径。未来成功的疗法将可能依赖于引起肿瘤进展和转移性过程的事件的全面分析，连同可容易地被操纵以便精确评估化疗剂和组合的功效的相关模型体系的开发。作为一个实例，使用基质嵌入的、三维(3D)培养物的癌细胞的原代培养物日益用于研究癌症生物学和预测个体患者的化学敏感度。然而，这类基质嵌入的癌细胞原代培养物的条件目前尚未优化。此外，这类原代培养物可为费力的，并且包括潜在的低癌细胞活力、宿主细胞的污染和难以繁殖的结果，以及其它潜在的问题。因此，有必要开发方法和组合物，通过所述方法和组合物，原代癌细胞可以3D方式与细胞系一样可行地和有效地以及以及时的方式培养。
技术实现思路
本公开的实施例涉及(一种或多种)培养基悬浮液，包含来自人类患者的人类肿瘤细胞簇的群体，其中培养基悬浮液在约14天内提供肿瘤细胞簇的至少约10％增殖。在某些实施例中，培养基悬浮液在约14、13、12、11、10、9、8、7、6或5天内提供人类肿瘤细胞簇的至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％增殖。在一些实施例中，培养基悬浮液在约7天内提供人类肿瘤细胞簇的至少约20％-30％增殖。在某些实施例中，培养基悬浮液在约7天内提供人类肿瘤细胞簇的至少约60％增殖。在某些实施例中，培养基悬浮液包含成分确定的培养基。在一些实施例中，培养基悬浮液为无血清或大体上无血清的。在某些实施例中，培养基悬浮液包含或进一步包含选自DMEM/F-12、Wnt3A、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、胆固醇、B细胞活化因子(BAFF)和2-巯基乙醇中的一种或多种组分。在一些实施例中，培养基悬浮液包含选自DMEM/F-12、Wnt3A、bFGF、胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、胆固醇、B细胞活化因子(BAFF)和2-巯基乙醇的组分中的2、3、4、5、6、7、8或9种。在具体实施例中，培养基悬浮液包含DMEM/F-12、Wnt3A、bFGF、胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、胆固醇、B细胞活化因子(BAFF)和2-巯基乙醇。在某些实施例中，培养基悬浮液包含或进一步包含选自烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、成纤维细胞生长因子10(FGF10)和VO-OHpic中的一种或多种组分。在一些实施例中，培养基悬浮液包含选自烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、FGF10和VO-OHpic的组分中的2、3、4、5或6种。在具体实施例中，培养基悬浮液包含烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、FGF10和VO-OHpic。在某些实施例中，培养基悬浮液包含或进一步包含选自表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、N2补充剂、B27、前列腺素E2(PGE-2)和N-乙酰基-L-半胱氨酸中的一种或多种组分。在某些实施例中，培养基悬浮液包含选自EGF、HGF、IGF、VEGF、PDGF、N2、B27、PGE2、N-乙酰基-L-半胱氨酸的组分中的2、3、4、5、6、7、8或9种。在具体实施例中，培养基悬浮液包含EGF、HGF、IGF、VEGF、PDGF、N2、B27、PGE2和N-乙酰基-L-半胱氨酸。在某些实施例中，培养基悬浮液包含或进一步包含烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、EGF、HGF、IGF、VEGF、PDGF、N2、B27、PGE2、N-乙酰基-L-半胱氨酸、FGF10和VO-OHpic。在一些实施例中，培养基悬浮液不包含胞外基质组分，例如基质胶、胶原蛋白、层粘连蛋白或纤维结合蛋白。在某些实施例中，培养基悬浮液包含为来自人类患者的肺癌细胞、结肠癌细胞、胃癌细胞或乳癌细胞的人类肿瘤细胞簇。在一些实施例中，培养基悬浮液包含为自异种移植有来自人类患者的人类肿瘤细胞和/或组织的免疫缺陷动物中分离的人类肿瘤细胞簇。在某些实施例中，培养基悬浮液包含为直接自从人类患者去除的肿瘤样品中分离的人类肿瘤细胞簇，所述肿瘤样品任选地选白手术样品、活检体、肋膜积液和腹水。还包括使人类肿瘤细胞增殖的方法，包含从样品中获得人类肿瘤细胞的群体，和在如本文所描述的培养基悬浮液中培养人类肿瘤细胞簇的群体。一些方法包含在培养基悬浮液中培养人类肿瘤细胞簇持续约14天或更少。一些方法包含在培养基悬浮液中培养人类肿瘤细胞簇持续约14、13、12、11、10、9、8、7、6或5天或更少。具体方法包含在培养基悬浮液中培养人类肿瘤细胞簇持续约7天或更少。还包括测试人类患者对治疗剂的反应性的方法，包含获得或接收来自人类患者的肿瘤细胞簇的群体；在根据前述权利要求中任一项所述的培养基悬浮液中培养肿瘤细胞簇的群体；将治疗剂施用到培养基悬浮液；和测量在肿瘤细胞的群体中的肿瘤细胞增殖和/或肿瘤细胞凋亡，其中肿瘤细胞增殖的降低和/或肿瘤细胞凋亡的诱导指示人类患者对治疗剂的反应性，并且其中缺乏肿瘤细胞增殖的降低和/或肿瘤细胞凋亡的诱导指示人类患者对治疗剂的抗性。一些方法包含在与在培养基悬浮液中培养肿瘤细胞簇的群体的同一天施用治疗剂。某些方法包含于在培养基悬浮液中培养肿瘤细胞簇的群体之后的至少一天施用治疗剂。具体方法包含于在培养基悬浮液中培养肿瘤细胞簇的群体之后的约或在约1、2、3、4、5、6或7天内施用治疗剂。