一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物、及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种疫苗组合物，该疫苗组合物包括免疫量的禽减蛋综合征病毒Penton蛋白或免疫量的含有重组禽减蛋综合征病毒Penton蛋白基因的活载体，以及兽医学上可接受的载体。该疫苗组合物可有效保护鸡群产蛋综合征的发生，且能针对不同地域的禽减蛋综合征病毒野毒株进行完全保护。

Vaccine composition for preventing avian egg drop syndrome, preparation method and application thereof

The present invention relates to a vaccine composition comprising a live vector containing a recombinant Avian egg drop syndrome virus Penton protein with an immune dose or a recombinant Avian egg drop syndrome virus Penton protein gene with an immune dose, and a veterinary acceptable vector. The vaccine composition can effectively protect the occurrence of egg production syndrome in chicken flocks, and can completely protect wild strains of avian egg drop syndrome virus from different regions.

【技术实现步骤摘要】
一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物、及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物、制备方法和应用。
技术介绍
禽减蛋综合征(Eggdropsyndrome,EDS)是由禽减蛋综合征病毒(Eggdropsyndromevirus,EDSV)引起的以禽产蛋下降，以及产畸形蛋为主要特征的传染病，常发生于禽产蛋高峰期，给蛋禽养殖带来了巨大经济损失。EDSV属于禽腺病毒Ⅲ群，具有典型的腺病毒形态，无囊膜，具有红细胞凝集活性，在禽输卵管中增殖。病毒基因组为约33kb的线状双股DNA，血清型单一，毒株之间抗原性无明显差异。病毒颗粒由结构蛋白构成，核衣壳直径70～80nm，呈二十面体对称，DNA被包于衣壳内。核衣壳由252个壳粒组成，其中240个是六邻体(Hexon蛋白)，构成二十面体的20个面以及棱的大部分。这些壳粒呈棱柱状，宽7nm，长11nm。另外12个是五邻体(Penton蛋白)，分别位于二十面体的12个顶角上。每个Penton蛋白有一条纤维突起(Fiber蛋白)。禽减蛋综合征是当前世界范围内严重危害家禽养殖业发展的重要疾病之一。在各种防控措施中，疫苗免疫仍为最重要的措施。目前养禽业中普遍使用的EDS灭活疫苗是基于鸭胚增殖的病毒灭活后与矿物油佐剂乳化而成的疫苗。但是，由于禽减蛋综合征病毒在鸭胚上培养难以获得高滴度的病毒，导致制备的疫苗往往难以提供理想的免疫效果；此外，该病毒抗原的生产方式完全依赖于鸭种蛋，在禽流感等传染病发生时，鸭种蛋供应困难，严重影响禽减蛋综合征的防控。另外全病毒疫苗生产过程中还存在病毒灭活不完全造成的生物安全方面的风险。亚单位疫苗是近几年发展起来的一种比较切实可行的新型基因工程疫苗，禽减蛋综合征亚单位疫苗研究以Hexon(240/252)为主要研究对象，然而一直以来，免疫效力低下，未开发成产品。现有技术中还没有制备出用于疫苗的免疫原性良好的蛋白。至今未有禽减蛋综合征亚单位疫苗上市。因此，临床上急需开发出免疫效果好的亚单位疫苗组合物，能够有效防止该病的流行，且能避免鸭种蛋供应波动的影响。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供一种禽减蛋综合征病毒免疫原性蛋白、及其制备的疫苗组合物及其制备方法以及应用，该疫苗组合物能够有效预防禽减蛋综合征病毒的感染。