一种石榴皮安石榴苷的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种石榴皮安石榴苷的纯化方法，采用大孔吸附树脂进行纯化，得到的石榴皮安石榴苷中的安石榴苷含量可达85～95％，且工艺的稳定性好，为安石榴苷抗肿瘤作用的进一步研究奠定试验基础；本发明专利技术将大孔吸附树脂柱的柱体积放大23倍，通过放大试验确定了纯化工艺，所得的安石榴苷含量和出膏率，与实验室小试的结果基本一致，表明本发明专利技术的纯化工艺稳定可行，可进一步进行中试研究，为后续安石榴苷的进一步开发利用奠定试验基础。

A Purification Method of Pomegranate Pian Pomegranate Glycoside

The present invention provides a purification method of pomegranate pei'an pomegranate glycoside, which is purified by macroporous adsorption resin, and the content of the obtained pomegranate pei'an pomegranate glycoside can reach 85-95%, and the stability of the process is good, which lays an experimental foundation for the further study of the antineoplastic effect of pomegranate glycoside; the present invention adopts macroporous adsorption resin to purify the pomegranate pei'an The column volume of the lipid column was enlarged 23 times, and the purification process was determined by enlargement test. The content and the extracting rate of garnet glycoside obtained were basically consistent with the results of laboratory experiments. The results showed that the purification process of the present invention was stable and feasible, and could be further studied in pilot scale, laying a foundation for further development and utilization of garnet glycoside in the future. \u3002

