生物标志物在卵巢癌评估中的应用制造技术

本文提供生物标志物在卵巢癌评估中的应用。本文提供来自外泌体的生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断和/或监测受试者卵巢癌的组合物或试剂盒中的用途，其中所述生物标志物包括c5a，还可以包括另外的卵巢癌生物标志物，例如CA125，HE4和PLG中的一种或多种。本文还提供包括所述生物标志物检测试剂的组合物或试剂盒。本文公开的方法、组合物和试剂盒能够有效用于卵巢癌的评估、诊断和/或监测。

【技术实现步骤摘要】
生物标志物在卵巢癌评估中的应用
本专利技术一般性涉及癌症的诊断/分级/分期和预后的领域，更具体来说，本专利技术涉及卵巢癌的领域。本专利技术还涉及了包括生物标志物表达的卵巢癌诊断、分级、分期和预后领域，并且还提供了相关的分析试剂、诊断模型、测试试剂盒和临床分析。
技术介绍
卵巢癌是致死率最高的妇科癌症，仅在2015年，中国约5.2万人被诊断为卵巢癌患者，且2.25万人因此死亡。卵巢癌病人的死亡率在近三十年来没有明显改变，晚期病人的5年生存率不超过20％，而I期病人的5年存活率可以达到90％。然而绝大多数病人在确诊时都已经是晚期，因此，开发早期筛查卵巢癌的诊断产品将可能提高病人的存活率，降低卵巢癌的死亡率。卵巢细胞的突变理论上可以通过检测血液中的特定的蛋白而被发现。实际操作中，由于检测仪器和试剂的限制，少数细胞的突变带来的变化无异于大海捞针，非常难以被检测。所以突变的信息需要被浓缩或检测仪器试剂的灵敏度显著上升的情况下才可以在早期被发现。市售卵巢癌相关的生物标记物试剂主要为糖链抗原-125(cancerantigen125，CA125)和人附睾蛋白4(Humanepididymisprotein4，HE4)两种，两种指标实际都通常被用为确诊后对于复发和病情发展的检测手段。近期的多个研究发现，这两种试剂在早期病人的诊断和筛查都难以达到理想的敏感性、特异性和阳性预测值。已经对卵巢癌的生物标志物进行了许多研究。例如，WO2005034732公开了涉及其中SEQIDNO：1、SEQIDNO：3、SEQIDNO：5、SEQIDNO：7、SEQIDNO：9、SEQIDNO：11、SEQIDNO：13、SEQIDNO：15、SEQIDNO：17、SEQIDNO：19、SEQIDNO：21、SEQIDNO：23、SEQIDNO：25、SEQIDNO：27、SEQIDNO：29、SEQIDNO：31、SEQIDNO：33、SEQIDNO：35、SEQIDNO：37、SEQIDNO：39、SEQIDNO：41或SEQIDNO：43任一序列的完整或部分序列的DNA作为卵巢癌的标志基因。WO2005098447提及ApoA1、修饰的ApoA1、甲状腺素运输蛋白ΔN10、天然甲状腺素运输蛋白、半胱氨酰化甲状腺素运输蛋白、磺化甲状腺素运输蛋白、CysGly修饰的甲状腺素运输蛋白、谷胱甘肽化甲状腺素运输蛋白、IAIH4片段No.1、IAIH4片段No.2以及IAIH4片段No.3及其组合物作为生物标志物用于确定卵巢癌状态。WO2007002264公开了CTAP3相关蛋白质和CA125、转铁蛋白、结合珠蛋白、ApoA1、转甲状腺素蛋白、ITIH4内部片段、beta2-微球蛋白、hepcidin、prostatin、骨桥素、esoinophil衍生神经毒素、瘦素、催乳素、IGF-II、血红蛋白及其修饰形式、CA125II、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA195、肿瘤相关胰蛋白脢抑制剂(TATI)、CEA、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、唾液酸(Sialyl)TN、半乳糖转移酶、巨噬细胞集落激激因子(M-CSF，CSF-1)、溶血磷脂酸(LPA)、表皮生长因子受体胞外段的110KD成分(p110EGFR)、组织激肽释放酶原，如激肽释放酶6和激肽释放酶10(NES-1)、丝氨酸蛋白水解酶(prostasin)、HE4、肌酸激酶B(CKB)、LASA、HER-2/neu、尿促性腺激素肽、DianonNB70/K、组织肽抗体(TPA)、SMRP、骨桥素和结合珠蛋白、类胰岛素生长因子I以及类胰岛素生长因子II等用于鉴定卵巢癌状态。