一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法技术

本发明专利技术适用于疫苗制备技术领域，提供了一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，包括如下步骤：步骤1：选择标准毒种；步骤2：将标准毒种制备成生产用毒种；步骤3：抗原制备材料的准备和根据生产用毒种对抗原的制备；步骤4：抗原的检验和抗原浓缩灭活；只需在种鸭开产前接种，两种疫苗的接种剂量分别为1ml/只和0.8ml/只，接种疫苗后21日左右，即可收集种蛋用于孵化，以雏鸭的鸭呼肠孤病毒预防保护率大于等于98％为标准，两种疫苗免疫后的种蛋利用周期分别为接种疫苗后6周和9周，再两种疫苗免疫后6周和9周后再次加强免疫疫苗，剂量同前，如此反复接种疫苗直至种鸭淘汰，两种佐剂的疫苗对鸭呼肠孤病毒感染导致“肝脾坏死症”的预防效果确切。

A preparation method for inactivated vaccine against duck reovirus

The invention is applicable to the field of vaccine preparation technology, and provides a preparation method of inactivated vaccine for preventing duck reovirus, including the following steps: step 1: selecting standard virus seeds; step 2: preparing standard virus seeds for production; step 3: preparation of antigen preparation materials and preparation of antigen according to production virus seeds. Step 4: Detection of antigen and concentration of antigen inactivation; only inoculate ducks before parturition, the dosage of the two vaccines is 1 ml/1 and 0.8 ml/1, respectively. After 21 days of inoculation, the eggs can be collected for hatching. The protection rate of ducklings against duck reovirus is more than 98%. The two vaccines are immunized. The vaccination period of the latter eggs was 6 weeks and 9 weeks after vaccination respectively, and the vaccination dose was the same as before, so the vaccines were repeatedly vaccinated until the breeding ducks were eliminated. The vaccines with the two adjuvants had a definite preventive effect on the \hepatosplenic necrosis\ caused by duck reovirus infection.

