本发明专利技术提供了利脑心片在抗阿尔兹海默症中的医用用途，具有明显的医疗效果。以利脑心片水溶液对小鼠进行给药，通过行为学实验（矿场实验，跳台实验，Y迷宫实验和水迷宫实验）、免疫组化、血清和脑皮质ELISA测定和western blot证明利脑心片具有预防和治疗阿尔兹海默症的功效，能够降低大脑中Aβ斑块的形成，并可通过调节氧化应激和胆碱能系统来改善阿尔兹海默症的病理情况。
Medical use of Li Xin Xin tablet in the treatment of Alzheimer's disease
The invention provides the medical use of Linaoxin tablets in anti-Alzheimer's disease and has obvious medical effect. Linaoxin tablets were administered to mice. Behavioral tests (field test, step-down test, Y-maze test and water maze test), immunohistochemistry, ELISA assay in serum and cerebral cortex and Western blot showed that Linaoxin tablets could prevent and treat Alzheimer's disease and reduce A-beta plaque in the brain. It can also improve the pathological condition of Alzheimer's disease by regulating oxidative stress and cholinergic system.
【技术实现步骤摘要】
利脑心片在治疗阿尔兹海默症中的医用用途
：本专利技术涉及“利脑心片”新的医用用途，进一步讲公开了“利脑心片”在治疗阿尔兹海默症中的医用用途，具体特别是应用于阿尔兹海默的预防和治疗中，属于医药
技术介绍
：阿尔茨海默病（AD）是一种进行性神经系统退行性疾病，其特征是认知功能显著下降。到目前为止，AD的影响正在全球迅速扩大，据报道全球有超过4,000万患者，预计到2030年将增加到7,000万。因此，AD的预防和治疗是一项严峻的挑战。AD药物的临床试验失败率很高，其中大多数都表现出各种不良反应，包括食欲不振，胃肠道不适，腹泻，呕吐，睡眠困难和肌肉痉挛。本专利技术所述的“利脑心片”是一种中成药，已获国家批准文号：国药准字Z20090470，其成分包括：丹参、川穹、葛根、地龙、赤芍、红花、郁金、制何首乌、泽泻、枸杞、酸枣仁(炒)、远志、九节菖蒲、牛膝和甘草，具有活血祛瘀，行气化痰，通络止痛等功效。但“利脑心片”在预防和治疗阿尔兹海默症未见相关文献报道。
技术实现思路
：本专利技术公开了利脑心片在治疗阿尔兹海默症中的医用用途，具有明显的医疗效果。通过以下步骤实验表明利脑心片在阿尔兹海默的预防和治疗中的药理活性及相应机制：将利脑心片磨成粉末，过40目筛，干燥保存，备用；通过腹腔注射120mg/kgD-半乳糖，并灌胃20mg/kgAlCl3，每天一次，持续8周，建立AD小鼠模型。采用行为学实验，包括旷场试验、跳台实验、Y迷宫和水迷宫，首次证明利脑心片能够提高小鼠记忆力，改善小鼠的认知功能。采用免疫组化、血清和脑皮质ELISA测定和westernblot实验证明利脑心片能减少大脑中Aβ沉积，调节机体氧化应激和胆碱能系统，为利脑心片作为预防和治疗阿尔兹海默症的药物及保健品的研发提供依据。本专利技术的积极效果在于：提供了“利脑心片”新的医用用途，可用于预防和治疗阿尔兹海默症疾病，并且具有明显的医疗效果。附图说明：图1是本专利技术实施例1小鼠矿场实验结果图；图2是本专利技术实施例2中小鼠跳台实验结果图；图3是本专利技术实施例3中小鼠Y迷宫实验结果图；图4是本专利技术实施例4中小鼠水迷宫实验结果图；图5是本专利技术实施例5中小鼠海马区免疫组化结果图；图6是本专利技术实施例6中小鼠血清和大脑皮质区淀粉样蛋白β1-42（Aβ1-42）的含量的测定结果；图7是本专利技术实施例7中小鼠脑皮质中Bcl-2，Bcl-xL，Bax，CleavedCaspase3，CleavedCaspase9，Nrf2，HO-1，HO-2，SOD-1和CAT的含量测定结果。具体实施方式：下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1：实验方法：设置隔音暗箱，底部面积为30厘米×30厘米，中央区域为15厘米×15厘米，其余部分作为四周区域。在测试当天，将小鼠置于盒子中的固定位置，观察并记录他们的移动轨迹和在5分钟内探索中心区域的时间。实验结果：空白组小鼠偏爱四周区域，极少进入中心区域，与空白组小鼠相比，模型组小鼠的轨迹混乱，在中心区域的时间显著增加，在四周的区域显著减少。利脑心给药4周后，小鼠在四周区域的运动时间与模型组相比显著延长（参见图1）。