WO2015042115提及用于进行卵巢癌评估的生物标志物的实例包括：醛脱氢酶1(ALDH1)、ApoCI、ApoAII、ApoCII、β-血红蛋白、钙周期蛋白、钙粒蛋白A、钙粒蛋白C、紧密连接蛋白(claudin)-3、结缔组织生长因子(CTGF)、嗜酸粒细胞衍生神经毒素、成纤维细胞生长因子2(碱性)(FGF2)、叶酸盐受体1(FOLR1)、生殖糖蛋白(glycodelin)、GPCR49、谷胱甘肽S-转移酶θ1(GSTT1)、hepsin、铁调素(hepcidin)、胰岛素样生长因子-II、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H4(inter-α-trypsininhibitorheavychainH4)、激肽释放酶相关肽酶6(KLK6/7)、激肽释放酶10、瘦素、巨噬细胞抑制因子、粘蛋白-16(CA125)、骨桥蛋白、促乳素、蛋白酶丝氨酸8(proteaseserine8)(PRSS8)、蛋白C抑制剂、溶质携带物家族39(锌转运体)成员4(SLC39A4)、小MBL相关蛋白C端片段、角质层糜蛋白酶(stratumcorneumchymotryticenzyme)、转铁蛋白、运甲状腺素蛋白、WAP四二硫化物核心域2(WAPfour-disulfidecoredomain2)(HE4)、含有磷酸化Src同源区2结构域的转化蛋白1(Shc)、含有磷酸化Src同源区2结构域的E(She)、以及特异于酪蛋白激酶1ε的自身抗体等。外泌体是活细胞分泌的直径为约30-100nm(最大可到150nm)的囊泡。其天然存在于体液中，包括血液、血清、浆膜液、血浆、淋巴、尿、脑脊液、唾液、分泌组织和器官的粘膜分泌物、阴道分泌物、乳汁、眼泪、腹水，例如来自胸膜、心包、腹膜、腹部或其他体腔的液体中。外泌体包含核酸、蛋白质和脂质。外泌体脂质来源于细胞膜，属于磷脂双分子层结果。外泌体还包含膜蛋白如外泌体标志物CD9、CD63、CD81、CD326和膜内蛋白如热休克蛋白、核糖体蛋白、粘附分子、细胞骨架蛋白和细胞分泌的特定蛋白等。外泌体核酸包括DNA和RNA如mRNA，microRNA，ncRNA等。已经发现外泌体蛋白和RNA可能与疾病如癌症相关。尽管进行了相关研究，本领域仍然需要能够有效用于卵巢癌筛查和诊断的有利生物标志物。
技术实现思路
在一些实施方案中，本专利技术提供用于评估、诊断和/或监测受试者卵巢癌的方法，其中使用c5a作为卵巢癌生物标志物。c5a由C5前体蛋白在C5转化酶作用下产生，分子量为115kDa。已经鉴定卵巢癌患者中的c5a(例如来自外泌体的c5a)能够用作卵巢癌的生物标志物。已经发现其可以补充或替代现有生物标志物。在一些实施方案中，用于评估、诊断和/或监测受试者卵巢癌的方法包括以下步骤：1)获得来自受试者的外泌体，和2)确定来自受试者的外泌体中生物标志物的存在和/或水平。在一些实施方案中，本专利技术的方法还包括测定另外的卵巢癌生物标志物，例如CA125，HE4和PLG中的一种或多种，例如包括CA125和HE4二者。在一些实施方案中，本专利技术的方法包括测定由c5a、CA125和HE4组成的生物标志物。由于各肿瘤生物标志物之间的相容性，生物标志物的简单组合难以获得令人满意的效果，而如何从众多的肿瘤生物标志物中获得能够显著提高灵敏度和/或特异性的数种标志物实现有效诊断非常难以预期，已经成为本领域进行深入研究的课题。已经发现令人吃惊地发现c5a与其它卵巢癌生物标志物如CA125、HE4等具有良好的互补性，它们的组合显示了在卵巢癌检测中显著提高的灵敏度和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.来自外泌体的生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断和/或监测受试者卵巢癌的组合物或试剂盒中的用途，其中所述来自外泌体的生物标志物包括c5a，其中评估、诊断和/或监测受试者卵巢癌包括1)获得来自受试者的外泌体，和2)确定来自受试者的外泌体中生物标志物的存在和/或水平。

【技术特征摘要】
1.来自外泌体的生物标志物的检测试剂在制备用于评估、诊断和/或监测受试者卵巢癌的组合物或试剂盒中的用途，其中所述来自外泌体的生物标志物包括c5a，其中评估、诊断和/或监测受试者卵巢癌包括1)获得来自受试者的外泌体，和2)确定来自受试者的外泌体中生物标志物的存在和/或水平。2.权利要求1所述的用途，其中所述生物标志物还包括另外的卵巢癌生物标志物，例如CA125，HE4和PLG中的一种或多种。3.权利要求1或2所述的用途，其中所述生物标志物包括来自外泌体的c5a、CA125和HE4。4.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述来自外泌体的生物标志物的检测试剂包括抗体，例如单克隆抗体。5.权利要求2-4中任一项所述的用途，其中所述外泌体来自体液，例如来自血液、血清、浆膜液、血浆、淋巴、尿、脑脊液、唾液、分泌组织和器官的粘膜分泌物、阴道分泌物、乳汁、眼泪、腹水，例如来自胸膜、心包、腹膜、腹部或其他...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亚楠，
申请(专利权)人：上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31