一种崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的分离制备方法技术

本发明专利技术公开了一种基于高速逆流萃取法从崖柏中分离制备高纯度单体崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇的方法。本发明专利技术以崖柏叶为原料，通过水蒸气蒸馏法获得挥发油样品，采用高速逆流色谱萃取法进行分离纯化，得到单体崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇，所述的溶剂体系由正构烷烃、乙酸乙酯或正丁醇和甲醇或乙醇构成，本方法所得崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇纯度分别高达93%、97%和96%以上。该方法可控性强，分离效果好，纯度高，具有规模化制备前景。

【技术实现步骤摘要】
一种崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的分离制备方法
本专利技术涉及一种基于高速逆流色谱法从崖柏叶中分离制备高纯度崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的方法。
技术介绍
崖柏(Thujasutchuenensis)为柏科崖柏属常绿乔木，为我国特有的珍稀濒危植物。该物种在1892年被法国传教士首次发现，曾被认为是已灭绝的3种中国特有植物之一，1999年又被重新发现，分布在我国重庆市东北的城口县大巴山自然保护区和开县雪宝山自然保护区、四川省万源市花萼山自然保护区和湖北省保康县五道峡自然保护区(在甘肃天水地区也有发现)。《本草纲目》中介绍柏有极高的药理价值：“柏性后调而耐久，坚凝之质，乃多寿之木，可以服……无毒，除风湿，安五脏，久服，令人润泽美色……兴阳道，益寿，去百邪鬼魅，润肝、养心气，润肾燥”。研究表明，崖柏的根、茎、叶中含有多种萜类化合物，这些萜类化合物脂溶性强，分子量小，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、降血压、驱虫、抗炎、利尿、祛痰、健身强体的功效。目前有从崖柏中提取崖柏精油，应用于医疗保健、食品工业、果蔬保鲜、日用化妆品等领域。有报道，王亚琪等采用超临界CO2萃取崖柏精油，鉴定出罗汉柏烯、α-雪松醇和花侧柏烯等28种萜烯类化合物。本专利技术主要从崖柏叶中提取精油化合物，其中罗汉柏烯、α-雪松醇具有明显的抑菌作用，而关于高速逆流色谱制备分离还鲜于报道。目前对崖柏烯的研究多集中于定性分析，罗汉柏烯和α-雪松醇主要采用柱层析分离方法获得，工艺复杂，制备量小。高速逆流色谱(High-speedCountercurrentChromatography,HSCCC)是一种不需要任何固体支撑物的液-液色谱分离技术，避免了固态载体带来的各种问题——样品易被吸附、损耗和变性，HSCCC具有较高峰型分辨率、分离环境缓和、高效、快速、连续、回收率高和分离量大等优点。HSCCC能直接分离大量粗提物样品或合成混合物，分离结果能够达到相当高的纯度。因此，HSCCC具有操作简便，理论回收率为100％，重现性好和分离效率高、分离量较大的特点，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种单体崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的制备方法，其克服了固态支持物或载体不可逆吸附、损耗和变性，使分离回收率提高，且节约溶剂、操作简便。本专利技术的方案是：经水蒸气蒸馏法从崖柏叶中获得的挥发油物质，通过高速逆流色谱法进行分离纯化，获得崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇。选择的溶剂体系由3个组分构成，A组分为正构烷烃，B组分为乙酸乙酯或正丁醇，C组分为甲醇或乙醇，A、B、C三组分的体积比为5:（2-4）:（1-4），以上相作为固定相，下相作为流动相。所述正构烷烃选自正戊烷、正己烷、正庚烷中的至少一种。首先在分液漏斗中按适当的比例配制上述逆流溶剂体系，摇匀后静置分层。将挥发油溶于适量流动相中待用，进样前先用固定相充满整个逆流色谱仪管路，然后使柱子转动，调节逆流主机转速为800-1000r/min，以0.5-3.0mL/min的流速将流动相泵入管路，当固定相和流动相在主机中建立动态平衡后，由进样阀进入制备好的粗提物，根据检测谱图接收目标成份。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术方法采用了高速逆流色谱分离技术，是一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，它克服了固态支持物或载体不可逆吸附、损耗和变性，使被分离物回收率高。又因为采用优选的溶剂体系，控制温度、调整主机转速和流动相流速等工艺条件，可以高效率地分离、获得高纯度的崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇，纯度高达93%、97%和96%以上。适用于采用各种型号的高速逆流色谱仪从崖柏叶挥发油中分离制备单体化合物。保证较高峰型分辨率、分离环境缓和、分离量大、回收率高。具体实施方式实施例1选取正己烷-乙酸乙酯-甲醇（5:2:3，v/v）溶剂体系，以水蒸气蒸馏法获得的崖柏挥发油样品用半制备型高速逆流色谱仪TBE-300A进行分离制备崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇。