人源化抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合焦谷氨酸化淀粉样蛋白β(AβN3pE)肽N‑末端表位的人源化抗体以及涉及与淀粉样蛋白肽的积累和沉积相关疾病和疾病状况的预防性和治疗性治疗，所述疾病和疾病状况如淀粉样变性，与焦谷氨酸化淀粉样蛋白肽相关的一组病症和异常，如阿尔茨海默病、唐氏综合征、大脑淀粉样血管病以及其他相关方面。更具体地，其涉及使用人源化单克隆抗体结合血浆、脑和脑脊液中的焦谷氨酸化淀粉样蛋白β肽以防止大脑内和外周各种组织中AβN3p的积累或逆转其沉积，以及缓解淀粉样变性。本发明专利技术进一步涉及利用本发明专利技术的人源化抗体诊断淀粉样变性的诊断测定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化抗体专利
本专利技术涉及结合焦谷氨酸化(pyroglutamated)淀粉样蛋白β(AβN3pE)肽N-末端处的表位的人源化抗体以及涉及疾病和疾病状况的预防性和治疗性治疗，所述疾病和疾病状况涉及淀粉样蛋白肽的积累和沉积，如淀粉样变性，与焦谷氨酸化淀粉样蛋白肽相关的一组病症和异常，如阿尔茨海默病、唐氏综合征、大脑淀粉样血管病以及其他相关方面。更具体地，其涉及使用人源化单克隆抗体结合血浆、脑和脑脊液中的焦谷氨酸化淀粉样蛋白β肽以防止大脑内和外周各种组织中AβN3p的积累或逆转其沉积，以及缓解淀粉样变性。本专利技术进一步涉及利用本专利技术的人源化抗体诊断淀粉样变性的诊断测定。
技术介绍
淀粉样变性不是单一疾病实体而是一组不同的进行性疾病过程，其特征在于称作淀粉样蛋白的蜡状、淀粉样的蛋白的胞外组织沉积，所述淀粉样蛋白在一个或多个器官或身体系统中积累。随着淀粉样蛋白沉积积累，它们开始干扰器官或身体系统的正常功能。有至少15种不同类型的淀粉样变性。主要形式是没有已知前提的原发性淀粉样变性、一些其他疾病状况之后的继发性淀粉样变性和遗传性淀粉样变性。继发性淀粉样变性在慢性感染或炎性疾病期间发生，如结核病、称作家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠的炎症(肉芽肿性回肠炎)、霍奇金病和麻风。淀粉样蛋白沉积包括淀粉样蛋白P(五角形)组分(AP)，涉及正常血清淀粉样蛋白P(SAP)的糖蛋白，以及硫酸化糖胺聚糖(GAG)，结缔组织的复杂碳水化合物。占淀粉样物质约90％的淀粉样蛋白纤维包含几种不同类型的蛋白之一。这些蛋白能够折叠为所谓的“β-折叠”纤维，具有刚果红结合位点的独特蛋白构型，导致淀粉样蛋白的独特染色特性。衰老的许多疾病是基于淀粉样蛋白或与淀粉样蛋白相关，并且部分特征在于有助于发病机理以及疾病发展的淀粉样蛋白或淀粉样物质胞外沉积的建立。这些疾病包括但不限于神经系统病症如轻度认知障碍(MCI)，阿尔茨海默病(AD)，例如散发性阿尔茨海默病(SAD)或者家族性阿尔茨海默型痴呆(FAD)如家族性英国型痴呆(FBD)和家族性丹麦型痴呆(FDD)，唐氏综合征中的神经变性，路易体痴呆，具有淀粉样变性的遗传学脑出血(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征。基于淀粉样蛋白或与淀粉样蛋白相关的其他疾病是进行性核上性麻痹，多发性硬化；Creutzfeldt-Jacob病，帕金森病，HIV相关痴呆，ALS(肌萎缩性侧索硬化症)，成人发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤等，包括黄斑变性。虽然这些疾病的发病机理可能不同，但是它们的特征性沉积常包含许多共同的分子组分。在很大程度上，这可以归因于促炎途径的局部激活，从而导致激活的补体组分、急性期反应物、免疫调节剂和其他炎症介质的同时沉积(McGeeretal.,TohokuJExpMed.174(3):269-277(1994))。最近，越来越多的证据证明N-末端修饰的Aβ肽变体参与阿尔茨海默病。针对性活组织检查显示Aβ1-40和Aβ1-42不仅存在于阿尔茨海默病患者的脑中，而且还存在于未受影响的对象的老年斑中。但是，N-末端截短和pyroGlu修饰的AβN3pE-40/AβN3pE-42几乎仅根深蒂固在阿尔茨海默病患者的斑块内，使得这种Aβ变体成为合格的诊断标记和药物开发的潜在靶标。目前，几个商业制造商提供ELISA试剂盒，其允许检测低皮克(pg)范围中的Aβ1-40/1-42和AβN3pE-40/AβN3pE-42。阿尔茨海默病(AD)患者脑的形态学特征在于存在神经原纤维缠结和新皮层脑结构中Aβ肽的沉积(Selkoe,D.J.&Schenk,D.Alzheimer'sdisease:molecularunderstandingpredictsamyloid-basedtherapeutics.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.43,545-584(2003))。β-和γ-分泌酶顺序切割后，Aβ肽从淀粉样蛋白前体蛋白(APP)释放。γ-分泌酶切割导致产生Aβ1-40和Aβ1-42肽，其不同之处在于它们的C-末端，并且表现出不同的聚集、纤维形成和神经毒性潜能(Shin,R.W.etal.Amyloidbeta-protein(Abeta)1-40butnotAbeta1-42contributestotheexperimentalformationofAlzheimerdiseaseamyloidfibrilsinratbrain.J.Neurosci.17,8187-8193(1997)；Iwatsubo,T.etal.VisualizationofAbeta42(43)andAbeta40insenileplaqueswithend-specificAbetamonoclonals:evidencethataninitiallydepositedspeciesisAbeta42(43).Neuron13,45-53(1994)；Iwatsubo,T.,Mann,D.M.,Odaka,A.,Suzuki,N.