一些方法包含在施用治疗剂的约14天内测量在肿瘤细胞的群体中的肿瘤细胞增殖和/或肿瘤细胞凋亡。一些方法包含在施用治疗剂的约14、13、12、11、10、9、8、7、6或5天内测量在肿瘤细胞的群体中的肿瘤细胞增殖和/或肿瘤细胞凋亡。特定方法包含在施用治疗剂的约7、6或5天内测量在肿瘤细胞的群体中的肿瘤细胞增殖和/或肿瘤细胞凋亡。在一些实施例中，测量肿瘤细胞增殖的步骤包含测量细胞增殖标志物。在一些实施例中，细胞增殖标志物选自3H-胸苷、溴脱氧尿苷(BrdU)、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(Edu)、Ki-67和增殖细胞核抗原(PCNA)中的一种或多种。在某些实施例中，测量肿瘤细胞凋亡的步骤包含测量细胞凋亡标志物。在一些实施例中，细胞凋亡标志物选自荧光染料标记的半胱天冬酶抑制剂(FLICA)、半胱天冬酶活化、聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解、DRAQ5、DRAQ7和末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)dUTP缺口末端标记(TUNEL)试验中的一种或多种。附图说明图1A-1D示出将肿瘤细胞簇成功地自以手术方式从患者去除的结肠/直肠本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养基悬浮液，其包含来自人类患者的人类肿瘤细胞簇的群体，其中所述培养基悬浮液在约14天内提供所述肿瘤细胞簇的至少约10％增殖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.09 CN PCT/CN2016/0759471.一种培养基悬浮液，其包含来自人类患者的人类肿瘤细胞簇的群体，其中所述培养基悬浮液在约14天内提供所述肿瘤细胞簇的至少约10％增殖。2.根据权利要求1所述的培养基悬浮液，所述培养基悬浮液在约14、13、12、11、10、9、8、7、6或5天内提供所述人类肿瘤细胞簇的至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％增殖。3.根据权利要求1或2所述的培养基悬浮液，所述培养基悬浮液在约7天内提供所述人类肿瘤细胞簇的至少约20％至30％增殖。4.根据前述权利要求中任一项所述的培养基悬浮液，所述培养基悬浮液在约7天内提供所述人类肿瘤细胞簇的至少约60％增殖。5.根据前述权利要求中任一项所述的培养基悬浮液，其包含成分确定的培养基。6.根据前述权利要求中任一项所述的培养基悬浮液，所述培养基悬浮液为无血清的。7.根据权利要求5或6所述的培养基悬浮液，其包含选自DMEM/F-12、Wnt3A、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、胆固醇、B细胞活化因子(BAFF)和2-巯基乙醇中的一种或多种组分。8.根据权利要求7所述的培养基悬浮液，其包含选自DMEM/F-12、Wnt3A、bFGF、胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、胆固醇、B细胞活化因子(BAFF)和2-巯基乙醇的组分中的2、3、4、5、6、7、8或9种。9.根据权利要求8所述的培养基悬浮液，其包含DMEM/F-12、Wnt3A、bFGF、胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、胆固醇、B细胞活化因子(BAFF)和2-巯基乙醇。10.根据权利要求5至9中任一项所述的培养基悬浮液，其包含选自烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、成纤维细胞生长因子10(FGF10)和VO-OHpic中的一种或多种组分。11.根据权利要求10所述的培养基悬浮液，其包含选自烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、FGF10和VO-OHpic的组分中的2、3、4、5或6种。12.根据权利要求11所述的培养基悬浮液，其包含烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、FGF10和VO-OHpic。13.根据权利要求7至12中任一项所述的培养基悬浮液，其包含选自表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、N2补充剂、B27、前列腺素E2(PGE-2)和N-乙酰基-L-半胱氨酸中的一种或多种组分。14.根据权利要求13所述的培养基悬浮液，其包含选自EGF、HGF、IGF、VEGF、PDGF、N2、B27、PGE2、N-乙酰基-L-半胱氨酸的组分中的2、3、4、5、6、7、8或9种。15.根据权利要求14所述的培养基悬浮液，其包含EGF、HGF、IGF、VEGF、PDGF、N2、B27、PGE2和N-乙酰基-L-半胱氨酸。16.根据权利要求10至15中任一项所述的培养基悬浮液，其包含烟碱酰胺、头蛋白、R-反应素-1、Y27632、EGF、HGF、IGF、VEGF、PDGF、N2、B27、PGE2、N-乙酰基-L-半胱氨酸、FGF10和VO-OHpic。17.根据前述权利要求中任一项所述的培养基悬浮液，所述培养基悬浮液不包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈一友，杨振，张一洪，
申请(专利权)人：北京智康博药肿瘤医学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11