组蛋白脱乙酰酶抑制剂用于增强免疫治疗的用途制造技术

公开了包含I类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和程序性细胞死亡蛋白1(PD‑1)抑制剂的组合的组合物，所述组合物用于增强抗肿瘤活性。还公开了在肾细胞癌中施用这些组合物作为抑制调节性T细胞的免疫治疗的方法。

Histone deacetylase inhibitors for enhanced immunotherapy

A combination comprising a class I histone deacetylase (HDAC) inhibitor and a programmed cell death protein 1 (PD 1) inhibitor is disclosed for enhancing antitumor activity. The application of these compositions in renal cell carcinoma as immunotherapy for suppressing regulatory T cells is also disclosed.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】组蛋白脱乙酰酶抑制剂用于增强免疫治疗的用途相关申请的交叉引用本申请要求2016年1月28日提交的美国临时申请第62/288,121号的优先权，该临时申请特此通过引用整体并入本文。关于提交序列表的支持声明本文提供了载有名为“IURTC_2016-086-02_ST25.txt”的文件的计算机可读形式的序列表，其大小为878字节(在MICROSOFTWINDOWSEXPLORER中测量)，并且通过引用并入本文。该序列表由SEQIDNO：1-3组成。
本专利技术大体涉及包含I类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂的组合的组合物。此外，公开了这些组合物用于抑制调节性T细胞和增强在肾细胞癌中的免疫治疗的用途。
技术介绍
在过去十年中，免疫治疗已成为用于治疗实体瘤的最有吸引力且广泛研究的方法之一。然而，癌症免疫治疗目前的临床研究仍显示出非常有限的疗效。已显示，对癌症的免疫耐受性是主要障碍。肿瘤生长和基质建立不仅调节局部微环境而且调节免疫系统的外围组分以诱导多种水平的耐受机制：免疫抑制细胞(例如调节性T细胞(Treg)、髓源抑制细胞和肿瘤相关巨噬细胞)；免疫检查点；和异常水平的循环细胞因子。在这些免疫抑制因子中，Treg已被确定为主要参与者之一。在癌症患者中Treg的数量或功能通常被促进。临床前数据还表明Treg在诱导肿瘤相关抗原耐受性中的作用。更重要的是，免疫治疗(诸如细胞因子和疫苗)自身可以诱导患者中Treg数量或功能的促进。总之，有强有力的证据表明，靶向Treg可以提高免疫治疗的疗效。当前靶向Treg的大多数策略旨在用与细胞表面受体CD25结合的单克隆抗体或配体定向毒素或者用节律性环磷酰胺治疗来消耗Treg。这些消耗方法具有有限的临床益处，可能是由于它们消除活化的T效应细胞(Teff)和诱导Treg补充的副作用。靶向其它表面标志物的策略也存在特异性问题。已经在动物中测试了更多方法以影响Treg细胞内蛋白质表达、功能或信号传导，例如siRNA方法和miRNA方法，其对于可能的临床应用通常具有限制和重要差距。另外，治疗肾细胞癌(RCC)患者的最新进展已经开始使用免疫检查点抑制剂，例如PD-1抑制剂纳武单抗(nivolumab)。PD-1/PD-L1轴通过降低细胞毒性T细胞的抗肿瘤活性而在肿瘤的免疫逃避能力中起重要作用。阻断这种免疫检查点(据报道其在RCC中异常表达)最近显示出有希望在30-40％的ccRCC患者中产生客观反应。由于在晚期肾细胞癌患者中显示出抗PD-1治疗的明显益处，III期临床试验结果导致了纳武单抗的批准。与标准治疗依维莫司相比，纳武单抗患者的总体存活率增加78％，且具有有限的治疗相关的不良事件。然而，尽管有这些令人印象深刻的临床进展，RCC和许多其它实体瘤的免疫治疗仅对一部分患者有益。肿瘤逃避免疫监视仍然是有效治疗RCC患者肿瘤的主要障碍。基于前述内容，本领域需要开发能够靶向抑制Treg的替代免疫治疗，从而可以克服上述限制。
技术实现思路
本公开内容总体上涉及包括I类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂的组合物，所述组合物用于抑制调节性T细胞(Treg)和增强在肾细胞癌中的免疫治疗。特别地，在一个实施方案中，已发现I类HDAC抑制剂恩替诺特(entinostat)增强了PD-1抑制的抗肿瘤作用。在一个方面，本公开内容涉及包含I类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂的组合物。在另一个方面，本公开内容涉及抑制有需要的个体中的调节性T细胞的方法。该方法包括向该个体施用包含I类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂的组合物。附图说明考虑本公开内容的以下详细描述将更好地理解本本公开内容，并且除了上述那些之外的特征、方面和优点将变得明显。这种详细描述参考以下附图，其中：图1A-1F示出恩替诺特在同基因肾细胞癌小鼠模型中改善免疫治疗。(图1A)实验时间线，在第-8天对雌性Balb/c小鼠原位注射1×104个RENCA-Luc细胞。在植入后一周开始每周的生物发光成像并持续实施例2的持续时间。在实施例2的第1天开始处理。(图1B)上：基线生物发光成像。下：终点生物发光成像。总之，这些图像示出了肿瘤生长的体内抑制。(图1C)在实施例2的持续时间内，对照群组、恩替诺特群组、抗PD-1群组和恩替诺特+抗PD-1群组中的每只小鼠的平均辐射[p/s/cm2/sr]。(图1D)每组的终点肿瘤的图像。依次进行实验1和实验2以验证结果。(图1E)以克计的终点肿瘤重量，示出了使用恩替诺特+抗PD-1免疫治疗显著降低了肿瘤大小。