实施例2实验方法：训练期：训练时将小鼠放入跳台箱内适应5分钟，在底部电棒通交流电，动物受到电击，正常反应是跳上平台躲避伤害性刺激。训练期内如果该动物未跳下平台则弃去不用。试验期：训练期结束24小时后将小鼠再次放在平台上，观察5分钟，记录动物第一次从平台跳下所需的时间，即跳台潜伏期。实验结果：训练期间各组小鼠均会在5分钟内跳下平台，在第二天试验期间，空白组小鼠在5分钟内多数停留在跳台上，而模型组小鼠多数会在5分钟内先后跳下平台，与空白组相比，模型组小鼠在平台上停留的时间显著减少，利脑心给药4周后，小鼠在平台上停留时间与模型组相比显著延长（参见图2）。实施例3实验方法：训练期：将Y迷宫的C壁边缘放少许食物，小鼠断粮12小时后，从A壁放入放于Y迷宫中，适应5分钟，观察小鼠找到食物的情况，训练3天后进行正式测试。试验期：依旧在小鼠断粮Y迷宫的C壁边缘放少许食物，小鼠断粮12小时后，从A壁放入放于Y迷宫中，观察第一次小鼠找到食物的时间。实验结果：训练期间，各组小鼠找到食物的时间无显著差异，培训3天后，空白组小鼠找到食物的时间逐渐变短，而模型组小鼠找到食物的时间与空白组相比显著延长，而与模型组相比，利脑心给药4周后，小鼠在Y迷宫中能更快地找到食物（参见图3）。实施例4：实验方法：使用填充有10L深度水（22-24℃）的含有二氧化钛的圆形池来进行水迷宫测试。在正式测试前3天，每天从同一象限将小鼠放入水池中对小鼠进行训练，记录了将小鼠放入池中以逃逸至小鼠找到平台所花费的时间。在测试当天，将小鼠置于相同象限的池中以找到平台，并记录在60秒内小鼠找到平台并在上面停留3秒的时间。实验结果：训练第一天时，各组小鼠找到平台的时间无显著差异，训练3天后，空白组多数都能在60秒内找到平台，且找到平台的时间显著减少，而模型组有一半仍无法找到平台，利脑心给药4周后，小鼠找到平台的时间显著减少（参见图4）。实施例5实验方法：将各组脑组织（n=10/组）用4％福尔马林溶液固定，在不同乙醇-水混合物中脱水，在二甲苯中洗涤并包埋在石蜡中，然后切成5μm厚的切片。将载玻片脱蜡，水合并在10mM柠檬酸钠缓冲液（pH6）中煮沸10分钟，并在台面上冷却30分钟。在3％过氧化氢中温育10分钟后，用正常10％山羊血清封闭切片30分钟，然后在4℃下与一抗Aβ1-42一起温育过夜。用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤后，将切片与生物素化的抗兔二抗在室温下孵育1小时，然后与链霉抗生物素蛋白-生物HRP复合物一起孵育60分钟。通过使用二氨基联苯胺四盐酸盐溶液作为色原体和苏木精来复染过氧化物酶缀合物。通过光学显微镜（100×）拍摄Aβ的免疫过氧化物酶染色。实验结果：空白组小鼠海马区Aβ沉积较少，与之相比，AD模型组小鼠海马区有明显Aβ斑块沉积，利脑心给药4周后，小鼠海马区Aβ沉积显著减少（参见图5）。实施例6实验方法：通过BCA检测试剂盒检测蛋白浓度后，使用ELISA试剂盒检测血清和大脑皮质中乙酰胆碱（Ach），乙酰胆碱酯酶（AchE），胆碱乙酰转移酶（ChAT），超氧化酶歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px），活性氧（ROS）和淀粉样蛋白β1-42（Aβ1-42）的含量。表1是实例6中小鼠血清和大脑皮层中乙酰胆碱（Ach），乙酰胆碱酯酶（AchE）和乙酰胆碱转移酶（ChAT）ELISA的实验结果；表1：表2是实例6中小鼠血清和大脑皮层中活性氧簇（ROS），超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的ELISA实验结果；表2：实验结果：与空白组小鼠相比，AD模型组小鼠血清和脑皮质中乙酰胆碱，乙酰胆碱转移酶，超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的含量显著降低，乙酰胆碱酯酶和活性氧含量显著提高。血清中淀粉样蛋白β1-42的含量显著降低，脑皮质中淀粉样蛋白β1-42的含量显著提高。利脑心给药4周后，显著改善了小鼠氧化应激水平和胆碱能系统，抑制了Aβ1-42在脑中的沉积情况（参见图6）。实施例7实验方法：用含有2％苯基甲磺酰氟（本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.利脑心片在治疗阿尔兹海默症中的医用用途，其特征在于所述药品的成分包括：丹参、川穹、葛根、地龙、赤芍、红花、郁金、制何首乌、泽泻、枸杞、酸枣仁(炒)、远志、九节菖蒲、牛膝、甘草，已获国家批准文号：国药准字Z20090470。
【技术特征摘要】
1.利脑心片在治疗阿尔兹海默症中的医用用途，其特征在于所述药品的成分包括：丹参、川穹、葛根、地龙、赤芍、红花、郁金、制何首乌、泽泻、枸杞、酸枣仁(炒)、远志、九节...
【专利技术属性】
技术研发人员：王迪，王春月，初秋博，滕利荣，逯家辉，孟庆繁，徐雯雯，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22
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