【技术实现步骤摘要】
一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法
本专利技术属于疫苗制备
，尤其涉及一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法。
技术介绍
2017年3月以来，国内大型肉鸭养殖集团的养殖场流行一种雏鸭临床症状为脚软、拉稀和病理变化为肝脏有微黄色坏死灶并偶见伴有出血点、脾脏有灰白色坏死灶或脾脏肿大呈紫黑色的疾病，临床称为鸭“肝脾坏死症”，致病病原为鸭呼肠孤病毒，各品种鸭如麻鸭、白羽肉鸭、杂交鸭等均易发生，但以樱桃谷鸭更易发生，发病日龄以9日龄以内居多，发病率30％以内，发病后7日内死亡率10％左右。目前临床上除了用鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体在1-5日龄时给雏鸭注射0.5-0.8ml/只来预防鸭呼肠孤病毒导致的“肝脾坏死症”外，无疫苗用于预防鸭呼肠孤病毒，另外，给雏鸭注射鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体需每只都注射，存在工作量大、成本高、接种操作不当易导致雏鸭死亡的问题。
技术实现思路
本专利技术提供一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，旨在解决临床上除了用鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体在1-5日龄时给雏鸭注射0.5-0.8ml/只来预防鸭呼肠孤病毒导致的“肝脾坏死症”外，无疫苗用于预防鸭呼肠孤病毒，另外，给雏鸭注射鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体需每只都注射，存在工作量大、成本高、接种操作不当易导致雏鸭死亡的问题。本专利技术是这样实现的，一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，包括如下步骤：步骤1：选择标准毒种；步骤2：将标准毒种制备成生产用毒种；步骤3：抗原制备材料的准备和根据生产用毒种对抗原的制备；步骤4：抗原的检验和抗原浓缩灭活；步骤5：通过浓缩灭活的抗原对疫苗的配置；步骤6：疫苗的保存及检验。优选的，所述步骤1包括检验基础毒种标准和检验用强毒标准两种。优选的，所述步骤2为将鸭呼肠孤病毒JS株基础毒种用生理盐水20倍稀释，经尿囊腔接种11日龄SPF鸭胚，每胚0.1ml，用蜡封孔，于37℃静置孵化，收集48～168小时死亡鸭胚，于4℃冷却6～12小时，收获胚液(羊水和尿囊液)，分装，注明收获日期、毒种代次及装量，于-70℃以下保存。优选的，所述步骤3中制备抗原材料选择发育良好的11日龄易感鸭胚作为制备抗原用材料。优选的，所述步骤3中抗原的制备包括毒种的接种、实验品孵育和观察、抗原的收获。优选的，所述步骤4中抗原的检验标准为前期的抗原检验和后期的灭活检验。优选的，所述步骤5中疫苗的配置分为两种疫苗，分别为鸭呼肠孤病毒油佐剂灭活疫苗、鸭呼肠孤病毒蜂胶佐剂灭活疫苗制备。优选的，所述步骤5中鸭呼肠孤病毒油佐剂灭活疫苗的制备过程为油相和水相的制备以及油相和水相的乳化；所述步骤5中鸭呼肠孤病毒蜂胶佐剂灭活疫苗制备过程为蜂胶的制备和鸭呼肠孤病毒蜂胶佐剂灭活疫苗的配置。优选的，所述步骤6中检验均包括通用的检验以及特定的检验，通用检验包括性状、无菌检验、安全检验、效力检验、汞类防腐剂残留量，特定检验用于鸭呼肠孤病毒油佐剂灭活疫苗制备中的检验包括外状、外型、稳定性、黏度。优选的，所述一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法还包括鸭呼肠孤病毒灭活疫苗质量标准。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，只需在种鸭开产前接种，两种疫苗的接种剂量分别为1ml/只和0.8ml/只，接种疫苗后21日左右，即可收集种蛋用于孵化，以雏鸭的鸭呼肠孤病毒预防保护率大于等于98％为标准，两种疫苗免疫后的种蛋利用周期分别为接种疫苗后6周和9周，再两种疫苗免疫后6周和9周后再次加强免疫疫苗，剂量同前，所产种蛋又可以利用6周和9周，如此反复接种疫苗直至种鸭淘汰，两种佐剂的疫苗对鸭呼肠孤病毒感染导致“肝脾坏死症”的预防效果确切，与现有技术方案比较，本专利技术技术方案只需给种鸭注射疫苗，雏鸭无需注射，即可预防鸭呼肠孤病毒感染导致“肝脾坏死症”，可显著减少工作量1/3-1/2、成本降低至约1/10，雏鸭成活率提高0.1-0.15％。附图说明图1为本专利技术的整体结构示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。请参阅图1，本专利技术提供一种技术方案：一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，包括如下步骤：步骤1：选择标准毒种；步骤2：将标准毒种制备成生产用毒种；步骤3：抗原制备材料的准备和根据生产用毒种对抗原的制备；步骤4：抗原的检验和抗原浓缩灭活；步骤5：通过浓缩灭活的抗原对疫苗的配置；步骤6：疫苗的保存及检验。在本实施方式中，一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备具体过程：首先将鸭呼肠孤病毒JS株基础毒种用生理盐水20倍稀释，经尿囊腔接种11日龄SPF鸭胚，每胚0.1ml，用蜡封孔，于37℃静置孵化，收集48～168小时死亡鸭胚，于4℃冷却6～12小时，收获胚液(羊水和尿囊液)，分装，注明收获日期、毒种代次及装量，于-70℃以下保存作为生产用毒种，然后选择发育良好的11日龄易感鸭胚作为制备抗原用材料，随后用灭菌生理盐水将生产用毒种作20倍稀释，经尿囊腔接种11日龄易感鸭胚，每胚0.1ml，用蜡封孔，于37℃静置孵育，弃去48小时前死亡的鸭胚，以后每隔6小时照蛋1次，收集48～120小时死亡鸭胚，于4℃冷却6～12小时，鸭胚用碘酊消毒蛋壳表面气室部，无菌操作除去气室部蛋壳，收获胚液，置于灭菌容器内，标记，即为抗原，置-20℃保存，同时取样用于检验，在收获的同时，检查胎儿病变，将鸭胚体无典型病变、胎儿腐败、鸭胚尿囊液浑浊及疑似污染者弃去不用，将检验合格的抗原于2～8℃条件下解冻、混合，于4℃条件下4000rpm离心30min，取上清液用4层灭菌纱布过滤，收集滤液用截留分子量为6000kd的中空纤维超滤器2倍浓缩，浓缩液加入终浓度为0.2％的甲醛溶液(含量：HCHO为37.0～40.0％)，密闭后置37℃温箱中灭活24小时(其间4～6小时振摇1次，每次3分钟)，于4℃保存备用，同时取样用于灭活检验，随后分别对两种疫苗进行配置，首先对鸭呼肠孤病毒油佐剂灭活疫苗进行制备：首先油相的制备，取94份注射用白油，加入2份硬脂酸铝，边加边搅拌，加热直至完全透明，再加入6份司本-80，充分混匀，115℃高压灭菌30min，冷却至室温，备用，随后水相的制备，将灭活的浓缩抗原96份加入4份灭菌的吐温-80，充分振摇后使吐温-80完全溶解，最后进行乳化，水相与油相按体积比1:1的比例，将油相导入胶体磨，2500rpm搅拌，缓慢加入75％的水相，约90s内加完，停机后加入剩余25％的水相，10000rpm乳化3～5min，在终止乳化前加入1.0％的硫柳汞溶液，使其终浓度为0.01％，无菌操作分装，加盖密封，于2～8℃避光保存，保存期为12个月；鸭呼肠孤病毒蜂胶佐剂灭活疫苗制备包括蜂胶制备，首先市售蜂胶提取物，于-20℃冷冻24小时以上，用灭菌滤布包裹，砸碎，按蜂胶：酒精(分析纯级)1:1(W/V)配制，装入灭菌容器内，密封，于室温下保存，每隔12小时振摇1次，每次10分钟，直至蜂胶80％以上溶解，取上清用8层灭菌纱布过滤，收集滤液，分装，于4℃保存备用，然后疫苗配制，将灭活的浓缩抗原：灭菌注射用水：蜂胶按4.5:4.5:1(V/V/V)配制，加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：选择标准毒种；步骤2：将标准毒种制备成生产用毒种；步骤3：抗原制备材料的准备和根据生产用毒种对抗原的制备；步骤4：抗原的检验和抗原浓缩灭活；步骤5：通过浓缩灭活的抗原对疫苗的配置；步骤6：疫苗的保存及检验。

