一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺及其制备的辣木叶饲料制造技术

本发明专利技术属于饲料微生物技术领域，公开了一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺及其制备的辣木叶饲料。该方法包括：将聚多曲霉在PDA琼脂斜面培养基上进行培养，待孢子长出后，使用生理盐水将孢子冲洗下来，并稀释成孢子悬浮液；然后将经灭菌的辣木叶粉和淀粉混合，再添加营养盐，制成辣木叶混合物；最后将辣木叶混合物和水混合，在温度30℃，将所得的微生物接种，搅拌均匀，进行发酵，得到发酵辣木叶饲料。本发明专利技术通过发酵工艺，不仅能够显著降低辣木叶粉中抗营养因子单宁含量，增加适口性，同时显著提高辣木粗蛋白含量，提高了辣木叶饲料的营养价值，有益于动物机体消化吸收。

Fermentation process of fungus degrading tannin in Moringa leaf powder and its spicy leaf feeds prepared

The invention belongs to the technical field of feed microorganism, and discloses a fermentation process for Fungi Degrading tannin in spicy wood leaf powder and a spicy wood leaf feed prepared by the same. The method includes: culturing polyaspergillus on PDA agar slant medium, washing the spores with saline solution after spore growth, and diluting them into spore suspension; then mixing sterilized hot wood leaf powder and starch, and adding nutrients to make hot wood leaf mixture; finally, mixing hot wood leaves mixture. Mixing with water, inoculating the microorganisms at 30 C, stirring evenly and fermenting, the fermented pepper leaf feed was obtained. By the fermentation process, the invention can not only significantly reduce the content of tannin of the anti-nutrient factor in the leaf powder of Moringa oleifera, increase the palatability, but also significantly increase the content of crude protein of Moringa oleifera, improve the nutritive value of the leaf feed of Moringa oleifera, and be beneficial to the digestion and absorption of animal organisms.

