一种两歧双歧杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种两歧双歧杆菌及其应用，两歧双歧杆菌B‑176，保藏号为：CGMCC No.15754，保藏日期为2018年05月14日，保藏单位：中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心。所述两歧双歧杆菌B‑176的培养基配方为培养基：胰蛋白胨1.2‑2％，大豆蛋白胨0.8‑1.5％，酪蛋白胨0.8‑1.6％，酵母浸粉0.5‑1％，牛肉膏1.0‑1.5％，葡糖糖1.5‑2％，乳糖1‑2％，无机盐溶液4‑4.5％。两歧双歧杆菌B‑176对胃酸和胆盐有耐受性。对大肠杆菌有较好的抑制作用。通过试验证明该菌株与其他类型的乳酸菌有较好的协同生长作用，这一发现扩大了两歧双歧杆菌B‑176的应用范围。含有两歧双歧杆菌B‑176的乳酸菌组合物在育肥猪中饲料中的应用，可在育肥猪的原基础日粮中添加乳酸菌组合物进行饲喂，以提高饲料利用率，降低死亡率，减少出栏天数。

Bifidobacterium Bifidobacterium and its application

The invention discloses a Bifidobacterium bifidum and its application. The Bifidobacterium bifidum B_176 has the preservation number CGMCC No. 15754 and the preservation date is May 14, 2018. The preservation unit is the General Microbial Center of China Microbial Species Management Committee. The medium formulation of Bifidobacterium bifidum B_176 is as follows: tryptone 1.2_2%, soybean peptone 0.8_1.5%, casein peptone 0.8_1.6%, yeast extract 0.5_1%, beef extract 1.0_1.5%, glucose 1.5_2%, lactose 1_2%, inorganic salt solution 4.5%. Bifidobacterium bifidus B 176 has tolerance to gastric acid and bile salt. It has a good inhibitory effect on E. coli. The results showed that the strain had good synergistic growth with other types of lactic acid bacteria, which enlarged the application of Bifidobacterium bifidum B_176. The application of the Lactobacillus composition containing Bifidobacterium B_176 in the feed of finishing pigs can be feeded with the Lactobacillus composition in the original basic diet of finishing pigs in order to improve the feed utilization rate, reduce the mortality rate and reduce the number of days out of the feed.