按上述比例溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上相(固定相)和下相(流动相)分开，采用半制备型高速逆流色谱仪，配有KTApurifierP-900泵，UV检测器。称取105.4mg挥发油粗品溶于20ml流动相中待用。进样前，用固定相充满整个柱子，调整主机转速为830r/min，以1.2ml/min的流速将流动相泵入柱内直至建立动态平衡，由进样阀进样，根据UV检测图谱分别接收目标馏分并进行HPLC检测。通过HPLC检测得崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的纯度分别高达93.2%、98.1%和96.7%。实施例2选取正己烷-乙酸乙酯-乙醇（5:2.5:4，v/v）溶剂体系，以水蒸气蒸馏法获得的崖柏挥发油样品用分析型高速逆流色谱仪GS20进行分离制备崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇。按上述比例溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上相(固定相)和下相(流动相)分开，采用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，UV检测器。称取30.2mg挥发油粗品溶于6ml流动相中待用。进样前，用固定相充满整个柱子，调整主机转速为850r/min，以0.5ml/min的流速将流动相泵入柱内直至建立动态平衡，由进样阀进样，根据UV检测图谱分别接收目标馏分并进行HPLC检测。通过HPLC检测得崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的纯度分别高达93.5%、98.2%和96.3%。实施例3选取正己烷-正丁醇-乙醇（5:3:2，v/v）溶剂体系，以水蒸气蒸馏法获得的崖柏挥发油样品用半制备型高速逆流色谱仪GS10A进行分离制备崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇。按上述比例溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上相(固定相)和下相(流动相)分开，采用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，UV检测器。称取114.5mg挥发油粗品溶于15ml流动相中待用。进样前，用固定相充满整个柱子，调整主机转速为1000r/min，以1.0ml/min的流速将流动相泵入柱内直至建立动态平衡，由进样阀进样，根据UV检测图谱分别接收目标馏分并进行HPLC检测。通过HPLC检测得崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的纯度分别高达93.3%、97.5%和96.8%。实施例4选取正己烷-正丁醇-甲醇（5:2:1.5，v/v）溶剂体系，以水蒸气蒸馏法获得的崖柏挥发油样品用半制备型高速逆流色谱仪EMC-500A进行分离制备崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇。按上述比例溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上相(固定相)和下相(流动相)分开，采用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，UV检测器。称取118.2mg挥发油粗品溶于20ml流动相中待用。进样前，用固定相充满整个柱子，调整主机转速为1000r/min，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内直至建立动态平衡，由进样阀进样，根据UV检测图谱分别接收目标馏分并进行HPLC检测。通过HPLC检测得崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的纯度分别高达93.8%、97.1%和96.4%。实施例5选取正戊烷-正丁醇-乙醇（5:4:1，v/v）溶剂体系，以水蒸气蒸馏法获本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇的分离制备方法，其特征是：以崖柏叶为原料，通过水蒸气蒸馏法获得挥发油样品，经高速逆流色谱分离，减压蒸干后获得高纯度单体崖柏烯、罗汉柏烯和α‑雪松醇。

【技术特征摘要】
1.一种崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的分离制备方法，其特征是：以崖柏叶为原料，通过水蒸气蒸馏法获得挥发油样品，经高速逆流色谱分离，减压蒸干后获得高纯度单体崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇。2.根据权利要求1所述的一种崖柏烯、罗汉柏烯和α-雪松醇的分离制备方法，其特征在于所述高速逆流色谱法所用溶剂体系由三个组分构成，A组分是正构烷烃，B组分是乙酸乙酯或...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭琴，
申请(专利权)人：郭琴，
类型：发明
国别省市：江苏,32