一种快速区分葡萄球菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速区分葡萄球菌的方法,包括如下步骤：步骤一、胰蛋白胨大豆肉汤培养基配制；步骤二、测定步骤：a.金黄色葡萄球菌培养、b.葡萄球菌发酵产物处理、c.采用气相色谱条件进行检测、d.结果判断。本发明专利技术利用新的气相色谱检测方法，突破了传统生化检测葡萄球菌耗时长，金黄色葡萄球菌和沃氏葡萄球菌生物学形态相似的缺点，能够快速精准地区分出葡萄球菌。

A rapid method for differentiating staphylococci

The invention discloses a method for quickly distinguishing staphylococcus, which comprises the following steps: step 1, preparation of tryptone soybean broth medium; step 2, determination steps: A. cultivation of Staphylococcus aureus, B. treatment of Staphylococcus fermentation products, C. detection by gas chromatography conditions, D. result judgment. The invention uses a new gas chromatography detection method, breaks through the shortcomings of traditional biochemical detection of staphylococcus, such as time-consuming, similarity of biological morphology between Staphylococcus aureus and Staphylococcus walker, and can quickly and accurately distinguish staphylococcus.

【技术实现步骤摘要】
一种快速区分葡萄球菌的方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种快速区分葡萄球菌的方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的形态特征为：菌落直径为2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外圈有一透明圈，沃氏葡萄球菌在Baird-Parker平板上的形态特征为：菌落直径为2-3mm，颜色呈灰黑色，周围为一浑浊带，两种葡萄球菌在培养皿上很难区分。
技术实现思路
专利技术目的：为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种快速区分葡萄球菌的方法。该方法采用一种新的气相色谱检测方法对金黄色葡萄球菌和沃氏葡萄球菌进行检测，能够快速准确地区分葡萄球菌。技术方案：一种快速区分葡萄球菌的方法，包括如下步骤：步骤一、胰蛋白胨大豆肉汤培养基配制：称取胰蛋白胨17g，植物蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，加入1000ml蒸馏水，分装到500ml锥形瓶中，在120℃的灭菌锅内湿热灭菌20min既得；步骤二、测定步骤：a.金黄色葡萄球菌培养、将金黄色葡萄球菌接种到有225ml的胰蛋白胨大豆肉汤培养基的无菌锥形瓶中，震荡均匀，在35℃，120r/min的恒温摇床中培养18-24h；b.葡萄球菌发酵产物处理将培养完成的金黄色葡萄球菌在8000r/min的条件下离心10min，取得上清液，取2.5ml上清液加入2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体进行检测。同样以胰蛋白胨大豆肉汤培养基为空白，取2.5ml培养基加入2.5ml2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体作为空白对照；c.采用气相色谱条件进行检测采用如下气相色谱条件进行检测：色谱柱：TG-WAXMS毛细管色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；温度为：柱箱恒温40℃保持1min，以每分钟10℃的速率升温至80℃；分流进样5:1；隔垫吹扫3ml/min，进样口220℃，检测器230℃；载气为高纯氮，载气流速1.2ml/min；进样量(μl)：1.0；d.结果判断若样品中能够检测到乙醇，则说明该菌株为金黄色葡萄球菌。作为优化：所述的快速区分葡萄球菌的方法的仪器如下：气相色谱仪；超净台，恒温培养箱，恒温摇床。作为优化：所述的快速区分葡萄球菌的方法的主要材料和试剂如下：胰蛋白胨、植物蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钾、琼脂、二硫化碳。有益效果：本专利技术利用新的气相色谱检测方法，突破了传统生化检测葡萄球菌耗时长，金黄色葡萄球菌和沃氏葡萄球菌生物学形态相似的缺点，能够快速精准地区分出葡萄球菌。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以使本领域的技术人员能够更好的理解本专利技术的优点和特征，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚的界定。本专利技术所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。具体实施例1一种快速区分葡萄球菌的方法，包括如下步骤：步骤一、胰蛋白胨大豆肉汤培养基配制：称取胰蛋白胨17g，植物蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，加入1000ml蒸馏水，分装到500ml锥形瓶中，在120℃的灭菌锅内湿热灭菌20min既得；步骤二、测定步骤：a.金黄色葡萄球菌培养、将金黄色葡萄球菌接种到有225ml的胰蛋白胨大豆肉汤培养基的无菌锥形瓶中，震荡均匀，在35℃，120r/min的恒温摇床中培养18h；b.