&Ihara,Y.Amyloidbetaprotein(Abeta)deposition:Abeta42(43)precedesAbeta40inDownsyndrome.Ann.Neurol.37,294-299(1995)；Hardy,J.A.&Higgins,G.A.Alzheimer'sdisease:theamyloidcascadehypothesis.Science256,184-185(1992)；Roβner,S.,Ueberham,U.,Schliebs,R.,Perez-Polo,J.R.&Bigl,V.Theregulationofamyloidprecursorproteinmetabolismbycholinergicmechanismsandneurotrophinreceptorsignaling.Prog.Neurobiol.56,541-569(1998))。弥漫性斑块中沉积的大部分Aβ肽是N-末端截短或修饰的。Piccini和Saido的研究已显示老年斑和血管沉积的核心结构由50％焦谷氨酸(pyroGlu)修饰的肽组成(Piccinietal.,JBiolChem.2005Oct7；280(40):34186-92；Saidoetal.,Neuron.1995Feb；14(2):457-66)。PyroGlu修饰的肽具有比其他Aβ种类更强的细胞毒性，并且对氨肽酶稳定(Russoetal.,JNeurochem.2002Sep；82(6):1480-9)。因此，pyroGluAβ种类具有较长半衰期，从而这些种类的积累以及神经毒性寡聚体和聚集体的形成是有益的(Saido,NeurobiolAging.1998Jan-Feb；19(1Suppl):S69-75)。由于谷氨酸环化至pyroGlu，带电荷的氨基酸会丢失，这强烈降低肽的溶解度并导致聚集趋势增加。体外研究已显示例如Aβ3(pE)的初始寡聚化与未修饰的肽相比快很多(Schillingetal.,Biochemistr本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人源化抗体或其功能变体，其中所述抗体的轻链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLX1SDGKTYLNWFQQRPGQSPRRLX2YLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:7)，其中X1选自Y和H；并且X2选自A、I和T；或者包含选自以下的氨基酸序列、基本上由选自以下的氨基酸序列组成或由选自以下的氨基酸序列组成DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVHSDGNTYLHWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQSTHVPPTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:28)；以及DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYVVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:36)，和/或其中所述抗体的重链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGX3TMNWVRQAPGQGLEWMGLINPX4NX5VTRYNQKFX6GRVTX7X8RDTSTTTVX9MELTSLTSEDTAX10YYCTREAKRE WDETYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:17)；其中X3选自Y和H；X4选自Y和S；X5选自G、T、A和E；X6选自K和Q；X7选自L和I；X8选自I和T；X9选自Y和H；并且X10选自V和T；或者包含选自以下的氨基酸序列、基本上由选自以下的氨基酸序列组成或由选自以下的氨基酸序列组成EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMAWVRQAPGKGLEWVSFISN LAYSIYYADTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDYDNILDYVMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:32)，以及QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFNNYWINWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGDTNYNGKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGYIVYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:40)。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.16 US 62/193,356;2015.08.25 US 62/209,6501.