一种土霉素季铵盐的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种土霉素季铵盐的制备方法，包括孢子、种子制备、发酵、酸化、纯化、脱色、干燥、溶解结晶等步骤，发酵步骤中加入烟酸和D‑氨基葡萄糖盐酸盐组成的复合活化剂，用硫酸锌、高铁酸钾、十二烷基糖苷进行发酵液的纯化，脱色步骤选用复合脱色剂，制得的土霉素季铵盐产品不仅收率和纯度高，而且脱色效果好，同时缩短了发酵步骤的时间。

【技术实现步骤摘要】
一种土霉素季铵盐的制备方法
本专利技术涉及一种抗生素的制备，特别涉及一种土霉素季铵盐的制备方法。
技术介绍
土霉素，又称地霉素，氧四环素，化学名为(4s，4aR，5S，5aR，6S，12aS)-N-4-二甲胺基-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-六羟基-6-甲基-1，11-二氧代并四苯-2-甲酰胺，是四环素类抗生素的一种，因结构上含有四并苯基的母核而得名。本品为黄色的结晶粉末，无臭，味苦，在空气中性质稳定，在日光下颜色变暗，在碱性条件下易失效。土霉素的盐酸盐为黄色结晶粉末，有吸湿性，但水分和光线不影响其效用，在室温下可保存一段时间不变质，不失效。土霉素具有广谱抗病原微生物作用，为快速抑菌剂，高浓度时对某些细菌呈杀菌作用。其作用机制在于药物能特异性地与核糖体30S亚基的A位置结合，阻止氨基酰-tRNA在该位置上的联结，从而抑制肽链的增长和影响细菌或其他病原微生物的蛋白质合成。土霉素对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、化脓性链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、大肠杆菌、产气杆菌、贺菌属、耶尔森菌、单核细胞李斯特菌等有较强抗菌活性；此外，土霉素对立克次体、支原体、衣原体、放线菌等也有较强作用。与土霉素或其盐酸盐相比，土霉素季铵盐的抗菌活性、耐药性方面更胜一筹。尽管土霉素及其盐酸盐的制备工艺早已成熟，但这些工艺中难免用到一些如氰类、胺类等剧毒物质，并且土霉素季铵盐的制备工艺尚处在开发阶段，得到的产品产率和纯度较低。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种土霉素季铵盐的制备方法，包括孢子、种子制备、发酵、酸化、纯化、脱色、干燥、溶解结晶等步骤，发酵步骤中加入活化剂，用多种纯化剂进行发酵液的纯化，脱色步骤选用复合脱色剂，制得的土霉素季铵盐产品不仅产率和纯度高，而且脱色效果高，缩短了发酵步骤的时间，满足制药领域的要求。一种土霉素季铵盐的制备方法，包括以下步骤：(1)孢子制备：将龟裂链霉菌经无菌手续接入麸皮、琼脂和水组成的斜面培养基中，在36.0-36.4℃的温度、56-60％的相对湿度条件下培养4-5天后，挑选菌落正常无污染的孢子作为种子；(2)种子制备：将步骤(1)挑选得到的孢子接入一级种子罐，在32-34℃下培养至培养液为黄色，且培养液的pH值达到6.0-6.4后，将培养液移至二级种子罐，继续在32-34℃下扩大培养38-42h；(3)发酵：将步骤(2)得到的培养液在32-33℃下发酵110-140h，通氧量为0.9-1.1v/m，当培养液的pH＜6.4时，开始通入液氨，直至pH在6.4-6.8之间；(4)酸化和纯化：用0.01mol/L的盐酸与0.1mol/L的草酸将步骤(3)所得发酵液调节至pH为1.70-1.74，随后向发酵液中加入纯化剂，搅拌后过滤，得到滤液；(5)脱色：将滤液用复合脱色剂进行脱色处理20-40分钟，过滤；(6)干燥：将脱色后的滤液进行干燥，得到土霉素干品，控制水分为4％-7％；(7)溶解结晶：将蒸馏水搅拌并升温至55-60℃，加入盐酸调节pH值为6.0-6.5，继续升温至62-68℃，投入步骤(6)制得的土霉素干品，搅拌至土霉素全部溶解，再加入备好的DTAC，继续搅拌，继续加入称量好的氢氧化钙，料液pH值控制在9.0-10.0之间，结晶，静置，离心分离；(8)干燥：将步骤(7)得到的湿成品装入双锥干燥器内，控制烘干温度90±5℃，真空度≤-0.07MPa，进行干燥，粉碎过筛，称重，分装即得土霉素季铵盐。在所述的步骤(1)中，斜面培养基的各组分的质量份数为：麸皮5-15份、琼脂5-10份、水80-100份。在所述的步骤(3)中，在发酵的同时加入由烟酸和D-氨基葡萄糖盐酸盐组成的复合活性试剂，烟酸和D-氨基葡萄糖盐酸盐的重量比为：3.5-4.5:1，复合活性试剂的添加量为培养液重量的0.2-0.6％。在所述的步骤(4)中，纯化剂为硫酸锌、高铁酸钾、十二烷基糖苷组成的复合试剂，硫酸锌、高铁酸钾、烷基糖苷的重量比为：2.5-3.0:5.3-5.7:1，纯化剂的添加量为发酵液重量的0.15-0.25％。在所述的步骤(5)中，复合脱色剂各组分的质量份数为：活性炭25-35份、ADS-7大孔吸附树脂10-20份、D1400大孔吸附树脂10-20份、NKA-9型大孔吸附树脂8-12份，复合脱色剂的添加量为滤液重量的1.0-2.0％。