(图1F)左：使用10mg/kg抗PD-1的存活研究表明，与对照和单独的抗PD-1免疫治疗相比，用恩替诺特+抗PD-1处理的小鼠的存活曲线显著移动。右：使用20mg/kg抗PD-1的存活研究表明，与对照群组和恩替诺特群组相比，恩替诺特+抗PD-1群组进一步显著移动，此外，抗PD-1免疫治疗的剂量增加延长了小鼠存活期。结果显示为平均值±SEM(*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001)，使用Welch修正的非配对t检验计算肿瘤重量统计值；使用Log-rank(Mantel-Cox)测试计算存活统计值。图2A和2B示出了在同基因ccRCC小鼠模型RENCA中恩替诺特调节的T细胞和肿瘤相关巨噬细胞的反应。在实施例2结束时从小鼠中分离血液和肿瘤样品，并进行流式细胞术分析。(图2A)左：血液的FACS分析显示出媒介物和组合处理对CD4和FoxP3水平的影响。右：血液中存在的调节性T细胞的定量，并且蛋白表达显示为平均荧光强度(MFI)，表明与对照相比，在组合群组中调节性T细胞的存在显著增加，调节性T细胞的功能性转录因子FoxP3减少。(图2B)左：对照或恩替诺特处理后来自RENCA小鼠的肿瘤细胞悬浮液的FACS分析。右：TME中存在的调节性T细胞的定量，并且蛋白表达显示为平均荧光强度(MFI)，表明与对照相比，在组合群组中调节性T细胞的存在略微增加，调节性T细胞的功能性转录因子FoxP3显著减少。图2C描绘了TME中的CD8+T细胞浸润物的定量FACS分析。结果显示CD8+浸润显著增加且CD8+:调节性T细胞比率显著增加。图2D描绘了TME中的肿瘤相关巨噬细胞浸润物的定量FACS分析结果，显示巨噬细胞浸润显著减少并且表明HDACi可能影响先天免疫系统。每板(panel)每个群组n＝3-5个肿瘤/血液样品。结果显示为平均值±SEM(*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001)，使用Welch修正的非配对t检验计算统计值。图3A-3F显示出恩替诺特抑制了从RENCA肿瘤收集的MDSC的免疫抑制能力。(图3A)右：用恩替诺特、抗PD-1免疫疗法或组合处理后，来自RENCA肿瘤的肿瘤细胞悬浮液的FACS分析。左：TME中的单核细胞MDSC和粒细胞MDSC浸润物的定量分析，表示为Ly6C+和Ly6G本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，包含I类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和程序性细胞死亡蛋白1(PD‑1)抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.28 US 62/288,1211.一种组合物，包含I类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述I类HDAC抑制剂选自由下列组成的组：恩替诺特(吡啶-3-基甲基N-[[4-[(2-氨基苯基)氨基甲酰基]苯基]甲基]氨基甲酸酯)、伏立诺他(N-羟基-N'-苯基辛二酰胺)和曲古抑菌素A(TSA)((2E,4E,6R)-7-[4-(二甲基氨基)苯基]-N-羟基-4,6-二甲基-7-氧代-2,4-庚二烯酰胺)、达西司特((E)-3-(4-(((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)(2-羟乙基)氨基)甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺)、丁酸盐或酯、丙戊酸(VPA)、贝利司他((2E)-N-羟基-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酰胺)、帕比司他((2E)-N-羟基-3-[4-({[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}甲基)苯基]丙烯酰胺)、pyroxamide、SK-7041(4-(二甲基氨基)-N-[[4-[(E)-3-(羟基氨基)-3-氧代丙-1-烯基]苯基]甲基]苯甲酰胺)、SK-7068(N-[[4-[3-(羟基氨基)-3-氧代丙-1-烯基]苯基]甲基]-4-吡咯烷-1-基苯甲酰胺)、TrapoxinA(环((S)-γ-氧代-L-α-氨基环氧乙烷辛酰基-L-苯丙氨酰基-L-苯丙氨酰基-D-2-哌啶羰基))、环四肽异羟肟酸类似物(CHAP)、depudecin(4,5:8,9-二脱水-1,2,6,7,11-五脱氧-D-苏型-D-艾杜-十一-1,6-二烯醇)、Mocetinostat(N-(2-氨基苯基)-4-[[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]甲基]苯甲酰胺)，以及它们的组合。3.根据权利要求1所述的组合物，其包含约0.5μM至约2μM的所述I类HDAC抑制剂。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述I类HDAC抑制剂是恩替诺特。5.根据权利要求4所述的组合物，其包含约0.5μM的恩替诺特。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述PD-1抑制剂选自由纳武单抗、派姆单抗及其组合组成的组。7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述PD-1抑制剂是纳武单抗。8.根据权利要求5所述的组合物，其包含约1.0μM的纳武单抗。9.根据权利要求1所述的组合物，其还包含药学上可接受的载体。10.一种抑制有需要的个体中的调节性T细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·皮利，
申请(专利权)人：印第安纳大学研究与技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US