一种抗癌药物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗癌药物领域，具体而言，涉及一种抗癌药物及其应用。一种抗癌药物，其主要组分为豹蛙抗瘤酶和维生素C。本发明专利技术以大鼠肝癌细胞株RH‑35为研究对象，研究两种药物的单独与联合作用，评估两者联合作用的效果，证实两者在体外细胞水平上协同促进大鼠肝癌RH‑35细胞凋亡，为后期的肿瘤药物联合开发奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种抗癌药物及其应用
本专利技术涉及抗癌药物领域，具体而言，涉及一种抗癌药物及其应用。
技术介绍
豹蛙抗瘤酶(onconase,ONC)是一种新型抗癌药物，最早在豹蛙的卵母细胞和早期胚胎细胞中提取到，由104个氨基酸组成的核酸酶。ONC目前是第一个进入临床试验阶段的核糖核酸酶，它能够特异性降解RNA抑制蛋白质的合成，进而对肿瘤细胞进行诱导凋亡。在多种肿瘤细胞试验中，ONC可选择性杀伤肿瘤细胞，但对正常细胞影响基本无影响。此外，ONC还具有不良反应少、免疫原性低、不易产生耐药性等优点，是一种极具潜力的抗肿瘤药物。原发性肝癌(主要指肝细胞癌，HCC))是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，是全球癌症相关死亡的主要原因。中国是肝癌大国，全世界一半以上的肝癌发生在中国。临床上采用的治疗方法有手术切除、肝移植、局部消融、化疗、导管肝动脉插管化疗栓塞(TACE)、靶向药物治疗及免疫治疗等，然而现有方法治疗效果远不能令人满意，其中生存时间提高不足3个月。现有抗肿瘤药物多有不良反应且价格高昂，临床的大剂量使用不仅增大了药物的副作用，还提高了患者的治疗成本。因此，寻找新药和新药联合施用提高抗肿瘤效果、降低药物副作用和成本，对于肿瘤治疗具有重要而迫切的意义。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供豹蛙抗瘤酶和维生素C具有协同增强的促进癌细胞凋亡的作用，特别是肝癌，为肝癌的治疗提供良好的基础。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种抗癌药物，其主要组分为豹蛙抗瘤酶和维生素C。豹蛙抗瘤酶(onconase,ONC)是一种具有广谱抗实体瘤的的蛋白，是第一个进入抗肿瘤临床试验的核糖核酸酶，其良好的抗肿瘤效果、低免疫原性和低耐药性等优点备受青睐。现有研究认为肿瘤药物的高剂量使用有较多副作用，因此临床为了保证药效的情况下更倾向于联合药物的治疗。维生素C(vitaminC,VC)，一种水溶性维生素，在癌症治疗和减轻化疗不良反应之间具有明显的效果，同时，VC具有价格低廉等优势。但新型的抗癌药ONC与VC联合疗效如何尚未见报道。鉴于此，本专利技术以大鼠肝癌细胞株RH-35为研究对象，研究两种药物的单独与联合作用，评估两者联合作用的效果，为后期的肿瘤药物联合开发奠定基础。具体地，本专利技术用ONC和VC单药处理RH-35细胞，发现ONC和VC呈浓度依赖性显著抑制细胞增殖，并能降低细胞密度，使细胞核发生破碎等明显变化，且有凋亡小体等典型凋亡特征出现，进一步验证了ONC和VC能够抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。另外，通过CI值与等效线分析图得到，ONC与VC联合具有协同抑制作用。这两种药物的作用机制与现有的其它肿瘤化疗药物非常不同，对ONC的多种作用机制的主要研究集中在它能够特异性的作用于RNA(tRNA)，不同于传统的阻断DNA双链合成，或者作用特定蛋白，降解RNA抑制蛋白质的合成，进而诱导肿瘤细胞凋亡。而VC的抗癌作用机制可能为捕灭氧自由基，保护正常细胞免受损失，并通过诱导氧化应激，抑制糖酵解和能量危机，诱导细胞凋亡，选择性杀死癌细胞。本专利技术凋亡检测结果提示，通过两药联合可以大大提高诱导的细胞凋亡率，进一步证明两药联合使用具有协同增强作用。综上所述，本专利技术通过检测ONC和VC的联合作用，初步得到两者在体外细胞水平上协同促进大鼠肝癌RH-35细胞凋亡，这为进一步用于体内实验研究奠定了基础。进一步地，所述豹蛙抗瘤酶和维生素C的质量比例为1:50-800，优选为1:50。如在不同的实施例中，豹蛙抗瘤酶和维生素C的质量比例为1:50、1:100、1:200、1:300、1:400、1:500、1:600、1:700、1:800等等。进一步地，所述癌为肝癌。进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料，所述药学可接受的辅料包括稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、矫味剂、表面活化剂、稳定剂中的任一种或多种组合。