【技术实现步骤摘要】
一种石榴皮安石榴苷的纯化方法
本专利技术涉及多酚物质分离纯化
，尤其涉及一种石榴皮安石榴苷的纯化方法。
技术介绍
石榴在药理研究方面，多以石榴提取物和石榴汁等混合物作为研究对象，针对纯度较高的单一活性成分的研究较少。随着近年来对安石榴苷生理活性的深入研究，市场对安石榴苷的需求也逐渐增大，但安石榴苷的制备、分离纯化工艺仍是以多次柱色谱反复分离获得，需要消耗大量溶剂，同时又耗时、耗力。大孔吸附树脂(macroporousadsorptionresins)是20世纪70年代末发展起来的一类有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂，是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂的有机高分子聚合物。大孔吸附树脂主要是利用其吸附性和分子筛相结合的原理，有选择地吸附目标物质，去除杂质。目前大孔吸附树脂主要被用于植物活性成分，如皂苷类、黄酮类、生物碱类、酚酸、多糖、蒽醌等成分的分离纯化。相对于纯化工艺繁琐、费时费力、浪费溶剂的其他柱色谱法来说，大孔吸附树脂具有较多优点，例如其物理化学稳定性高、吸附容量大、选择性好、不溶于酸碱以及各种有机溶剂、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、成本低及适用于大规模生产等优点，使它在天然药物有效成分分离纯化方面的应用前景广阔，并显示出其独特的效果。然而，现有技术中在使用大孔吸附树脂进行石榴皮中安石榴苷分离纯化时，多采用反复柱色谱及高效毛细管电泳相结合的技术，纯化工艺复杂，成本高，耗时长，纯化产物的产量低，不适合进行工业化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新疆石榴皮中安石榴苷的纯化方法，从而简化纯化工艺、提高纯化产物的产量，易于工业化生产。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种石榴皮安石榴苷的纯化方法，包括以下步骤：将石榴皮安石榴苷粗提液上样于大孔吸附树脂柱，然后进行静态吸附，得到吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱；对所述吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱依次进行除杂和洗脱，得到石榴皮安石榴苷纯化物。优选的，所述石榴皮安石榴苷粗提液的质量浓度为10.0～21.0mg/mL，pH值为1.5～4.5。优选的，所述大孔吸附树脂柱中填充的大孔吸附树脂为HPD500型大孔吸附树脂。优选的，所述上样的速度为1.0～4.0BV/h，上样量为1～8BV。优选的，所述静态吸附的时间为3～24h。优选的，所述除杂所采用的试剂依次为蒸馏水和体积分数为2～7％的乙醇溶液。优选的，所述蒸馏水的体积为1～9BV，所述乙醇溶液的体积为1～9BV。优选的，所述洗脱所采用的洗脱剂为乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数为8～15％，所述乙醇溶液的体积为1～9BV。优选的，所述洗脱的速度为1～5BV/h。优选的，所述洗脱后还包括：对所得洗脱液依次进行减压浓缩和干燥。本专利技术提供了一种石榴皮安石榴苷的纯化方法，以大孔吸附树脂为吸附剂，利用特定洗脱溶剂进行一次性纯化操作，设备简单，耗时短，成本低，制备量大，得到的石榴皮安石榴苷中的安石榴苷含量可达85～95％以上，有望作为药用原料的中试放大生产工艺，为安石榴苷活性研究与开发奠定试验基础；本专利技术的方法纯化步骤简单、成本低；本专利技术将大孔吸附树脂柱的柱体积放大23倍，放大试验确定了纯化工艺，所得的安石榴苷含量和出膏率，与实验室小试的结果基本一致，表明本专利技术的纯化工艺稳定可行，可进一步进行中试研究，为后续安石榴苷的进一步开发利用奠定试验基础。附图说明图1为本专利技术实施例1中安石榴苷对照品的高效液相色谱图；图2为本专利技术实施例1中石榴皮安石榴苷待测样品的高效液相色谱图。具体实施方式本专利技术提供了一种石榴皮安石榴苷的纯化方法，包括以下步骤：将石榴皮安石榴苷粗提液上样于大孔吸附树脂柱，然后进行静态吸附，得到吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱；对所述吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱依次进行除杂和洗脱，得到石榴皮安石榴苷纯化物。本专利技术将石榴皮安石榴苷粗提液上样于大孔吸附树脂柱，然后进行静态吸附，得到吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱。在本专利技术中，所述石榴皮安石榴苷粗提液的质量浓度优选为10.0～21.0mg/mL，更优选为20.8mg/mL，pH值优选为1.5～4.5，更优选为2.0。在本专利技术中，所述石榴皮安石榴苷粗提液的制备方法，优选包括以下步骤：采用体积分数为55～65％的乙醇溶液对石榴皮进行提取，得到石榴皮安石榴苷粗提液。在本专利技术中，所述石榴皮优选为新疆石榴皮。在本专利技术的实施例中，具体是将新疆石榴皮粉碎过80目筛，将得到的筛下石榴皮粉末加入到体积分数为55～65％的乙醇溶液中，在料液比为1：20～25、室温条件下进行提取25～35min，并将提取产物依次进行过滤和减压浓缩，将所得浓缩液与蒸馏水混合，得到石榴皮安石榴苷粗提液。在本专利技术中，所述减压浓缩的温度优选为45～55℃。本专利技术优选使用滤布进行所述过滤。本专利技术优选使用质量浓度为1.2mol/L的盐酸调节所述石榴皮安石榴苷粗提液的pH值。本专利技术优选采用湿法装柱制备所述大孔吸附树脂柱。在进行所述湿法装柱前，本专利技术优选采用体积分数为95％的乙醇对大孔吸附树脂进行溶胀24h。完成所述湿法装柱后，本专利技术优选将所得大孔吸附树脂柱用体积分数为95％的乙醇洗脱，至所得洗脱液与蒸馏水的混合液(体积比为1:5)不呈白色浑浊；并采用紫外分光光度法，以体积分数为95％的乙醇作为空白对照，直至洗脱液于200～800nm波长范围内无吸收，用蒸馏水洗至无醇味，抽滤至干，得到大孔吸附树脂柱。在本专利技术中，所述大孔吸附树脂优选为HPD500型大孔吸附树脂；所述上样的速度优选为1.0～4.0BV/h，更优选为2.0BV/h，上样量优选为1～8BV，更优选为5.0BV。在本专利技术中，所述静态吸附的时间优选为3～24h，更优选为12h，得到吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱。得到吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱后，本专利技术对所述吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱依次进行除杂和洗脱，得到石榴皮安石榴苷纯化物。在本专利技术中，所述除杂所采用的试剂优选依次为蒸馏水和体积分数为2～7％的乙醇溶液(更优选为体积分数为5％的乙醇溶液)；所述蒸馏水的体积优选为1～9BV，更优选为7.0BV；所述乙醇溶液的体积优选为1～9BV，更优选为5.0BV。在本专利技术中，所述洗脱所采用的洗脱剂优选为乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数优选为8～15％，更优选为10％；所述乙醇溶液的体积优选为1～9BV，更优选为6.0BV；所述洗脱的速度优选为1～5BV/h，更优选为4.0BV/h。在本专利技术中，所述洗脱后优选还包括对所得洗脱液依次进行减压浓缩和干燥。本专利技术对所述减压浓缩和干燥的方式没有特殊的限定，选用本领域技术人员熟知的方式进行减压浓缩和干燥即可。本专利技术优选采用高效液相色谱法测定石榴皮安石榴苷纯化物中安石榴苷的含量，具体方法为：1)色谱条件：色谱柱：AgilentSB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相A：0.1％三氟乙酸溶液；流动相B：甲醇，梯度洗脱：0～10min5％～20％B，10～25min20％～45％B，25～35min45％～65％B，35～40min65％～65％B；流速:1.0mL/min；检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种石榴皮安石榴苷的纯化方法，包括以下步骤：将石榴皮安石榴苷粗提液上样于大孔吸附树脂柱，然后进行静态吸附，得到吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱；对所述吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱依次进行除杂和洗脱，得到石榴皮安石榴苷纯化物。

【技术特征摘要】
1.一种石榴皮安石榴苷的纯化方法，包括以下步骤：将石榴皮安石榴苷粗提液上样于大孔吸附树脂柱，然后进行静态吸附，得到吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱；对所述吸附有石榴皮安石榴苷粗提物的大孔吸附树脂柱依次进行除杂和洗脱，得到石榴皮安石榴苷纯化物。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述石榴皮安石榴苷粗提液的质量浓度为10.0～21.0mg/mL，pH值为1.5～4.5。3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂柱中填充的大孔吸附树脂为HPD500型大孔吸附树脂。4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述上样的速度为1.0～4.0BV/h，上样量为1～8BV。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：马桂芝，高晓黎，邱慧敏，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65