【技术特征摘要】
1.一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：选择标准毒种；步骤2：将标准毒种制备成生产用毒种；步骤3：抗原制备材料的准备和根据生产用毒种对抗原的制备；步骤4：抗原的检验和抗原浓缩灭活；步骤5：通过浓缩灭活的抗原对疫苗的配置；步骤6：疫苗的保存及检验。2.如权利要求1所述的一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，其特征在于：所述步骤1包括检验基础毒种标准和检验用强毒标准两种。3.如权利要求1所述的一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，其特征在于：所述步骤2为将鸭呼肠孤病毒JS株基础毒种用生理盐水20倍稀释，经尿囊腔接种11日龄SPF鸭胚，每胚0.1ml，用蜡封孔，于37℃静置孵化，收集48～168小时死亡鸭胚，于4℃冷却6～12小时，收获胚液(羊水和尿囊液)，分装，注明收获日期、毒种代次及装量，于-70℃以下保存。4.如权利要求1所述的一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，其特征在于：所述步骤3中制备抗原材料选择发育良好的11日龄易感鸭胚作为制备抗原用材料。5.如权利要求1所述的一种预防鸭呼肠孤病毒的灭活疫苗制备方法，其特征在于：所述步骤3中抗原的制备包括毒种的接种、实...

【专利技术属性】
技术研发人员：张立武，赵光伟，周宇，邵骜俊，张思旺，李来旭，李阁，
申请(专利权)人：重庆永健生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50