一种人源化抗体或其功能变体，其中所述抗体的轻链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLX1SDGKTYLNWFQQRPGQSPRRLX2YLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:7)，其中X1选自Y和H；并且X2选自A、I和T；或者包含选自以下的氨基酸序列、基本上由选自以下的氨基酸序列组成或由选自以下的氨基酸序列组成DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVHSDGNTYLHWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQSTHVPPTFGQGTKVEIK(SEQIDNO:28)；以及DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYVVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:36)，和/或其中所述抗体的重链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGX3TMNWVRQAPGQGLEWMGLINPX4NX5VTRYNQKFX6GRVTX7X8RDTSTTTVX9MELTSLTSEDTAX10YYCTREAKREWDETYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:17)；其中X3选自Y和H；X4选自Y和S；X5选自G、T、A和E；X6选自K和Q；X7选自L和I；X8选自I和T；X9选自Y和H；并且X10选自V和T；或者包含选自以下的氨基酸序列、基本上由选自以下的氨基酸序列组成或由选自以下的氨基酸序列组成EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMAWVRQAPGKGLEWVSFISNLAYSIYYADTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDYDNILDYVMDYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:32)，以及QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFNNYWINWVRQAPGQGLEWMGQIYPGDGDTNYNGKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGYIVYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:40)。2.权利要求1的人源化抗体，其在轻链中包含CDR区：VLCDR1:KSSQSLLX1SDGKTYLN(SEQIDNO:8)，其中X1选自Y和H；VLCDR2:LVSKLDS(SEQIDNO:9)；以及VLCDR3:VQGTHFP(SEQIDNO:10)。3.权利要求1或2的人源化抗体，其中轻链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSDGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:11)。4.权利要求3的人源化抗体，其在轻链中包含CDR区：VLCDR1:KSSQSLLYSDGKTYLN(SEQIDNO:12)，VLCDR2:LVSKLDS(SEQIDNO:9)；以及VLCDR3:VQGTHFP(SEQIDNO:10)。5.权利要求1的人源化抗体，其中轻链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSDGKTYLNWFQQRPGQSPRRLAYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:13)。6.权利要求5的人源化抗体，其在轻链中包含CDR区：SEQIDNO:12的VLCDR1、SEQIDNO:9的VLCDR2和SEQIDNO:10的VLCDR3。7.权利要求1的人源化抗体，其中轻链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLYSDGKTYLNWFQQRPGQSPRRLTYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:14)。8.权利要求7的人源化抗体，其在轻链中包含CDR区：SEQIDNO:12的VLCDR1、SEQIDNO:9的VLCDR2和SEQIDNO:10的VLCDR3。9.权利要求1的人源化抗体，其中轻链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLNWFQQRPGQSPRRLTYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQGTHFPFTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:15)。10.权利要求9的人源化抗体，其在轻链中包含CDR区：VLCDR1:KSSQSLLHSDGKTYLN(SEQIDNO:16)，VLCDR2:LVSKLDS(SEQIDNO:9)；以及VLCDR3:VQGTHFP(SEQIDNO:10)。11.前述权利要求中任一项的人源化抗体，其在重链中包含CDR区：VHCDR1:GYSFTGX3TMN(SEQIDNO:18)，其中X3选自Y和H；VHCDR2:LINPX4NX5VTRYNQKFX6G(SEQIDNO:19)；其中X4选自Y和S，X5选自G、T、A和E；并且X6选自K和Q；以及VHCDR3:EAKREWDETY(SEQIDNO:20)。12.