本专利技术涉及一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的所述的禽减蛋综合征病毒抗原以及兽医学上可接受的载体；其中，所述禽减蛋综合征病毒抗原包括蛋白抗原或含有重组有所述禽减蛋综合征病毒免疫原性蛋白基因的活载体。本专利技术还涉及一种制备所述疫苗组合物的方法，所述制备方法包括：步骤(1)克隆所述禽减蛋综合征病毒蛋白基因；步骤(2)转化重组所述步骤(1)中克隆的蛋白基因；步骤(3)表达所述重组的禽减蛋综合征病毒蛋白；步骤(4)分离纯化所述重组的禽减蛋综合征病毒蛋白，使用非离子表面活性剂处理所述纯化的重组的禽减蛋综合征病毒蛋白；步骤(5)将所述禽减蛋综合征病毒蛋白抗原与佐剂按比例混合，乳化。本专利技术还涉及所述的疫苗组合物在制备预防和治疗禽减蛋综合征病毒感染的药物中的应用。本专利技术首次采用禽减蛋综合征病毒Penton蛋白，选取的禽减蛋综合征病毒蛋白基因高效表达后，制备疫苗组合物，可预防或治疗禽减蛋综合征疫情蔓延，并且含有该蛋白的疫苗组合物免疫动物后能使动物机体快速产生抗体，对当前流行的禽减蛋综合征病毒单独或混合感染有良好的预防和控制效果，生物安全性好。本专利技术禽减蛋综合征病毒Penton蛋白制备的疫苗组合物，其免疫原性好，能对鸡和鸭产生完全攻毒保护，能有效对多种地域来源的野毒株进行预防，也即在临床应用上能对禽减蛋综合征病毒的感染、蔓延进行预防。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。术语“禽减蛋综合征病毒”(EggDropSyndromeVirus,EDSV)属于禽腺病毒Ⅲ群，基因组为双股DNA。所引发的临床症状包括使蛋鸡产软壳、薄壳、无壳蛋，产蛋率严重下降。病理变化以卵巢静止不发育和输卵管萎缩为特征。本专利技术涉及一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的禽减蛋综合征病毒抗原以及兽医学上可接受的载体；所述禽减蛋综合征病毒抗原为Penton蛋白抗原或重组有所述禽减蛋综合征病毒Penton蛋白基因的活载体。本专利技术首次发现，在禽减蛋综合征病毒壳粒表面含量极少的Penton蛋白具有良好的免疫原性，其制备的亚单位抗原或含有其重组基因的活载体均能在免疫后产生良好的免疫效力，对鸡和鸭提供100％的保护。术语“疫苗组合物”指含有禽减蛋综合征病毒免疫原性的药物组合物，该药物组合物可诱发、刺激或增强鸡、鸭只针对禽减蛋综合征病毒的免疫反应。术语“免疫量”应当理解为“免疫有效量”，又称免疫保护量或产生免疫应答的有效量，为可在接受者体内有效诱导免疫应答的抗原量，该量足以预防或改善疾病的体征或症状，包括不利的健康影响或其并发症。所述免疫应答可能足以用于诊断目的或其它试验，或可能适合用于预防疾病的征兆或症状，包括由病原体引起的感染所造成的不利的健康结果或其并发症。体液免疫力或由细胞介导的免疫力或此二者均可被诱导。动物对免疫原性组合物的免疫应答可通过例如测量抗体效价、淋巴细胞增殖分析而间接评估，或在以野生型毒株攻击后通过监测征兆或症状来直接评估，而该由疫苗提供的保护性免疫力可通过测量例如受试动物的临床征兆如产蛋量的减少、畸形蛋数量的增加、受试动物总体生理状况及总体健康和表现来评估。所述免疫应答可包括但不限于诱导细胞性和/或体液免疫力。术语“禽减蛋综合征病毒抗原”是指至少含有一种禽减蛋综合征病毒抗原形式的任何组合物，所述禽减蛋综合征病毒抗原可诱导、刺激或能抵抗禽减蛋综合征病毒感染的免疫应答，所述抗原形式包括但不限于灭活的、减毒的或亚单位的抗原。本专利技术所述的禽减蛋综合征病毒Penton蛋白抗原可以是重组表达的Penton蛋白亚单位抗原，其表达体系可以为原核表达系统、真核表达系统，也可以是通过人工合成的合成肽抗原。“亚单位抗原”指的是利用基因工程方法将病原体的保护性抗原基因克隆到原核或真核表达系统中，使其高效表达而制成的抗原。它比全病毒抗原引起副反应的可能性小。“合成肽抗原”指的是一种仅含免疫决定簇组分的小肽,即用人工方法按天然蛋白质的氨基酸顺序合成保护性短肽,与载体连接后加佐剂所制成的抗原。“活载体”指的是非致病微生物通过基因工程的方法使之携带并表达某种抗原或抗原决定簇的基因，产生免疫原性，非致病微生物可以是细菌和病毒，病毒活载体常作为载体的病毒有痘苗病毒、禽痘病毒、火鸡疱疹病毒、腺病毒、伪狂犬病毒、反转录病毒、慢病毒；细菌活载体可以是减毒沙门菌、卡介苗、减毒单核细胞李氏杆菌、减毒霍乱弧菌、减毒志贺氏菌、乳酸球菌、芽胚乳酸杆菌、高氏链球菌。作为本专利技术的一种实施方式，在本专利技术的疫苗组合物中，所述的禽减蛋综合征病毒Penton蛋白为SEQ.IDNO1所示的核苷酸序列编码的蛋白。作为本专利技术的一种实施方式，在本专利技术的疫苗组合物中，所述的禽减蛋综合征病毒Penton蛋白其编码基因具有SEQ.IDNO1所示的核苷酸序列或其简并序列。作为本专利技术的一种实施方式，在本专利技术的疫苗组合物中，所述禽减蛋综合征病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的禽减蛋综合征病毒抗原以及兽医学上可接受的载体；所述禽减蛋综合征病毒抗原为Penton蛋白抗原或重组有所述禽减蛋综合征病毒Penton蛋白基因的活载体。