进一步地，所述赋形剂包括甘露醇、乳糖、淀粉、右旋糖酐、微晶纤维素中的任一种或多种组合。进一步地，所述崩解剂包括聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素中的任一种或多种组合。进一步地，所述润滑剂包括滑石粉、硬脂酸镁中的任一种或两种组合。进一步地，所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂中的任一种。本专利技术还提供了上述的抗癌药物在促进癌细胞凋亡中的应用。进一步地，所述癌细胞为肝癌。本专利技术提供的抗癌药物应用于治疗肝癌的症状。肝癌的治疗方法，包括给予受试者有效量的上述抗癌药物。给药方式可以为口服、静脉注射或者是透皮渗透方式，施加于需要治疗的患者。药学有效量是指以应用药物治疗可获得的合理的效益/风险比、足以治疗疾病的数量。有效剂量的水平可以取决于一些因素来确定，包括患者的疾病类型、严重度、药物的活性、对药物的敏感性、施用时间、施用途径、排出率、治疗周期、同时使用的药物、以及医药领域公知的其他因素。本专利技术的药物可以作为独立的治疗试剂施用，或与其他治疗试剂组合施用。并且，本专利技术的组合物可以连续地或同时地添加典型的治疗试剂，组合物可以单次或多次施用。重要的是考虑上述所有因素、以可以产生最大效果而没有副作用的最小剂量施用，所述剂量可由医师根据病人的病情、年龄等决定。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术首次发现豹蛙抗瘤酶和维生素C具有协同增强促进RH-35细胞凋亡的作用。(2)本专利技术提供的抗癌药物为肝癌的治疗提供良好的理论基础。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为本专利技术实施例1中ONC的分离纯化的图；图2为本专利技术实施例1中用药24小时后细胞形态的变化显微镜观察图；图3为本专利技术实施例1中药24小时后细胞核形态的变化Hoechst染色在倒置荧光显微镜下的观察图；图4为本专利技术实施例1中ONC和VC对RH-35细胞增殖的抑制率柱形图；图5为本专利技术实施例1中ONC和VC联合作用的等效线分析图；图6为本专利技术实施例2中不同组别的细胞凋亡分选图以及对应的柱形图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例11材料与方法1.1材料ONC固体粉末(本实验室利用毕赤酵母系统表达、分离纯化得到，纯度大于95％，收率高于90％，如图1所示，图1中，1：上清；2：双水相上相；3：双水相中相；4：双水相下相；5：超滤浓缩液；6-7：平衡液洗脱；M：proteinladder)、VC粉末(由河南新乡华星药厂提供)、大鼠肝癌RH-35细胞(中科院上海生命科学研院细胞库)、DMEM培养基和胎牛血清FBS(Gibico公司)、磺酰罗丹明B(SulforhodamineB,SRB,Sigm公司)、凋亡检测试剂盒PEAnnexinVApoptosisDetectionKitI(BDPharmingent)，其余试剂均为国产分析纯。1.2实验方法1.2.1细胞培养大鼠肝癌细胞RH-35于含10％FBS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗癌药物，其特征在于，主要组分为豹蛙抗瘤酶和维生素C。

【技术特征摘要】
1.一种抗癌药物，其特征在于，主要组分为豹蛙抗瘤酶和维生素C。2.根据权利要求1所述的抗癌药物，其特征在于，所述豹蛙抗瘤酶和维生素C的质量比例为1:50-800，优选为1:50。3.根据权利要求1所述的抗癌药物，其特征在于，所述癌为肝癌。4.根据权利要求1-3任一项所述的抗癌药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料，所述药学可接受的辅料包括稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、矫味剂、表面活化剂、稳定剂中的任一种或多种组合。5.根据权利要求4所述的抗癌药物，其特征在于，所述赋形剂包括甘露醇、乳糖、淀粉、...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨刚刚，王泽，常翠芳，王改平，齐剑英，张全义，张全海，吕中原，郗敏仰，徐存拴，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：河南,41