【技术实现步骤摘要】
一种两歧双歧杆菌及其应用
本专利技术涉及微生物领域，具体涉及一种两歧双歧杆菌及其应用。
技术介绍
由于近二十年来微生态学的崛起和医学革命的进展，使双歧杆菌研究的重要性越来越被认识。双歧杆菌在维持机体肠道微生态平衡、抑制致病菌入侵和定植、调节机体免疫能力、降低胆固醇含量方面均有重要作用，而两歧双歧杆菌作为双歧杆菌的模式菌株必然也有着其重要的研究意义。但是，两歧双歧杆菌对培养环境的要求却极高，因此，如何改善其培养环境也就成为了至关重要的问题。已知的乳酸杆菌(Lactobacillusspp.)是一群生活在机体内益于宿主健康的微生物，它维护人体健康和调节免疫功能的作用已被广泛认可。两歧双歧杆菌能促进机体微生物菌群和酶的平衡以及刺激特异性和非特异性的免疫机制，但当菌体耐酸，耐胆盐能力不足时进不到肠道，就会失去它的作用。现在生活节奏较快，人们通常都会选择见效速度较快的抗生素来提高人体或者畜产品的免疫力。但是抗生素类的频繁使用使得人体或者动物体内的消化道环境发生的变化，自我调节能力差并且微生物菌群失衡，长时间使用只会出现感染和更多潜在危害。因此，在营养研究和畜类繁殖中，人们更希望大力发展对人类和畜类无害的微生物产品。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术存在的不足，提供了对酸、胆盐有较好的耐受性，对大肠菌群有较强的抑制效果的两歧双歧杆菌，同时提供了使两歧双歧杆菌具有更高存活菌数的优化培养基配方和含有两歧双歧杆菌的用于投放在饲料中的乳酸菌组合物。本专利技术一方面提供一种两歧双歧杆菌，两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)B-176，保藏号为：CGMCCNo.15754，保藏日期为2018年05月14日，保藏单位：中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心。进一步，rpoB基因序列如SEQIDNO.1所示，16SrRNA序列如SEQIDNO.2所示。进一步，所述两歧双歧杆菌B-176的培养基配方为培养基：胰蛋白胨1.2-2％，大豆蛋白胨0.8-1.5％，酪蛋白胨0.8-1.6％，酵母浸粉0.5-1％，牛肉膏1.0-1.5％，葡糖糖1.5-2％，乳糖1-2％，无机盐溶液4-4.5％。进一步，所述两歧双歧杆菌B-176的培养基配方为培养基：胰蛋白胨1.2％，大豆蛋白胨0.8％，酪蛋白胨0.8％，酵母浸粉0.5％，牛肉膏1.0％，葡糖糖1.5％，乳糖1.0％，无机盐溶液4.0％。进一步，所述的两歧双歧杆菌B-176对胃酸和胆盐有耐受性。进一步，所述的两歧双歧杆菌B-176与嗜酸乳杆菌BJYL-192、嗜酸乳杆菌BJYL-137、嗜酸乳杆菌BJYL-200、嗜酸乳杆菌BJYL-249、动物双歧杆菌BJYB-174、干酪乳杆菌BJYL-126、干酪乳杆菌BJYL-197、干酪乳杆菌BJYLB-14、副干酪乳杆菌BJYL-359、德氏乳杆菌保加利亚亚种BJYL-162、德氏乳杆菌保加利亚亚种BJYL-184、嗜热链球菌BJYS-151、嗜热链球菌BJYS-170、嗜热链球菌BJYS-179、乳酸链球菌BJYS-125、乳酸链球菌乳酸亚种BJYS-011、布氏乳杆菌BJYL-261和约氏乳杆菌BJYL-1839中的一种或者几种协同生长。进一步，所述的两歧双歧杆菌B-176对大肠杆菌菌群有抑制作用。本专利技术一方面提供一种大肠杆菌抑菌液的制备方法，将置于低温冰柜的如权利要求1所述的保藏编号为CGMCCNo.15754的两歧双歧杆菌B-176放到40～50℃水浴中解冻，在无菌条件下吸取0.2ml种子液接种到培养基中，37℃恒温厌氧培养15h，活化2～3代；将活化好的两歧双歧杆菌B-176发酵液采用低温离心的方法，制备上清液，得到大肠杆菌抑菌液。本专利技术另一方面提供一种乳酸菌组合物，包含权利要求1所述的保藏编号为CGMCCNo.15754的两歧双歧杆菌和可接受的辅料。进一步，该乳酸菌组合物还包括植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌；各组分比例为：两歧双歧杆菌：植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌＝2～5：1～2：1～3。本专利技术还提供一种上述乳酸菌组合物在育肥猪用饲料中的应用。本专利技术的有益效果体现在：1，本专利技术提供的一种两歧双歧杆菌，两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)B-176，保藏号为：CGMCCNo.15754，从来自于婴儿粪便中提取，经鉴定为两歧双歧杆菌。2，本专利技术为了提高发酵菌数及改善菌体形态，按照其营养需要，采用正交实验设计进行培养基优化。优化后的两歧双歧杆菌B-176的培养基配方为培养基：胰蛋白胨1.2-2％，大豆蛋白胨0.8-1.5％，酪蛋白胨0.8-1.6％，酵母浸粉0.5-1％，牛肉膏1.0-1.5％，葡糖糖1.5-2％，乳糖1-2％，无机盐溶液4-4.5％。3，本专利技术提供的两歧双歧杆菌B-176通过耐氧驯化和培育，中途补料使该菌活菌数达到3.25×1011cfu/g；并通过耐受性驯化，使其可在动物体对胃酸和胆盐有耐受性；更可调节免疫反应、适合用于食品、保健品、药品、食品补充剂等产品的制备。4，本专利技术提供的两歧双歧杆菌B-176对大肠杆菌有较好的抑制作用。5，本专利技术提供的两歧双歧杆菌B-176通过试验证明该菌株与其他类型的乳酸菌有较好的协同生长作用，这一发现扩大了两歧双歧杆菌B-176的应用范围。6，本专利技术提供的一种乳酸菌组合物在育肥猪中饲料中的应用，可用其对育肥猪进行饲喂，以降低料肉比和死亡率，减少出栏天数，减少抗生素的使用。生物保藏说明分类命名：两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)B-176，保藏号为：CGMCCNo.15754，保藏日期为2018年05月14日，保藏单位：中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心。地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.15754。附图说明下面结合附图对本专利技术做进一步详细的说明。图1是B-176在2号培养基中的生长状况。图2是B-176在3号培养基中的生长状况。图3是试验组5发酵液中的菌体形态。图4是B-176在发酵过程中pH的变化。图5是两歧双歧杆菌B-176的生理生化特性。具体实施方式本专利技术公开了一种两歧双歧杆菌及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术内。本专利技术所述两歧双歧杆菌已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。在本实验室条件下，根据送检菌种的细胞形态、生理生化实验、16SrDNA和rpoB基因序列等实验数据综合分析，参考《伯杰氏系统细菌学手册》以及InternationalJournalofSystematicandEvolutionaryMicrobiology有关研究论文，两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)B-176的鉴定结果具体参见：rpoB基因序列如SEQIDNO.1所示，16SrRNA序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术提供的一株两歧双歧杆菌B-176，来自于婴儿粪便中。两歧双歧杆菌B-176的生理生化特性参见图5所示。本专利技术一方面提供一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种两歧双歧杆菌，其特征在于：两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)B‑176，保藏号为：CGMCC No.15754，保藏日期为2018年05月14日，保藏单位：中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心。

【技术特征摘要】
1.一种两歧双歧杆菌，其特征在于：两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)B-176，保藏号为：CGMCCNo.15754，保藏日期为2018年05月14日，保藏单位：中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心。2.如权利要求1所述的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述两歧双歧杆菌B-176的培养基配方为：胰蛋白胨1.2-2％，大豆蛋白胨0.8-1.5％，酪蛋白胨0.8-1.6％，酵母浸粉0.5-1％，牛肉膏1.0-1.5％，葡糖糖1.5-2％，乳糖1-2％，无机盐溶液4-4.5％。3.如权利要求2所述的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述两歧双歧杆菌B-176的培养基配方为：胰蛋白胨1.2％，大豆蛋白胨0.8％，酪蛋白胨0.8％，酵母浸粉0.5％，牛肉膏1.0％，葡糖糖1.5％，乳糖1.0％，无机盐溶液4.0％。4.如权利要求1所述的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述的两歧双歧杆菌B-176对胃酸和胆盐有耐受性。5.如权利要求1所述的两歧双歧杆菌，其特征在于：所述的两歧双歧杆菌B-176与嗜酸乳杆菌BJYL-192、嗜酸乳杆菌BJYL-137、嗜酸乳杆菌BJYL-200、嗜酸乳杆菌BJYL-249、动物双歧杆菌BJYB-174、干酪乳杆菌BJYL-126、干酪乳杆菌BJYL-197、干酪乳杆菌BJYLB-14、副干...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜波，刘英华，邱金培，马龙，
申请(专利权)人：北京博锦元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11