权利要求1或权利要求11的人源化抗体，其中重链的可变部分因此包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPYNGVTRYNQKFKGRVTLIRDTSTTTVYMELTSLTSEDTAVYYCTREAKREWDETYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:21)。13.权利要求12的人源化抗体，其在重链中包含CDR区：VHCDR1:GYSFTGYTMN(SEQIDNO:22)，VHCDR2:LINPYNGVTRYNQKFKG(SEQIDNO:23)；VHCDR3:EAKREWDETY(SEQIDNO:20)。14.权利要求1或权利要求11的人源化抗体，其中重链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGHTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPSNGVTRYNQKFQGRVTITRDTSTTTVHMELTSLTSEDTAVYYCTREAKREWDETYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:24)。15.权利要求14的人源化抗体，其在重链中包含CDR区：VHCDR1:GYSFTGHTMN(SEQIDNO:25)，VHCDR2:LINPSNGVTRYNQKFQG(SEQIDNO:26)；VHCDR3:EAKREWDETY(SEQIDNO:20)。16.权利要求1或权利要求11的人源化抗体，其中重链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGHTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPSNGVTRYNQKFQGRVTITRDTSTTTVHMELTSLTSEDTATYYCTREAKREWDETYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:27)。17.权利要求16的人源化抗体，其在重链中包含CDR区：VHCDR1:GYSFTGHTMN(SEQIDNO:25)，VHCDR2:LINPSNGVTRYNQKFQG(SEQIDNO:26)；VHCDR3:EAKREWDETY(SEQIDNO:20)。18.权利要求1或权利要求11的人源化抗体，其中重链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGHTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPSNTVTRYNQKFQGRVTITRDTSTTTVHMELTSLTSEDTATYYCTREAKREWDETYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:66)。19.权利要求18的人源化抗体，其在重链中包含CDR区：VHCDR1:GYSFTGHTMN(SEQIDNO:25)，VHCDR2:LINPSNTVTRYNQKFQG(SEQIDNO:67)；以及VHCDR3:EAKREWDETY(SEQIDNO:20)。20.权利要求1或权利要求11的人源化抗体，其中重链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGHTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPSNAVTRYNQKFQGRVTITRDTSTTTVHMELTSLTSEDTATYYCTREAKREWDETYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:68)。21.权利要求18的人源化抗体，其在重链中包含CDR区：VHCDR1:GYSFTGHTMN(SEQIDNO:25)，VHCDR2:LINPSNAVTRYNQKFQG(SEQIDNO:69)；以及VHCDR3:EAKREWDETY(SEQIDNO:20)。22.权利要求1或权利要求11的人源化抗体，其中重链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：QVQLVQSGAEVKKSGASVKVSCKASGYSFTGHTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPSNEVTRYNQKFQGRVTITRDTSTTTVHMELTSLTSEDTATYYCTREAKREWDETYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:70)。23.权利要求21的人源化抗体，其在重链中包含CDR区：VHCDR1:GYSFTGHTMN(SEQIDNO:25)，VHCDR2:LINPSNEVTRYNQKFQG(SEQIDNO:71)；以及VHCDR3:EAKREWDETY(SEQIDNO:20)。24.权利要求1的人源化抗体，其中所述抗体轻链的可变部分包含以下氨基酸序列、基本上由以下氨基酸序列组成或由以下氨基酸序列组成：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVHSDGNTYLHWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSG...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·克莱因施密特，JU·拉赫弗莱德，A·皮肖塔，S·席林，S·吉利斯，
申请(专利权)人：前体生物药物股份公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE