一种提高玉米杂交种子生产效率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高玉米杂交种子生产效率的方法,包括以下步骤：S1、将玉米种子培养得到玉米愈伤组织；S2、将玉米愈伤组织分离成玉米原生质体溶液；S3、将玉米原生质体溶液离去上清，沉淀重悬；S4、将玉米原生质体加入PEG1000，90s后向试管中缓慢添加9.5mlHanks溶液，将试管在水浴锅中静置，离心弃上清，向细胞沉淀中加入1ml细胞培养液，轻轻混匀，37℃水浴中培养30min得到活化的玉米原生质体融合细胞；S5、将玉米原生质体融合细胞利用植物离体组织培养的方法培养成玉米再生杂种植株。本发明专利技术，通过将玉米种子使用体细胞杂交的方法进行育种，大大的缩短了育种周期，而且也提高了育种的质量，减少了育种时间，使得育种对象的针对性增加。

A method to improve the efficiency of maize hybrid seed production

The invention discloses a method for improving the production efficiency of Maize Hybrid seeds, which comprises the following steps: S1, cultivating maize seeds to obtain maize callus; S2, separating maize callus into maize protoplast solution; S3, removing maize protoplast solution from supernatant, precipitating and suspending; S4, adding maize protoplast. After PEG 1000 and 90s, 9.5 ml Hanks solution was slowly added to the test tube, and the test tube was placed in a water bath pot. The supernatant was centrifuged and discarded. 1 ml cell culture medium was added to the cell precipitation. The activated maize protoplast fusion cells were obtained by gently mixing and culturing in 37 C water bath for 30 minutes. S5. The maize protoplast fusion cells were isolated from plants. Tissue culture method was used to cultivate maize hybrid plants. The invention greatly shortens the breeding cycle, improves the quality of breeding, reduces the breeding time and increases the pertinence of breeding objects by using somatic cell hybridization method to breed maize seeds.

