一种从葛花中制备鸢尾黄素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从葛花中制备鸢尾黄素的方法。包括以下操作步骤：（1）将葛花粉的水提预处理，得到预处理葛花粉末；（2）将预处理葛花粉末超声醇提，再经滤膜过滤和冷冻干燥，即得鸢尾黄素粉末；所述鸢尾黄素粉末中鸢尾黄素的含量大于90%，得率为2.17～2.7%。本发明专利技术从葛花中制备的鸢尾黄素纯度大于90%，得率在2.7%左右。本发明专利技术制得的高纯度鸢尾黄素可以作为食品添加剂，用于预防肿瘤、糖尿病等保健品的生产。本发明专利技术的操作方法中除乙醇外，没有使用其他任何有机试剂，是一种环境友好型的工艺方法。本发明专利技术操作方法简单、对设备要求较低，无需投入昂贵的生产设施、生产成本低，适于工业化批量生产。

【技术实现步骤摘要】
一种从葛花中制备鸢尾黄素的方法
本专利技术属于植物天然产物分离
，具体涉及一种从葛花中制备鸢尾黄素的方法。
技术介绍
鸢尾黄素是一个具体的异黄酮类化合物，主要来源于射干和葛花等鸢尾科植物，并且在葛花中具有更高的含量（约占总黄酮的5～10%）。现有研究表明，鸢尾黄素对于糖尿病并发症等具有很好的缓解作用，还可用于治疗心脑血管等一系列疾病，在食品添加剂和保健品等领域具有很大应用潜力。目前鸢尾黄素主要从射干等鸢尾科植物中分离。传统的方法涉及不同有机溶剂分次萃取、分批浓缩和硅胶色谱柱多次分离等步骤，存在分离工艺较为复杂、分离过程费时费力等问题。此外，由于粗提物成分复杂，且其中鸢尾黄素含量又很低（约占提取物总量的0.5～5%），因此传统技术很难制备很高纯度的鸢尾黄素。高效液相色谱法虽然可以制备高纯度的鸢尾黄素，但该方法的处理量有限，工业级设备每次处理提取液的体积约10～20mL，并且依赖制备高效液相色谱仪等大型仪器。因此，目前从鸢尾科植物中大量制备纯度较高鸢尾黄素的方法还很缺乏。
技术实现思路
为了实现从鸢尾科植物中大量制备纯度较高鸢尾黄素，本专利技术提供一种从葛花中制备鸢尾黄素方法。一种从葛花中制备鸢尾黄素的具体操作步骤如下：（1）原料处理将葛花干燥，粉碎过60筛,得到葛花粉末；（2）葛花的水提预处理按固液比1g:16～60mL在葛花粉末中加入去离子水，超声提取，离心去除上清，得到沉淀，用去离子水洗涤，60℃以下干燥12小时以上，得到预处理葛花粉末；（3）鸢尾黄素的制备按固液比1g:16～26mL在预处理葛花粉末中加入乙醇-水溶液，超声提取，离心得到的提取液，经滤膜过滤和冷冻干燥，即得鸢尾黄素粉末；鸢尾黄素的结构式如下：所述鸢尾黄素粉末中鸢尾黄素的含量大于90%，得率为2.17～2.7%。进一步限定的技术方案如下：步骤（2）中，超声提取条件：在50W/45kHz条件下超声提取1.5～2.5小时。步骤（3）中，超声提取条件：在50W/45kHz条件下超声提取10～60min；使用的乙醇-水溶液中，乙醇的体积分数为50%～100%。步骤（3）中，滤膜过滤条件：经0.22μm过滤膜过滤。步骤（3）中，冷冻干燥条件：温度低于-40℃，真空度小于100Pa，冻干24小时。本专利技术的有益技术效果体现在以下方面：1.本专利技术从葛花中制备的鸢尾黄素纯度大于90%，得率在2.7%左右。满足较高纯度鸢尾黄素的技术要求，可以作为食品添加剂，用于预防肿瘤、糖尿病等保健品的生产。2.本专利技术的操作方法中除乙醇外，没有使用其他任何有机试剂，是一种环境友好型的工艺方法。本专利技术操作方法简单、对设备要求较低，无需投入昂贵的生产设施、生产成本低，适于工业化批量生产。3.本专利技术工艺方法的有益之处说明如下：（1）由于鸢尾黄素在水中溶解度很小（DrugDeliv,2017;24(1):632–640），因此通过步骤（2）可以去除葛花中大分部水溶性成分，而保留大部分的鸢尾黄素；（2）葛花中的多种高含量黄酮类化合物是鸢尾黄素的糖苷衍生物（如鸢尾苷），通过步骤（2）可以促进这类化合物中糖苷键的水解，释放出鸢尾黄素；得到的鸢尾黄素由于在水中溶解度小，将吸附在葛花粉末中；（3）鸢尾黄素在乙醇等有机溶剂中溶解性很大，因此通过步骤（3）可以对步骤（2）得到的葛花粉末中的鸢尾黄素进行高效提取；（4）因此，依次使用去离子水、乙醇-水溶液对葛花中进行提取，可以得到纯度和得率都很高的鸢尾黄素。附图说明图1为本专利技术实施例1中制得的鸢尾黄素的HPLC-MS谱图。图2为本专利技术实施例1中所用鸢尾黄素标准品的HPLC图谱。图3为本专利技术实施例1中制得的鸢尾黄素的HPLC图谱。具体实施方式实施例1一、葛花中鸢尾黄素的制备从葛花中制备鸢尾黄素的具体操作步骤如下：（1）原料处理将葛花干燥，粉碎过60筛,得到葛花粉末。（2）葛花水提预处理（2.1）取葛花粉末0.250g，按1g:60mL的固液比加入去离子水，在50W/45kHz下超声提取1.5小时；（2.2）5000rpm离心5min得到葛花粉末的沉淀；（2.3）用10mL去离子水对沉淀进行振荡清洗，5000rpm离心5min，去除洗涤液；反复清洗5次；（2.4）得到的沉淀60℃以下烘干24小时，得到水提预处理的葛花粉末。