葡萄球菌发酵产物处理将培养完成的金黄色葡萄球菌在8000r/min的条件下离心10min，取得上清液，取2.5ml上清液加入2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体进行检测。同样以胰蛋白胨大豆肉汤培养基为空白，取2.5ml培养基加入2.5ml2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体作为空白对照；c.采用气相色谱条件进行检测采用如下气相色谱条件进行检测：色谱柱：TG-WAXMS毛细管色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；温度为：柱箱恒温40℃保持1min，以每分钟10℃的速率升温至80℃；分流进样5:1；隔垫吹扫3ml/min，进样口220℃，检测器230℃；载气为高纯氮，载气流速1.2ml/min；进样量(μl)：1.0；d.结果判断若样品中能够检测到乙醇，则说明该菌株为金黄色葡萄球菌。本实施例中，所述的快速区分葡萄球菌的方法的仪器如下：气相色谱仪；超净台，恒温培养箱，恒温摇床。所述的快速区分葡萄球菌的方法的主要材料和试剂如下：胰蛋白胨、植物蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钾、琼脂、二硫化碳。具体实施例1一种快速区分葡萄球菌的方法，包括如下步骤：步骤一、胰蛋白胨大豆肉汤培养基配制：称取胰蛋白胨17g，植物蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，加入1000ml蒸馏水，分装到500ml锥形瓶中，在120℃的灭菌锅内湿热灭菌20min既得；步骤二、测定步骤：a.金黄色葡萄球菌培养、将金黄色葡萄球菌接种到有225ml的胰蛋白胨大豆肉汤培养基的无菌锥形瓶中，震荡均匀，在35℃，120r/min的恒温摇床中培养24h；b.葡萄球菌发酵产物处理将培养完成的金黄色葡萄球菌在8000r/min的条件下离心10min，取得上清液，取2.5ml上清液加入2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体进行检测。同样以胰蛋白胨大豆肉汤培养基为空白，取2.5ml培养基加入2.5ml2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体作为空白对照；c.采用气相色谱条件进行检测采用如下气相色谱条件进行检测：色谱柱：TG-WAXMS毛细管色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；温度为：柱箱恒温40℃保持1min，以每分钟10℃的速率升温至80℃；分流进样5:1；隔垫吹扫3ml/min，进样口220℃；检测器230℃，载气为高纯氮，载气流速1.2ml/min；进样量(μl)：1.0；d.结果判断若样品中能够检测到乙醇，则说明该菌株为金黄色葡萄球菌。本实施例中，所述的快速区分葡萄球菌的方法的仪器如下：气相色谱仪；超净台，恒温培养箱，恒温摇床。所述的快速区分葡萄球菌的方法的主要材料和试剂如下：胰蛋白胨、植物蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钾、琼脂、二硫化碳。本专利技术利用新的气相色谱检测方法，突破了传统生化检测葡萄球菌耗时长，金黄色葡萄球菌和沃氏葡萄球菌生物学形态相似的缺点，能够快速精准地区分出葡萄球菌。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速区分葡萄球菌的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、胰蛋白胨大豆肉汤培养基配制：称取胰蛋白胨17g，植物蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，加入1000ml蒸馏水，分装到500ml锥形瓶中，在120℃的灭菌锅内湿热灭菌20min即得；步骤二、测定步骤：a.金黄色葡萄球菌培养将金黄色葡萄球菌接种到装有225ml的胰蛋白胨大豆肉汤培养基的无菌锥形瓶中，震荡均匀，在35℃，120r/min的恒温摇床中培养18‑24h；b.葡萄球菌发酵产物处理将培养完成的金黄色葡萄球菌在8000r/min的条件下离心10min，取得上清液，取2.5ml上清液加入2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体进行检测。同样以胰蛋白胨大豆肉汤培养基为空白，取2.5ml培养基加入2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体作为空白对照；c.采用气相色谱条件进行检测采用如下气相色谱条件进行检测：色谱柱：TG‑WAXMS毛细管色谱柱：30m×0.25mm×0.25μm；温度为：柱箱恒温40℃保持1min，以每分钟10℃的速率升温至80℃；分流进样5:1；隔垫吹扫3ml/min，进样口220℃，检测器230℃；载气为高纯氮，载气流速1.2ml/min；进样量(μl)：1.0；d.结果判断若样品中能够检测到乙醇，则说明该菌株为金黄色葡萄球菌。...

【技术特征摘要】
1.一种快速区分葡萄球菌的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一、胰蛋白胨大豆肉汤培养基配制：称取胰蛋白胨17g，植物蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g，加入1000ml蒸馏水，分装到500ml锥形瓶中，在120℃的灭菌锅内湿热灭菌20min即得；步骤二、测定步骤：a.金黄色葡萄球菌培养将金黄色葡萄球菌接种到装有225ml的胰蛋白胨大豆肉汤培养基的无菌锥形瓶中，震荡均匀，在35℃，120r/min的恒温摇床中培养18-24h；b.葡萄球菌发酵产物处理将培养完成的金黄色葡萄球菌在8000r/min的条件下离心10min，取得上清液，取2.5ml上清液加入2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体进行检测。同样以胰蛋白胨大豆肉汤培养基为空白，取2.5ml培养基加入2.5ml二硫化碳，静置分层后取二硫化碳液体...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱荣进，黄任，杨春，
申请(专利权)人：江苏华创检测技术服务有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32