一株芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株芽孢杆菌，该菌株的分类命名为地衣芽孢杆菌，编号为BLCC1‑0441，已于2018年5月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO：M 2018253。该芽孢杆菌既能高产碱性磷酸酶，又能高效发酵，而且具有良好肠道定植性能以及在肉鸡饲养具有良好的应用。

A Bacillus strain and its application

The invention discloses a Bacillus strain, which is classified as Bacillus licheniformis and is numbered BLCC1 0441. The strain has been preserved in the China Typical Culture Preservation Center (CCTCC) on May 7, 2018. The address of the strain is: China. Wuhan University, and its preservation number is CCTCC NO: M 2018253. Bacillus spp. can not only produce alkaline phosphatase, but also ferment efficiently. It also has good intestinal colonization and good application in broiler feeding.

【技术实现步骤摘要】
一株芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一株芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
目前已经阐明有害菌是通过它们所释放的内毒素脂多糖，与宿主动物肠道上皮细胞膜的Toll样受体互作，来诱导产生不良的免疫反应并导致感染性疾病。内毒素(LPS)是革兰氏阴性细菌生长时释放或死亡时裂解出来的细胞壁脂多糖成分。LPS基本结构由3部分共价键连接而成，即O-特异性抗原多糖、核心多糖和类脂A。类脂A已被证实为内毒素的活性分子，可介导几乎所有的内毒素生物学特性，而类脂A的双磷键又是其生物学活性的主要基团。碱性磷酸酶(ALP)是一种广泛分布的单脂磷酸水解酶，几乎能催化所有的磷酸单酯的水解反应，它可以水解类脂A功能基团的双磷键，而酶水解脱磷产生的单磷类脂A基团会使得内毒素脂多糖LPS的毒性大减。碱性磷酸酶ALP广泛存在于细菌、真菌、高等动物中，国外从20世纪50年代开始就对产ALP的微生物展开了研究，已报道的有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、霍乱弧菌、索多恩微球菌、喜寒节杆菌、产酶溶杆菌、粗糙脉孢菌和嗜热细菌等，大肠杆菌ALP已能工业化生产。而我国在这方面一直较为滞后，动物源ALP研究方面的报道不少，而从微生物中分离筛选产酶菌株却少有报道。目前，国内已报道的地衣芽孢杆菌HB1产碱性磷酸酶活力最高，优化发酵后HB1菌株细胞内外酶活分别达到5.3U/mL和5.9U/mL(庄百川等，2009)。芽孢杆菌是一种新型的饲料添加剂，研究表明，它可以平衡动物的肠道菌群，提高机体免疫力，提高动物的生产性能等，被开发作为动物饲料微生态制剂。但是具有这些作用的前提是该菌种能够良好的定植在动物肠道内。不同菌株由于其自身性能和筛选条件等的不同，其应用也会相应不同。经专利技术人研究，目前国外研发的一株BacilluslicheniformisMTCC1483虽然有较高的产ALP能力，但是其肠道定植性能比较欠缺，因此无法应用在肉鸡等动物的饲养应用上。由此可见，开发更高的定植性能的菌种在肉鸡等动物的饲养上具有重要意义。工业化生产动物饲料微生态制剂常采用发酵菌液热处理制粒的方法，然而目前的芽孢杆菌的耐热性较差，热处理过程中会降低活菌数量以及分泌的碱性磷酸酶的酶活，从而无法保证微生态制剂产品的有效活菌数量和酶活力，从而降低了其在动物饲料上的应用水平。另外，目前现有的芽孢杆菌的发酵周期比较长，前期的菌种生长、繁殖占用了一部分的发酵周期，而且产碱性磷酸酶较低。综上可见，目前的芽孢杆菌的产碱性磷酸酶、定植性能、高效发酵的生产技术等问题都有待于研究解决。因此，目前有必要开发一种综合性能较好的芽孢杆菌，以期在肉鸡饲养上获得较高的应用水平。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术经过筛选获得一株芽孢杆菌BLCC1-0441，该芽孢杆菌既能高产碱性磷酸酶，又能高效发酵，而且具有良好肠道定植性能以及在肉鸡饲养具有良好的应用。本专利技术采用如下技术方案：在本专利技术的第一个方面，提供了一株地衣芽孢杆菌，该菌株的分类命名为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)，编号为BLCC1-0441，已于2018年5月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCCNO：M2018253。本专利技术的地衣芽孢杆菌的菌体形态及生理生化特征为：LB培养基37℃培养24h，形成杏仁白色菌落，湿润，边缘有羽毛状分裂；显微镜下观察菌体呈杆状，两端钝圆。有芽孢，芽孢近椭圆形，革兰氏染色阳性。将生理生化鉴定结果与《伯杰氏细菌鉴定手册》上关于芽孢杆菌属的描述相对照，BLCC1-0441属于芽孢杆菌(Bacillussp.)。在本专利技术的第二个方面，提供了一种微生物混合物，其特点是至少包含本专利技术的菌株；所述微生物混合物还包含其他具有高产碱性磷酸酶的特性或具有良好定植性能并与本专利技术菌株共生的微生物。在本专利技术的第三个方面，提供了一种包含本专利技术菌株或本专利技术微生物混合物的产品，该产品可以是菌剂的形式，所述菌剂的活性成分为本专利技术菌株，该活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。在本专利技术的第四个方面，提供了一种本专利技术的菌株、本专利技术的微生物混合物或者本专利技术的包含本专利技术菌株或本专利技术微生物混合物的产品在制备具有高产碱性磷酸酶和具有良好定植性能的微生态制剂中的应用。在本专利技术的第五个方面，提供了一种具有高产碱性磷酸酶和具有良好定植性能的微生态制剂，其特点是：该微生态制剂包括所述的地衣芽孢杆菌或所述的微生物混合物或所述的产品。在本专利技术的第六个方面，提供了一种具有高产碱性磷酸酶和具有良好定植性能的微生态制剂的制备方法，包括：(1)菌种的发酵：发酵培养基配方为，以质量百分比计：葡萄糖0.6％、酵母膏0.5％、L-谷氨酸钠0.8％、MnSO4·H2O0.05％、NaCl0.5％，35～40℃通气发酵培养14～18h；(2)将步骤(1)中得到的发酵液处理得到微生态制剂。与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有以下有益效果：本专利技术筛选获得的地衣芽孢杆菌BLCC1-0441具有高产碱性磷酸酶的特性，胞外碱性磷酸酶活力高达40U/mL；且得到的碱性磷酸酶具有较高的热稳定性，这一热稳定性在应用上具有较大的价值。同时，本专利技术筛选获得的地衣芽孢杆菌BLCC1-0441具有较强的耐热性，在工业化生产微生态制剂方面具有广阔的应用前景，能够保证微生态制剂产品的有效活菌数量。还有，本专利技术筛选获得的地衣芽孢杆菌BLCC1-0441在动物肠道内的定植性能较好，将其应用于肉鸡饲养，用来有效替代饲料抗生素，达到改善动物肠道健康、提高其生产性能的目的。另外，本专利技术筛选获得的地衣芽孢杆菌BLCC1-0441的发酵周期短，具有较高的发酵性能，更有利于工业化推广使用。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1：菌株BLCC1-0441的菌落形态。图2：菌株BLCC1-0441的菌体形态(1000×)。图3：菌株BLCC1-0441PCR扩增产物琼脂凝胶电泳结果。M:MarkerDL2000；CK：空白对照；1、2:菌株BLCC1-0441PCR产物。图4：菌株BLCC1-0441的系统发育进化分析。图5：不同pH缓冲液对菌株BLCC1-0441碱性磷酸酶活力影响。图6：菌株BLCC1-0441碱性磷酸酶耐热性能测定。图7：菌株BLCC1-0441碱性磷酸酶最适作用温度测定。图8：菌株BLCC1-0441发酵产酶曲线。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。正如
技术介绍
所介绍的，现有技术中的芽孢杆菌的产碱性磷酸酶、定植性能、发酵的生产技术等存在一定的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株地衣芽孢杆菌，其特征是：该菌株的分类命名为地衣芽孢杆菌，编号为BLCC1‑0441(Bacillus licheniformis)，已于2018年5月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO：M 2018253。

【技术特征摘要】
1.一株地衣芽孢杆菌，其特征是：该菌株的分类命名为地衣芽孢杆菌，编号为BLCC1-0441(Bacilluslicheniformis)，已于2018年5月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCCNO：M2018253。2.一种微生物混合物，其特征是：至少包含权利要求1所述的地衣芽孢杆菌。3.包含权利要求1所述的地衣芽孢杆菌或权利要求2所述的微生物混合物的产品。4.如权利要求3所述的产品，其特征是：所述产品为粉末形式、溶液形式、悬浮剂形式、片剂形式或颗粒形式。5.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌或权利要求2所述的微生物混合物或权利要求3所述的产品在制备具有高产碱性磷酸酶和具有良好定植性能的微生态制剂中的应用。6.一种具有高产碱性磷酸酶和具有良好定植性能的微生态制剂，其特征是：该微生态制剂包括权利要求1所述的地衣芽孢杆菌或权利要求2所述的微生物混合物或权利要求3所述的产品。7.如权利要求6所述的微生态制剂，其特征是：在该微生态制剂中所述地衣芽孢杆菌的活菌数为9.0～10.0×1010cfu/g。8.权利要求6或7所述的具有高产碱性磷酸酶和具有良好定植性能的微生态制剂的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雷，单宝龙，王春凤，谷巍，徐海燕，汪祥燕，姜延龙，辛国芹，董佩佩，刘元香，王红，李金敏，陈振，赵影，张高娜，
申请(专利权)人：山东宝来利来生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37