在所述的步骤(7)中，蒸馏水、土霉素干品、DTAC、氢氧化钙的重量比为：3.5-4.5:1:0.30-0.35:0.16-0.20。龟裂链霉菌可以在中国普通微生物菌种保藏管理中心购买，保藏号为CGMCC4.748。ADS-7大孔吸附树脂、D1400大孔吸附树脂、NKA-9型大孔吸附树脂可以在天津浩聚树脂科技有限公司购买。DTAC为十二烷基三甲基氯化铵。本专利技术的优点在于：1、在土霉素发酵过程中加入烟酸和D-氨基葡萄糖盐酸盐组成的复合活化试剂，烟酸可以促进细胞的新陈代谢，D-氨基葡萄糖盐酸盐可以补充发酵过程中所需的氨基酸，两者共同作用促使发酵液中的龟裂链霉菌细胞进行生物代谢，产生大量土霉素，明显提高产品收率，同时还缩短了发酵时间，从原来的7-8天可以缩短至5天左右。2、选择硫酸锌、高铁酸钾、十二烷基糖苷组成的复合纯化剂对发酵液进行纯化，不仅可以去除蛋白质和各种金属离子，还可以除去有机物，使得产品杂质含量大大减少。3、采用复合脱色剂进行脱色，脱色效果好，脱色率高。综上所述，本专利技术在制备土霉素季铵盐的过程中，发酵步骤中加入活化剂，用硫酸锌、高铁酸钾、十二烷基糖苷进行发酵液的纯化，脱色步骤选用复合脱色剂，共同作用，制得的土霉素季铵盐产品不仅收率和纯度高，而且脱色效果高，同时缩短了发酵步骤的时间，满足制药领域的要求。具体实施方式实施例1一种土霉素季铵盐的制备方法，包括以下步骤：(1)孢子制备：将龟裂链霉菌经无菌手续接入麸皮、琼脂和水组成的斜面培养基中，在36.0℃的温度、56％的相对湿度条件下培养4天后，挑选菌落正常无污染的孢子作为种子；斜面培养基的各组分的质量份数为：麸皮5份、琼脂5份、水80份。(2)种子制备：将步骤(1)挑选得到的孢子接入一级种子罐，在32℃下培养至培养液为黄色，且培养液的pH值达到6.0-6.4后，将培养液移至二级种子罐，继续在32℃下扩大培养38h；(3)发酵：将步骤(2)得到的培养液在32℃下发酵110h，通氧量为0.9v/m，当培养液的pH＜6.4时，开始通入液氨，直至pH在6.4-6.8之间；在发酵的同时加入由烟酸和D-氨基葡萄糖盐酸盐组成的复合活性试剂，烟酸和D-氨基葡萄糖盐酸盐的重量比为：3.5:1，复合活性试剂的添加量为培养液重量的0.2％。(4)酸化和纯化：用0.01mol/L的盐酸与0.1mol/L的草酸将步骤(3)所得发酵液调节至pH为1.70-1.74，随后向发酵液中加入纯化剂，搅拌后过滤，得到滤液；纯化剂为硫酸锌、高铁酸钾、十二烷基糖苷组成的复合试剂，硫酸锌、高铁酸钾、烷基糖苷的重量比为：2.5:5.3:1，纯化剂的添加量为发酵液重量的0.15％。(5)脱色：将滤液用复合脱色剂进行脱色处理20分钟，过滤；复合脱色剂各组分的质量份数为：活性炭25份、ADS-7大孔吸附树脂10份、D1400大孔吸附树脂10份、NKA-9型大孔吸附树脂8份，复合脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：包括孢子、种子制备，发酵，酸化，纯化，脱色，干燥，溶解结晶步骤。

【技术特征摘要】
1.一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：包括孢子、种子制备，发酵，酸化，纯化，脱色，干燥，溶解结晶步骤。2.一种土霉素季铵盐的制备方法，其特征为：包括以下步骤：(1)孢子制备：将龟裂链霉菌经无菌手续接入麸皮、琼脂和水组成的斜面培养基中，在36.0-36.4℃的温度、56-60％的相对湿度条件下培养4-5天后，挑选菌落正常无污染的孢子作为种子；(2)种子制备：将步骤(1)挑选得到的孢子接入一级种子罐，在32-34℃下培养至培养液为黄色，且培养液的pH值达到6.0-6.4后，将培养液移至二级种子罐，继续在32-34℃下扩大培养38-42h；(3)发酵：将步骤(2)得到的培养液在32-33℃下发酵110-140h，通氧量为0.9-1.1v/m，当培养液的pH＜6.4时，开始通入液氨，直至pH在6.4-6.8之间；(4)酸化和纯化：用0.01mol/L的盐酸与0.1mol/L的草酸将步骤(3)所得发酵液调节至pH为1.70-1.74，随后向发酵液中加入纯化剂，搅拌后过滤，得到滤液；(5)脱色：将滤液用复合脱色剂进行脱色处理20-40分钟，过滤；(6)干燥：将脱色后的滤液进行干燥，得到土霉素干品，控制水分为4％-7％；(7)溶解结晶：将蒸馏水搅拌并升温至55-60℃，加入盐酸调节pH值为6.0-6.5，继续升温至62-68℃，投入步骤(6)制得的土霉素干品，搅拌至土霉素全部溶解，再加入备好的DTAC，继续搅拌，继续加入称量好的氢氧化钙，料液pH值控制在9.0-10.0之间，结晶，静置，离心分离；(8)干燥：将步骤(7)得到的湿成品装入双锥干燥器内，控制烘干温度90±5℃，真空度≤-0....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文辉，万义斌，葛友群，左飞鸿，杨明，李进进，万建辉，李杰，
申请(专利权)人：江西国药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江西,36