（3）鸢尾黄素的制备（3.1）按1g:16mL的固液比向葛花粉末中加入体积浓度为70%的乙醇溶液，在50W/45kHz下超声提取50min；（3.2）提取液5000rpm离心5min，得到的鸢尾黄素提取液；（3.3）提取液经0.22μm过滤膜过滤和冷冻干燥后，得到浅黄色粉末6.8mg。二、所制备鸢尾黄素的结构鉴定1.制备的鸢尾黄素提取液，使用液相色谱-质谱联用仪（HPLC-MS）检测后，其MS图谱如图１所示，提取液主要成分的荷质比（m/z）[M-H]为299，结合已有文献（JournalofChromatographyB,2017,1048:111-120；AnalBioanalChem,2012,402:2965-2976.），初步确定其结构为鸢尾黄素；鸢尾黄素的结构式如下：2.使用HPLC（iChrom5100高效液相色谱仪，大连伊力特）分别对鸢尾黄素提取液和鸢尾黄素标准品（购于南京植源生物科技有限公司）进行分析。分析条件如下：在色谱柱为HC-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm,大连依利特，柱温25℃），流动性A为乙腈，流动相B为0.8%（v/v）醋酸-水溶液。色谱方法具体如下：0-10min，流动相A比例从15%至25%线性变化；10-20min，流动相A比例维持25%不变；20-25min，流动相A比例从25%至40%线性变化；25-35min，流动相A比例维持40%不变；35-40min，流动相A比例从40%至80%线性变化；40-45min，流动相A比例从80%至15%线性变化；45-50min，流动相A比例维持15%不变。流动相流速0.80mL/min，紫外检测波长280nm，样品进样量5μL。结果表明，鸢尾黄素提取中的主要成分与鸢尾黄素标准品具有一样的保留时间（图2、图3），结合质谱分析结果（图1），说明制备的样品为鸢尾黄素。三、所制备鸢尾黄素的纯度分析使用HPLC对制备鸢尾黄素提取物的纯度进行检测，其分析条件与步骤二相同。结果表明，通过本专利技术获得的鸢尾黄素，其含量为91.7%（图3）。其中，纯度计算公式如下：纯度(%)=鸢尾黄素色谱峰面积/提取液中所有色谱峰总面积×100---(1)。四、鸢尾黄素得率计算本实施例中鸢尾黄素的得率为2.7%，其计算公式如下：得率(%)=所得鸢尾黄素的质量/所用葛花粉末的质量×100------------(2)。实施例2从葛花中制备鸢尾黄素的具体操作步骤如下：本实例中葛花水提预处理的方法与实施例1的不同之处在于：步骤（2）中，在0.250g葛花中加入12.5mL去离子水（固液比为1g:50mL），水提超声的时间为2h，其余操作及条件同实施例1。步骤（3）中，乙醇的浓度为50%；提取液经0.22μm过滤膜过滤和冷冻干燥，其余操作及条件同实施例1，得到浅黄色粉末6.16mg。纯度及得率检测采用实施例1同样的方法进行含量检测，结果显示，所得到的鸢尾黄素纯度为93.8%，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从葛花中制备鸢尾黄素的方法，其特征在于制备操作步骤如下：（1）原料处理将葛花干燥，粉碎过60筛,得到葛花粉末；（2）葛花的水提预处理按固液比1g : 16～60 mL在葛花粉末中加入去离子水，超声提取，离心去除上清，得到沉淀，用去离子水洗涤，60℃以下干燥12小时以上，得到预处理葛花粉末；（3）鸢尾黄素的制备按固液比1g : 16～26 mL在预处理葛花粉末中加入乙醇‑水溶液，超声提取，离心得到的提取液，经滤膜过滤和冷冻干燥，即得鸢尾黄素粉末；鸢尾黄素的结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种从葛花中制备鸢尾黄素的方法，其特征在于制备操作步骤如下：（1）原料处理将葛花干燥，粉碎过60筛,得到葛花粉末；（2）葛花的水提预处理按固液比1g:16～60mL在葛花粉末中加入去离子水，超声提取，离心去除上清，得到沉淀，用去离子水洗涤，60℃以下干燥12小时以上，得到预处理葛花粉末；（3）鸢尾黄素的制备按固液比1g:16～26mL在预处理葛花粉末中加入乙醇-水溶液，超声提取，离心得到的提取液，经滤膜过滤和冷冻干燥，即得鸢尾黄素粉末；鸢尾黄素的结构式如下：所述鸢尾黄素粉末中鸢尾黄素的含量大于90%，得率为2.17～2.7%。2.根据权利要求1所述的一种从葛花中制备鸢尾...

【专利技术属性】
技术研发人员：马意龙，彭沁露，张英朔，杨洋，商亚芳，魏兆军，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34