【技术特征摘要】
1.一种用于预防禽减蛋综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的禽减蛋综合征病毒抗原以及兽医学上可接受的载体；所述禽减蛋综合征病毒抗原为Penton蛋白抗原或重组有所述禽减蛋综合征病毒Penton蛋白基因的活载体。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述的禽减蛋综合征病毒Penton蛋白为SEQ.IDNO1所示的核苷酸序列编码的蛋白。3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述禽减蛋综合征病毒Penton蛋白抗原含量为≥10.2μg/ml；优选地，所述所述禽减蛋综合征病毒Penton蛋白抗原含量为10.2μg/ml～40.8μg/ml；更优选地，所述所述禽减蛋综合征病毒Penton蛋白抗原含量为20.4μg/ml～30.6μg/ml。4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述重组有所述禽减蛋综合征病毒Penton蛋白基因的活载体为重组减毒沙门氏菌、重组新城疫病毒、重组痘病毒。5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述兽医学上可接受的载体包括佐剂，所述佐剂包括：(1)铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及RIBI佐剂系统、Blockco-polymer、SAF-M、单磷酰脂质A、Avridine脂质-胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS1314、胞壁酰二肽、Gel佐剂中的一种或几种；优选地，皂苷为QuilA、QS-21、GPI-0100；优选地，乳剂为SPT乳剂、MF59乳剂，或乳剂由油与乳化剂组合形成，乳剂可基于轻液体石蜡油、因烯烃寡聚产生的类异戊二烯油(如角鲨烷或角鲨烯油，烯烃，特别是异丁烯或癸烯低聚化产生的油)、酸或醇的含线性烷基的酯(更尤其植物油、油酸乙酯、丙二醇二-(辛酸酯/葵酸酯)、甘油三-(辛酸酯/葵酸酯)或丙二醇二油酸酯)、支链脂肪酸或醇的酯(尤其异硬脂酸酯)；乳化剂为非离子表面活性剂(尤其聚氧乙烯化脂肪酸(例如油酸)的酯、山梨聚糖的酯、二缩甘露醇的酯(如无水甘露醇油酸酯)、脂肪族二元醇的酯、甘油的酯、聚甘油的酯、丙二醇的酯以及油酸的酯、异硬脂酸的酯、蓖麻油酸的酯或羟基硬脂酸的酯，上述酯可经乙氧基化、脂肪醇和多元醇(例如油醇)的醚、聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物(尤其特别是L121))；优选地，丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物为交联的丙烯酸或甲基丙烯酸聚合物，尤其是与糖的聚链烯基醚或聚醇交联的化合物卡波姆、优选为卡波普974P、934P和971P；优选地，顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物为顺丁烯二酸酐与乙烯的共聚物EMA；优选地，所述佐剂为白油佐剂，制备油包水乳剂；所述佐剂的浓度范围是从5％到70％V/V，优选从30％到70％，更优选66％V/V。6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物还包括以下抗原的一种或多种：鸡新城疫病毒抗原、禽流感病毒抗原、...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，张盼涛，逄文强，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41