【技术实现步骤摘要】
一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺及其制备的辣木叶饲料
本专利技术属于饲料微生物
，更具体地，涉及一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺及其制备的辣木叶饲料。
技术介绍
辣木(MoringaoleiferaLam)属于辣木树科，广泛种植于亚洲，非洲区域。辣木营养丰富，是一种高蛋白质的植物，且富含维生素A、维生素B、维生素C1，维生素E，钙，铁，镁，锌，钾，钠等微量元素，是优质的新型饲料原料。然而，辣木中存在抗营养因子单宁(Tannin)，限制了辣木在饲料行业中的添加与应用。单宁是指一类酚类化合物，单宁能够与蛋白质结合，形成沉淀或者絮状物，降低蛋白质的利用；能够与钙，镁，铁，铜，铅等重金属结合形成络合物，产生沉淀，降低微量元素的利用；此外，单宁水解产物包含多种酚类化合物，其通过食物可致动物机体中毒。
技术实现思路
为了解决上述现有技术中存在的不足之处，提供一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺。该发酵工艺能够降低辣木叶粉中抗营养因子单宁含量，同时，显著提高了辣木叶粉中粗蛋白含量。本专利技术的另一目的在于提供上述方法制备的辣木饲料。该辣木饲料中粗蛋白含量高，是理想的新型生物饲料。本专利技术的目的通过下述技术方案来实现：一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺，包括如下具体步骤：S1.发酵微生物悬浮液的制备：将聚多曲霉在PDA琼脂斜面培养基上进行培养，待孢子长出后，使用生理盐水将孢子冲洗下来，并稀释成孢子悬浮液；S2.辣木叶混合物的制备：将经灭菌的辣木叶粉和淀粉混合，再添加营养盐，制成辣木叶混合物；S3.辣木叶发酵工艺：辣木叶混合物和水混合，在温度25～35℃时将步骤S1所得的微生物接种，搅拌均匀进行发酵，得到辣木叶饲料。优选地，步骤S1中所述PDA琼脂斜面培养基的组成为：马铃薯提取液1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g，所述PDA琼脂斜面培养基在pH＝6，经121℃灭菌20min制得。优选地，步骤S1中所述的培养的温度为25～35℃，所述的培养的时间为3～6天，所述的生理盐水的浓度为0.8～0.96wt.％。优选地，步骤S1中所述的孢子悬浮液的浓度为(0.5～1.5)×106个/mL。优选地，步骤S2中所述的辣木叶粉和淀粉的质量比为(3～5)：1。优选地，步骤S2中所述的营养盐包括：葡萄糖、NaNO3、KH2PO4、MgSO4、KCl和FeSO4。更为优选地，所述葡萄糖、NaNO3、KH2PO4、MgSO4、KCl和FeSO4的质量比为30：3：1：0.5：0.5：0.01。优选地，步骤S3中所述的辣木叶混合物和水的质量比为(0.5～2)：1，所述的接种量为3～5％，所述的发酵的时间为6～9天，所述的发酵温度为25～35℃。所述的真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺制备的辣木叶饲料。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术通过发酵工艺，不仅能够显著降低辣木叶粉中单宁抗营养因子含量，增加适口性，同时显著提高辣木叶粉的粗蛋白。2.本专利技术的发酵工艺不仅提高了辣木叶粉的营养价值，还有益于动物机体消化吸收。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。实施例1聚多曲霉的分离与鉴定利用降解单宁微生物筛选培养基(800mL牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，100mL10％单宁水溶液，100mL0.04％溴酚蓝水溶液，pH6.0，121℃灭菌20分钟)对辣木树根部土壤微生物进行筛选，得到一株具有降解辣木单宁的微生物。利用引物ITS1(序列：TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和ITS4(序列：TCCTCCGCTTATTGATATGC)对筛选的降解单宁菌株基因进行PCR扩增，最后对PCR扩增后的产物进行测序，序列测定由上海英俊生物技术有限公司完成，测序结果如下所示：将所测序列提交至NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)，结果显示该序列与聚多曲霉同源性为100％。说明本专利技术分离的具有降解辣木单宁的微生物为聚多曲霉。实施例2发酵辣木叶饲料的制备1.孢子悬浮液制备：首先，将聚多曲霉在马铃薯蔗糖琼脂(PDA)斜面培养基(马铃薯提取液1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g，pH6.0，121℃灭菌20分钟。)上进行培养(30℃，5天)，也可使用市售的PDA培养基。然后，待孢子长出后，使用0.85％的生理盐水将孢子冲洗下来，并稀释成1×106个/ml的孢子悬浮液。2.辣木叶混合物制备：辣木混合物由80％辣木叶粉和20％淀粉组成，同时，向辣木混合物中添加葡萄糖(30g‰)，NaNO3(3g‰)，KH2PO4(1g‰)，MgSO4(0.5g‰)，KCl(0.5g‰)，FeSO4(0.01g‰)。3.辣木叶饲料固体发酵工艺：辣木混合物与添加水的质量比为1：1；温度：30℃，孢子悬浮液接种量：5％。搅拌均匀，放于三角瓶进行发酵，灭菌报纸封口发酵9天，得到辣木叶饲料。测试结果：利用钨酸钠-磷钼酸比色分光光度法(GB/T27985-2011)测定辣木叶饲料发酵前后单宁的含量，结果表明，辣木叶混合物发酵前单宁含量为11789.2mg/kg，辣木叶混合物发酵后单宁含量为2792.1mg/kg，单宁降解率为76％。利用凯氏定氮法(GB/T6432-1994)测定辣木叶粉发酵前后粗蛋白含量，结果表明，发酵前辣木叶粉粗蛋白为19.9％，发酵后辣木叶粉粗蛋白为25.8％，提高率为29.6％。综上所述，通过利用聚多曲霉，在辣木叶混合物重量与添加水体积比为1：1；温度：30℃，孢子悬浮液接种量：5％的条件下发酵辣木叶粉9天，能够显著的降低单宁的含量，并提高粗蛋白含量。实施例3发酵辣木叶饲料的制备1.孢子悬浮液制备：首先，将聚多曲霉在PDA琼脂斜面培养基(马铃薯提取液1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g，pH6.0，121℃灭菌20分钟。)上进行培养(30℃，5天)。然后，待孢子长出后，使用0.85％的生理盐水将孢子冲洗下来，并稀释成1×106个/ml的孢子悬浮液。2.辣木叶混合物制备：辣木混合物由80％辣木叶粉和20％淀粉组成，同时，向辣木混合物中添加葡萄糖(30‰)，NaNO3(3g‰)，KH2PO4(1‰)，MgSO4(0.5‰)，KCl(0.5‰)，FeSO4(0.01‰)。3.辣木叶饲料固体发酵工艺：辣木叶混合物重量与添加水体积比为1：1；温度：30℃，孢子悬浮液接种量：3％。搅拌均匀，放于三角瓶进行发酵，灭菌报纸封口发酵6天，得到发酵辣木叶饲料。测试结果：利用钨酸钠-磷钼酸比色分光光度法(GB/T27985-2011)测定辣木饲料发酵前后单宁的含量，结果表明，辣木叶混合物饲料发酵前单宁含量为11789.2mg/kg，辣木叶混合物发酵后单宁含量为7131.3mg/kg，单宁降解率为39.5％。利用凯氏定氮法(GB/T6432-1994)测定辣木叶饲料发酵前后粗蛋白含量，结果表明，发酵前辣木叶饲料粗蛋白为19.9％，发酵后辣木叶饲料粗蛋白为24.6％，提高率为23.6％。实施例4发酵辣木叶饲料的制备1.孢子悬浮液制备：首本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺，其特征在于，包括如下具体步骤：S1.发酵微生物悬浮液的制备：将聚多曲霉在PDA琼脂斜面培养基上进行培养，待孢子长出后，使用生理盐水将孢子冲洗下来，并稀释成孢子悬浮液；S2.辣木叶混合物的制备：将经灭菌的辣木叶粉和淀粉混合，再添加营养盐，制成辣木叶混合物；S3.辣木叶发酵工艺：辣木叶混合物和水混合，在温度为25～35℃时将步骤S1所得的微生物接种，搅拌均匀进行发酵，得到辣木叶饲料。

【技术特征摘要】
1.一种真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺，其特征在于，包括如下具体步骤：S1.发酵微生物悬浮液的制备：将聚多曲霉在PDA琼脂斜面培养基上进行培养，待孢子长出后，使用生理盐水将孢子冲洗下来，并稀释成孢子悬浮液；S2.辣木叶混合物的制备：将经灭菌的辣木叶粉和淀粉混合，再添加营养盐，制成辣木叶混合物；S3.辣木叶发酵工艺：辣木叶混合物和水混合，在温度为25～35℃时将步骤S1所得的微生物接种，搅拌均匀进行发酵，得到辣木叶饲料。2.根据权利要求1所述的真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺，其特征在于，步骤S1中所述PDA琼脂斜面培养基的组成为：马铃薯提取液1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g，所述PDA琼脂斜面培养基在pH＝6，经121℃灭菌20min制得。3.根据权利要求1所述的真菌降解辣木叶粉中单宁的发酵工艺，其特征在于，步骤S1中所述的培养的温度为25～35℃，所述的培养的时间为3～6天，所述的生理盐水的浓度为0.8～0.96wt.％。4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘庆，陈标，高柳玲，刘莎，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44