【技术实现步骤摘要】
一种提高玉米杂交种子生产效率的方法
本专利技术涉及植物育种
，尤其涉及一种提高玉米杂交种子生产效率的方法。
技术介绍
商业种子生产是涉及许多步骤的复杂过程，就玉米而言，近交体植株必须首先在允许雄性花粉使雌性穗上的穗丝受精的条件下在大田中杂交，以便生产将被售予农民的种子，但是现在玉米种子杂交都是在大田上进行雌花授粉，这种授粉的时间长，生产一个稳定的杂交种子的生产周期长。因此，我们提出了一种提高玉米杂交种子生产效率的方法用于解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的稳定的玉米杂交种子的生长周期长的缺点，而提出的一种提高玉米杂交种子生产效率的方法。一种提高玉米杂交种子生产效率的方法，包括以下步骤：S1、将两种性状互补，性能优良的玉米种子在MS固体培养基中进行培养，得到玉米愈伤组织；S2、将玉米愈伤组织放置到MS液体培养基中，向MS液体培养基中添加混合酶溶液，从而将玉米愈伤组织分离成细胞团再继续分离成玉米原生质体溶液；S3、将玉米原生质体溶液转移到10ml的圆底离心管中，在离心温度为4℃的条件下100rpm/min离心5min，在不接触玉米原生质体沉淀的基础上去上清，然后使用生理盐水将玉米原生质体沉淀重悬，使得玉米原生质体的计数为2×105-5×105cells/ml；S4、将玉米原生质体取10ml于试管中，并向试管中加入0.5ml质量浓度为50%的PEG1000,使用玻璃棒在试管中缓慢搅拌，90s后向试管中缓慢添加9.5mlHanks溶液，轻轻的吹打均匀后，将试管在37℃水浴锅中静置5min，15000rpm离心5min后弃上清，向细胞沉淀中加入1ml细胞培养液，轻轻混匀，37℃水浴中培养30min得到活化的玉米原生质体融合细胞；S5、将玉米原生质体融合细胞利用植物离体组织培养的方法培养成玉米再生杂种植株。优选的，所述MS固体培养基的组成成分为硝酸钾1.9g/L，硝酸铵1.6g/L，磷酸二氢钾0.17g/L，硫酸镁0.37g/L，氯化钙4.4g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，硫酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，硫酸亚铁27.8mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L，苄基腺嘌呤0.4mg/l，6-糠基氨基嘌呤0.4mg/l，琼脂2%，余量为蒸馏水。优选的，所述MS液体培养基的组成成分为硝酸钾1.9g/L，硝酸铵1.6g/L，磷酸二氢钾0.17g/L，硫酸镁0.37g/L，氯化钙4.4g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，硫酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，硫酸亚铁27.8mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L，苄基腺嘌呤0.4mg/l，6-糠基氨基嘌呤0.4mg/l，余量为蒸馏水。优选的，所述混合酶溶液包括以下重量百分比的原料：纤维素酶溶液6%，果胶酶溶液3%，氯化钙溶液3%和甘露醇溶液12%。优选的，所述Hanks溶液的组成成分为氯化钠80g/L，七水硫酸镁1g/L，氯化钾4g/L，六水氯化镁1g/L，氯化钙1.4g/L，十二水硫酸氢二钠1.5g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，葡萄糖10g/L，余量为蒸馏水。优选的，所述细胞培养液包括以下重量百分比的原料：酵母提取液0.5%，麦芽汁0.6%，酪蛋白水解物0.6%，马铃薯抽提物12%，0.08%的苄基腺嘌呤，0.08%的6-糠基氨基嘌呤，余量为蒸馏水。本专利技术的有益效果是：本专利技术，通过将玉米种子使用体细胞杂交的方法进行育种，大大的缩短了育种周期，而且也提高了育种的质量，减少了育种时间，使得育种对象的针对性增加；整个过程简单高效，适合大范围的推广和应用。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解说。实施例一种提高玉米杂交种子生产效率的方法，包括以下步骤：S1、将两种性状互补，性能优良的玉米种子在MS固体培养基（MS固体培养基的组成成分为硝酸钾1.9g/L，硝酸铵1.6g/L，磷酸二氢钾0.17g/L，硫酸镁0.37g/L，氯化钙4.4g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，硫酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，硫酸亚铁27.8mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L，苄基腺嘌呤0.4mg/l，6-糠基氨基嘌呤0.4mg/l，琼脂2%，余量为蒸馏水）中进行培养，得到玉米愈伤组织；S2、将玉米愈伤组织放置到MS液体培养基中（MS液体培养基的组成成分为硝酸钾1.9g/L，硝酸铵1.6g/L，磷酸二氢钾0.17g/L，硫酸镁0.37g/L，氯化钙4.4g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，硫酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，硫酸亚铁27.8mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L，苄基腺嘌呤0.4mg/l，6-糠基氨基嘌呤0.4mg/l，余量为蒸馏水），向MS液体培养基中添加混合酶溶液（混合酶溶液包括以下重量百分比的原料：纤维素酶溶液6%，果胶酶溶液3%，氯化钙溶液3%和甘露醇溶液12%），从而将玉米愈伤组织分离成细胞团再继续分离成玉米原生质体溶液；S3、将玉米原生质体溶液转移到10ml的圆底离心管中，在离心温度为4℃的条件下100rpm/min离心5min，在不接触玉米原生质体沉淀的基础上去上清，然后使用生理盐水将玉米原生质体沉淀重悬，使得玉米原生质体的计数为4×105cells/ml；S4、将玉米原生质体取10ml于试管中，并向试管中加入0.5ml质量浓度为50%的PEG1000,使用玻璃棒在试管中缓慢搅拌，90s后向试管中缓慢添加9.5mlHanks溶液（Hanks溶液的组成成分为氯化钠80g/L，七水硫酸镁1g/L，氯化钾4g/L，六水氯化镁1g/L，氯化钙1.4g/L，十二水硫酸氢二钠1.5g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，葡萄糖10g/L，余量为蒸馏水），轻轻的吹打均匀后，将试管在37℃水浴锅中静置5min，15000rpm离心5min后弃上清，向细胞沉淀中加入1ml细胞培养液（细胞培养液包括以下重量百分比的原料：酵母提取液0.5%，麦芽汁0.6%，酪蛋白水解物0.6%，马铃薯抽提物12%，0.08%的苄基腺嘌呤，0.08%的6-糠基氨基嘌呤，余量为蒸馏水），轻轻混匀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高玉米杂交种子生产效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将两种性状互补，性能优良的玉米种子在MS固体培养基中进行培养，得到玉米愈伤组织；S2、将玉米愈伤组织放置到MS液体培养基中，向MS液体培养基中添加混合酶溶液，从而将玉米愈伤组织分离成细胞团再继续分离成玉米原生质体溶液；S3、将玉米原生质体溶液转移到10ml的圆底离心管中，在离心温度为4℃的条件下100rpm/min离心5min，在不接触玉米原生质体沉淀的基础上去上清，然后使用生理盐水将玉米原生质体沉淀重悬，使得玉米原生质体的计数为2×105‑5×105cells/ml；S4、将玉米原生质体取10ml于试管中，并向试管中加入0.5ml质量浓度为50%的PEG1000,使用玻璃棒在试管中缓慢搅拌，90s后向试管中缓慢添加9.5mlHanks溶液，轻轻的吹打均匀后，将试管在37℃水浴锅中静置5min，15000rpm离心5min后弃上清，向细胞沉淀中加入1ml细胞培养液，轻轻混匀，37℃水浴中培养30min得到活化的玉米原生质体融合细胞；S5、将玉米原生质体融合细胞利用植物离体组织培养的方法培养成玉米再生杂种植株。

【技术特征摘要】
1.一种提高玉米杂交种子生产效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将两种性状互补，性能优良的玉米种子在MS固体培养基中进行培养，得到玉米愈伤组织；S2、将玉米愈伤组织放置到MS液体培养基中，向MS液体培养基中添加混合酶溶液，从而将玉米愈伤组织分离成细胞团再继续分离成玉米原生质体溶液；S3、将玉米原生质体溶液转移到10ml的圆底离心管中，在离心温度为4℃的条件下100rpm/min离心5min，在不接触玉米原生质体沉淀的基础上去上清，然后使用生理盐水将玉米原生质体沉淀重悬，使得玉米原生质体的计数为2×105-5×105cells/ml；S4、将玉米原生质体取10ml于试管中，并向试管中加入0.5ml质量浓度为50%的PEG1000,使用玻璃棒在试管中缓慢搅拌，90s后向试管中缓慢添加9.5mlHanks溶液，轻轻的吹打均匀后，将试管在37℃水浴锅中静置5min，15000rpm离心5min后弃上清，向细胞沉淀中加入1ml细胞培养液，轻轻混匀，37℃水浴中培养30min得到活化的玉米原生质体融合细胞；S5、将玉米原生质体融合细胞利用植物离体组织培养的方法培养成玉米再生杂种植株。2.根据权利要求1所述的一种提高玉米杂交种子生产效率的方法，其特征在于，所述MS固体培养基的组成成分为硝酸钾1.9g/L，硝酸铵1.6g/L，磷酸二氢钾0.17g/L，硫酸镁0.37g/L，氯化钙4.4g/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，硫酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，硫酸亚铁27.8mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：合肥扬扬农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34